專利名稱：復合蛋白膠黏劑的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是一種復合蛋白膠黏劑的制備方法，具體是一種貽貝蛋白/大豆蛋白復合膠黏劑的制備方法。
背景技術：
蛋白質(zhì)膠粘劑是一種以蛋白質(zhì)作為主要原料的膠粘劑。按蛋白質(zhì)原料的來源不同，可分為動物性蛋白質(zhì)膠粘劑(如血膠、干酪素膠、皮骨膠等)和植物性蛋白質(zhì)膠粘劑(如豆粉膠、豆蛋白膠等)兩類[4]。蛋白質(zhì)作為膠粘劑使用由來已久。早在公元前3000 4000年古埃及人就開始使用雞蛋、動物膠等作膠粘劑，廣泛用于建筑領域。蛋白質(zhì)膠黏劑的原料都是可再生資源，對環(huán)境沒有污染，調(diào)膠設備簡單，調(diào)制和使用方便，干狀膠膠合強度較好，能滿足一般室內(nèi)使用的人造板的粘結要求。 大 蛋白是大宗農(nóng)廣品加工的主要副廣品，具有資源豐富、品質(zhì)優(yōu)良、價格低廉、可再生的優(yōu)點，但其粘接強度、耐水性、耐熱性等均不高，使用期限較短。但是，大豆蛋白屬于球形蛋白，它的耐水性和耐熱性均不理想。生活在廣袤的海洋中的貽貝類生物可以通過其足部分泌的使其牢固貼附在船底，海岸礁石，以及其它的海洋生物表面。研究表明這種粘附能力主要是因為貽貝含有6種不同的具有黏附能力的蛋白，貽貝體內(nèi)含有大量的3，4_ 二羥酚基丙氨酸，是產(chǎn)生粘附力的主要原因。對于貽貝蛋白的應用研究，一般是直接從貽貝足腺中提取天然粘附蛋白成分，例如，BioPolymers公司自20世紀80年代開始直接從貽貝足腺中提取并研制成組織培養(yǎng)用的粘合劑產(chǎn)品，可用于細胞培養(yǎng)過程中非貼壁細胞與培養(yǎng)皿的粘附。但由于貽貝足絲蛋白的分泌量很低，導致這種直接提取的粘合劑產(chǎn)品價格昂貴。盡管目前對于貽貝足絲蛋白已進行了大量的研究，但仍有許多未能解決的難題，例如，貽貝足絲蛋白分子量較大，水溶性差且很難結晶。本發(fā)明針對目前大豆蛋白膠粘劑開發(fā)的瓶頸和貽貝粘蛋白的研究現(xiàn)狀，將貝類蛋白質(zhì)的結構引入大豆蛋白中，以增強大豆蛋白膠粘劑的粘接效果及耐水性能，克服大豆蛋白耐水性差、力學性能差的缺點。在堿性條件下，用尿素誘導大豆蛋白分子變性，展開大豆蛋白質(zhì)分子結構，然后引入貽貝蛋白，通過貽貝蛋白的多巴結構和大豆蛋白質(zhì)分子之間形成穩(wěn)固的結合，得到一種具有高強度、高韌性、強防水性以及強黏附能力的貽貝蛋白/大豆蛋白復合膠粘劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種復合蛋白膠黏劑的制備方法，將貽貝蛋白質(zhì)的結構引入大豆蛋白中，得到一種具有膠粘強度高、耐水性好的貽貝蛋白/大豆蛋白復合膠黏劑，同時制備工藝簡單、成本較低。本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案為一種復合蛋白膠黏劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟I)貽貝蛋白粉的制備稱取干凈貽貝肉，加少量O. 015 O. 025mol · T1PBS緩沖溶液，用組織搗碎機搗碎；加入I. 5 2. 5倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液緩慢攪拌20 40min,在3 5°C提取20 28h，然后離心處理，取上清液；將提取的貽貝粗提液，在冰浴條件下，緩慢加入過量(NH4) 2S04細顆粒，邊加邊攪拌，待(NH4) 2S04細顆粒完全溶解，靜置20 28h后低溫高速離心，得貽貝(NH4)2SOjX淀蛋白，將沉淀蛋白用I. 5 2. 5倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液溶解，在3 5°C，PBS緩沖溶液透析過夜，冷凍干燥成粉，備用；2)配制堿尿復合變性劑取一定量的水，加入一定量的堿，使水溶液的pH值為9-10. 5，然后加入一定量的尿素，使尿素的濃度為2 3. 5mol/L得到堿尿復合變性劑；3)在上述堿尿復合變性劑中加入1，2-苯并異噻唑啉-3-酮，使1，2-苯并異噻唑啉-3-酮的質(zhì)量濃度為O. 09 O. 11% ;
4)將步驟I)制得的貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照貽貝蛋白粉占20 80%的的質(zhì)量比例(優(yōu)選40 80% )混勻后，加入到步驟3)配制的溶液中，使液固比為10 15mL/g，于室溫下攪拌2 4小時，使各組分充分均勻混合、反應，制得復合蛋白膠粘劑。作為改進，所述步驟I)中的離心處理為二次離心，轉(zhuǎn)速分別為4000 6000r · mirT1、13000 15000r · mirT1，時間分別為 10 20min、15 25min。作為優(yōu)選，所述步驟I)中的低溫高速離心是在3 5 °C轉(zhuǎn)速為13000 15000r · mirT1。作為優(yōu)選，所述步驟I)中貽貝肉組織搗碎機搗碎后加入2倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液，緩慢攪拌30min，在4°C提取24h。再優(yōu)選，所述步驟I)中貽貝(NH4) 2S04沉淀蛋白用2倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液溶解，在4°C，PBS緩沖溶液透析過夜。再優(yōu)選，所述步驟2)中的堿為氫氧化鈉。最后，所述步驟3)中I，2-苯并異噻唑啉-3-酮的質(zhì)量濃度為O. 1% . 0所述步驟4)中貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照貽貝蛋白粉占60%的質(zhì)量比例混勻。所述的PBS緩沖溶液優(yōu)選選用O. 015 O. 025mol · L—1。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于在堿性條件下，用尿素誘導大豆蛋白分子變性，將貽貝蛋白質(zhì)的結構引入大豆蛋白中，克服了大豆蛋白耐水性差、力學性能差，以及貽貝足絲蛋白水溶性差且很難結晶的缺點。本發(fā)明具有操作簡單、原料易得、成本較低、設備要求簡單的特點，制得的貽貝蛋白/大豆蛋白復合膠粘劑具有膠粘強度高，以及高韌性、強防水性的特點，適合工業(yè)生產(chǎn)。


圖I是本發(fā)明的工藝流程圖；圖2是膠粘強度測定中的木塊膠接示意圖(圖中箭頭表示膠粘強度測定時的拉伸方向)；圖3是不同濃度的尿素對SPI粘度的影響；圖4是不同濃度的尿素對SPI膠粘強度的影響；圖5是不同pH值對SPI粘度的影響；圖6是不同pH值對SPI膠粘強度的影響；圖7是不同比例混合的大豆蛋白和貽貝蛋白粉的膠粘強度變化；
圖8是不同比例混合的大豆蛋白和貽貝蛋白粉的粘度變化；圖9是不同攪拌時間對貽貝-大豆蛋白復合膠黏劑粘度的影響；圖10是不同攪拌時間對貽貝-大豆蛋白復合膠黏劑膠粘強度的影響。
具體實施例方式以下結合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。貽貝蛋白粉的制備貽貝洗凈用手術刀剔肉，稱取200g，加少量0.02mol · T1PBS(pH7. 4)緩沖溶液(以下簡稱PBS)用組織搗碎機搗碎，以適合掏碎為限；加入2倍液固比(v/w)的PBS緩 慢攪拌30min，4°C提取24h。4°C離心兩次，轉(zhuǎn)數(shù)分別為5000r · min_1,14000r · mirT1，時間分別為15min，20min取上清液，即為貽貝粗提物，測量體積；取貽貝粗提液，在冰浴條件下，緩慢加入過量(NH4)2SO4細顆粒，邊加邊攪拌。待(NH4)2SO4細顆粒完全溶解，靜置24h，14000r ·π η-1低溫高速離心，得貽貝(NH4)2SO4沉淀蛋白。沉淀用2倍液固比(v/w)的PBS溶解，40C，PBS透析過夜，冷凍干燥成粉，放于冰箱備用。實施例I取IOOOmL水，加入一定量的氫氧化鈉，使水溶液的pH值為10. 5，再加入一定量的尿素，使尿素的濃度為2mol/L，加入1，2-苯并異噻唑啉-3-酮(BIT)，使BIT的濃度為
O.1%，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照20/60的比例(重量比)混勻后，加入水中，使液固比為10mL/g，于室溫下攪拌3小時，得到復合蛋白膠粘劑，采用旋轉(zhuǎn)粘度計法測得膠粘強度為 4. 52MPa。實施例2取IOOOmL水，加入一定量的氫氧化鈉，使水溶液的pH值為10，再加入一定量的尿素，使尿素的濃度為3. 5mol/L，加入BIT，使BIT的濃度為O. I %，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照15/55的比例(重量比)混勻后，加入水中，使液固比為12mL/g，于室溫下攪拌4小時，得到復合蛋白膠粘劑，采用旋轉(zhuǎn)粘度計法測得膠粘強度為5. 31MPa。實施例3取IOOOmL水，加入一定量的氫氧化鈉，使水溶液的pH值為9，再加入一定量的尿素，使尿素的濃度為3mol/L，加入BIT，使BIT的濃度為O. I %，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照18/50的比例(重量比)混勻后，加入水中，使液固比為13!^/^，于室溫下攪拌3.5小時，得到復合蛋白膠粘劑，采用旋轉(zhuǎn)粘度計法測得膠粘強度為6. HMPa0實施例4取IOOOmL水，加入一定量的氫氧化鈉，使水溶液的pH值為9. 5，再加入一定量的尿素，使尿素的濃度為2. 5mol/L，加入BIT，使BIT的濃度為O. I %，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照20/55的比例(重量比)混勻后，加入水中，使液固比為15mL/g，于室溫下攪拌4小時，得到復合蛋白膠粘劑，采用旋轉(zhuǎn)粘度計法測得膠粘強度為3. 75MPa。實施例5取IOOOmL水，加入一定量的氫氧化鈉，使水溶液的pH值為9. 5，再加入一定量的尿素，使尿素的濃度為2. 5mol/L，加入BIT，使BIT的濃度為O. I %，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照75/50的比例(重量比)混勻后，加入水中，使液固比為15mL/g，于室溫下攪拌4小時，得到復合蛋白膠粘劑，采用旋轉(zhuǎn)粘度計法測得膠粘強度為4. 25MPa。實施例6取IOOOmL水，加入一定量的氫氧化鈉，使水溶液的pH值為9. 5，再加入一定量的尿素，使尿素的濃度為2. 5mol/L，加入BIT，使BIT的濃度為O. I %，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照200/50的比例(重量比)混勻后，加入水中，使液固比為16mL/g，于室溫下攪拌4小時，得到復合蛋白膠粘劑，采用旋轉(zhuǎn)粘度計法測得膠粘強度為5. 15MPa。下面結合實驗對各種工藝參數(shù)對復合膠黏劑性能的影響作具體說明一、實驗過程
I、尿素濃度考察在室溫下配制尿素溶液(lmol/L、3mol/L、5mol/L),尿素溶液的濃度是基于前人的研究選擇的，將5g大豆分離蛋白分散在50mL尿素溶液中，加入防腐劑，O. I % BIT (V/m, m為膠黏劑質(zhì)量)室溫下用恒溫磁力攪拌器攪拌3小時，轉(zhuǎn)速為1400r/min，使其充分反應。設置一個空白對照組，直接將5g大豆分離蛋白分散在50mL水中，加入O. 1% BIT室溫下用恒溫磁力攪拌器攪拌3小時，轉(zhuǎn)速為1400r/min，使其充分反應。2、pH對膠黏劑膠粘強度的影響在其他條件不變的情況下,按實驗3. 2. I配制最佳尿素溶液,并用O. 5mol/L氫氧化鈉溶液將尿素溶液PH分別調(diào)節(jié)至8，9，10，11，12，配制成堿尿復合變性劑。向5g大豆分離蛋白中加入50mL的堿尿復合變性劑，O. I % BIT (V/m)室溫下用恒溫磁力攪拌器攪拌3小時，轉(zhuǎn)速為1400r/min，使其充分反應。3、大豆蛋白和貽貝蛋白粉比例的考察分別以質(zhì)量比9 1、8 2、6 4、4 6、2 8的大豆蛋白和貽貝蛋白粉混合為研究對象，以1、2、3試驗中的最佳條件配置堿尿復合變性劑。向5g的各種比例的混合蛋白粉中加入50mL的堿尿復合變性劑，O. 1% BIT (V/m)室溫下用恒溫磁力攪拌器攪拌3小時，轉(zhuǎn)速為1400r/min，使其充分反應。4、攪拌時間考察保持其他條件不變，攪拌時間分別為lh，2h，3h，4h，6h。二、測試過程I、木板樣品的制備從市場上買的樓桃木，使用前在娃膠干燥器中存放。表面積為20 X 50mm2的木材表面用接在磨砂機上的三種不同規(guī)格的砂紙進行處理，加在砂紙上的力要與木板表面平行，確保木材表面不同部位受力相等，使同一塊木材表面各處的粗糙度均一。其中木板粗糙度值90、40、20表示用180、280和320目的砂紙?zhí)幚?，反映木塊表面的粗糙度水平，值越大代表木塊表面越粗糙。2、粘度的測定測定不同濃度(l、3、5mol/L)的尿素溶液處理下的SPI粘度，粘度的測定采用NDJ-79旋轉(zhuǎn)粘度計法用NDJ-79旋轉(zhuǎn)粘度計測定大豆分離蛋白與化學修飾后的大豆分離蛋白粘度。先估計試樣的粘度范圍，選用合適的轉(zhuǎn)子(使讀數(shù)在刻度盤的20%-80%范圍內(nèi))。將待測樣品倒入，同時將容器中的試樣和轉(zhuǎn)子用恒溫水浴恒溫至25°C，打開開關，待指針穩(wěn)定后讀出刻度盤上的讀數(shù)。
最終粘度=刻度盤讀數(shù)X轉(zhuǎn)子系數(shù)。3、膠粘強度的測定(I)按照圖2所示制備粘接后的木塊樣品。每塊木板的尺寸是3X20X50mm(高、寬和長)，每三塊木板膠接成一個木塊樣品。將制備的大豆蛋白膠粘劑滴到中間木塊的膠接面上，用另外兩塊木塊分別在涂布面積為20X20mm上將大豆蛋白膠粘劑鋪展直到表面完全被潤濕。將涂了膠的木塊在室溫下放置IOmin后，用手將涂了膠的木塊如圖2所示搭粘在一起，放置在O. 5型平板硫化機上熱壓lOmin，溫度為120 C，壓力為IMPa，冷卻后放在聚乙纟布袋子中室溫下放直4d。(2)由WDT-IO型微機控制電子萬能實驗測定木材樣品的膠粘強度，拉伸速度為10mm/min。記錄拉斷樣品所用的最大拉力(N)，每個樣品的數(shù)據(jù)是6個平行樣的測量平均
值。膠粘強度用下列公式計算得出
粘度強度(MPa) =-^^^2-三、實驗結果I、不同尿素濃度變性大豆膠黏劑粘度性能測定由圖3可以看出，大豆分離蛋白(SPI)經(jīng)不同濃度尿素修飾后，蛋白質(zhì)水溶液粘度先升高后下降當尿素濃度小于3mol/L時，隨著尿素濃度的增加，粘度也越來越大；當尿素濃度大于3mol/L時，隨著尿素濃度的增加，粘度反而越來越小。當尿素濃度為3mol/L時，大豆蛋白膠粘劑粘度最大。實驗結果說明，尿素加入使蛋白質(zhì)分子的空間結構部分發(fā)生改變。因為尿素可與大豆蛋白的羥基相互作用，破壞蛋白質(zhì)中的氫鍵，從而破壞蛋白質(zhì)的二級結構。尿素是極性分子，當少量尿素加入蛋白溶液中時，尿素分子能與水分子迅速形成分子間氫鍵，使蛋白質(zhì)分子周圍環(huán)境極性發(fā)生變化，影響蛋白質(zhì)分子之間的疏水基相互作用，蛋白質(zhì)分子展開，更多的非極性基團暴露，表現(xiàn)為β_折疊含量降低，無規(guī)卷曲含量增加。即尿素的添加使大豆蛋白β_折疊結構部分轉(zhuǎn)化為無規(guī)卷曲和β_轉(zhuǎn)角。疏水基團的暴露使得與底物間的作用力增強，同時更多的帶負電的基團在堿性環(huán)境中可用發(fā)揮作用。帶電荷的基團間的靜電相互作用增大，因此蛋白質(zhì)分子間的相互作用增強，表現(xiàn)為SPI漿狀物的粘度增加。當尿素濃度達到5mol/L時，溶液粘度低于空白樣，這可能是因為高濃度的尿素引起了 SPI的過度變性，蛋白的空間結構幾乎被徹底破壞。如圖4所示，尿素濃度為lmol/L和3mol/L變性大豆分離蛋白時，大豆分離蛋白的粘接強度有所提高，且尿素濃度在lmol/L膠粘強度最大，但是當?shù)蛩貪舛却笥趌mol/L大豆分離蛋白的粘接強度是逐步降低的，當尿素濃度為5mol/L時，膠粘強度甚至低于蛋白質(zhì)變性之前。影響蛋白質(zhì)膠粘強度的因素很多，分析原因主要為1、考慮大豆分離蛋白膠黏劑的粘度影響當?shù)鞍踪|(zhì)膠黏劑被涂布在木材表面時，如果尿素濃度小于lmol/L時，則膠黏劑粘度太低，膠黏劑很容易滲透到木材內(nèi)部，并產(chǎn)生流掛現(xiàn)象，干燥速度過快，膠粘效果變差；當尿素濃度大于3mol/L時，膠黏劑粘度太高，又不容易滲透到木材內(nèi)部，只能在木材表面產(chǎn)生膠粘作用。所以只是尿素濃度在lm0l/L-3m0l/L時，變性大豆分離蛋白才表現(xiàn)出優(yōu)于未變性大豆分離蛋白的膠粘性能。所以濃度為lmol/L的尿素變形大豆蛋白質(zhì)得到的膠黏劑膠粘強度最佳。2、不同pH下尿素濃度變性大豆蛋白膠黏劑性能測定如圖5所示，堿性環(huán)境下，膠粘液的粘度相對于尿素變性和很大提升。當pH在8-9時，粘度變化不大，穩(wěn)定在4000mPa/s，當pH從9升到10. 5左右時，膠粘液粘度急劇增大。之后PH繼續(xù)增加時，膠粘液粘度隨之反而減小。堿性條件下，蛋白質(zhì)結構變得疏松，不對稱性加大，運動阻力增加，還有堿性條件下，蛋白質(zhì)肽鏈打開，各類極性基團暴露和互相作用，蛋白質(zhì)分子相互交聯(lián)，所以蛋白質(zhì)膠粘液就單由尿素變性時，粘度增加很大。但是當堿性太強，會使蛋白質(zhì)分子過分水解，大分子肽含量急劇減少，分子量降低，宏觀表現(xiàn)為粘度的急劇減小。由圖6可以看出，當pH < 9. 5時，大豆膠黏劑的膠粘強度隨著ph增大幾乎變化。隨著pH的進一步增大,膠粘強度明顯增大，當pH = 11,膠粘強度達到最大值。當pH >11時 膠粘強度快速降低。蛋白質(zhì)分子在堿性條件下的多肽鏈打開，使蛋白質(zhì)分子的無序度增加，蛋白質(zhì)亞基及其內(nèi)部包圍的疏水基團被暴露，這使得蛋白質(zhì)分子和木材的表面接觸面積增力口，宏觀上表現(xiàn)為膠黏劑對木材表面的膠接能力增大。但是當溶液堿性進一步加大，蛋白質(zhì)肽鏈進一步展開，肽鏈上的極性基團相互交聯(lián)，整個膠體體系粘度加大，膠粘強度下降。如果堿性太強，會使蛋白質(zhì)分子的肽鏈過度水解，膠粘強度急劇下降。3、不同比例貽貝-大豆復合膠黏劑性能測定性能測定總體來說在堿性條件下，將貽貝蛋白質(zhì)和大豆蛋白復合，都會在很大程度增強大豆蛋白膠粘劑的膠粘效果。如圖7、8示，當貽貝占混合蛋白比低于60%，混合膠黏劑的膠粘強度及粘度以隨著貽貝占比增加而增加，在貽貝含量為60%時達到最大值。當貽貝含量超過60%時，混合膠黏劑膠粘強度及粘度卻逐漸下降。因為貽貝的粘結主要依賴體內(nèi)的多種粘附蛋白，而這些粘附蛋白中含羥基的氨基酸占高達60% 70%，多巴(DOPA，L-3,4- 二羥基苯丙氨酸)具有良好的耐水性和粘接力。堿性條件可以打開蛋白質(zhì)肽鏈，使蛋白質(zhì)分子的極性基團暴露。低濃度的尿素可以快速的和結水分子形成氫鍵，和蛋白質(zhì)分子形成競爭。而且，尿素分子因具有氧原子和氫原子，可以和蛋白質(zhì)分子中的羥基作用，從而破壞了蛋白質(zhì)分子中的氫鍵，使其空間結構解體，使蛋白質(zhì)巰基(SH)暴露。此時貽貝蛋白分子可以有效地和大豆蛋白質(zhì)分子結合，交聯(lián)。此過程主要是游離的大豆蛋白和多巴(D0PA，L-3，4-二羥基苯丙氨酸)的結合。
廣NH2-HCI 廣 NH2-FTCI廣 N
OHO ^ PhOH但是當加入貽貝蛋白過多時因為其粘附蛋白含量有限，使得形成的有效膠黏劑總量下降，所以膠粘能力有所下降。4、不同攪拌時間的貽貝-大豆復合膠黏劑性能測定從9圖中可看出，隨著攪拌時間的延長，粘度先增加后減小。當攪拌時間為3小時，達到最大為15.6pa.s。開始時，攪拌使得蛋白質(zhì)分子得到舒展，無序度增加，分子運動阻力加大，同時攪拌也增大了分子交聯(lián)的幾率，所以開始時粘度隨時間增加而增加；但過長時間的機械攪拌也會破壞蛋白質(zhì)分子結構被破壞，大分子肽鏈不復存在，分子量減小，分子交聯(lián)減小，所以表現(xiàn)為粘度下降。由圖10可知，膠粘強度的變化和其粘度變化趨勢相同。當攪拌時間從I 3小時，膠粘強度隨之增強；攪拌時間> 3小時后膠粘強度隨時間的延長不斷減小。可能原因為，一方面處理時間過長導致粘度變小，當膠黏劑涂布在木材表面是容易滲透到木材內(nèi)部，木材表面膠層太薄、太少，干燥過快，粘結性能不佳；反應時間為3小時時，膠黏劑流動性正 好合適，所以表現(xiàn)出很好的粘結能力。用于變性蛋白質(zhì)的尿素極易揮發(fā)，攪拌時間的隨著延長，揮發(fā)過多，使得變形效果變差，膠黏劑膠粘強度反而下降。
權利要求
1.一種復合蛋白膠黏劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟 1)貽貝蛋白粉的制備稱取干凈貽貝肉，加少量O.015 O. 025mol -T1PBS緩沖溶液，用組織搗碎機搗碎；加入I. 5 2. 5倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液緩慢攪拌20 40min，在3 5°C提取20 28h，然后離心處理，取上清液；將提取的貽貝粗提液，在冰浴條件下，緩慢加入過量(NH4)2SO4細顆粒，邊加邊攪拌，待(NH4)2SO4細顆粒完全溶解，靜置20 28h后低溫高速離心，得貽貝(NH4)2SOjX淀蛋白，將沉淀蛋白用I. 5 2. 5倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液溶解，在3 5°C，PBS緩沖溶液透析過夜，冷凍干燥成粉，備用； 2)配制堿尿復合變性劑取一定量的水，加入一定量的堿，使水溶液的PH值為9-10.5，然后加入一定量的尿素,使尿素的濃度為2 3. 5mol/L得到堿尿復合變性劑； 3)在堿尿復合變性劑中加入1，2_苯并異噻唑啉-3-酮，使1，2_苯并異噻唑啉-3-酮 的質(zhì)量濃度為O. 09 O. 11% ; 4)將步驟I)制得的貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照貽貝蛋白粉占20 80%的質(zhì)量比例混勻后，加入到步驟3)配制的溶液中，使液固比為10 15mL/g，于室溫下攪拌2 4小時，使各組分充分均勻混合、反應，制得復合蛋白膠粘劑。
2.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的離心處理為二次離心，轉(zhuǎn)速分別為4000 6000r ^min'13000 15000r .mirT1，時間分別為10 20min, 15 25min。
3.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的低溫高速離心是在3 5°C轉(zhuǎn)速為 13000 15000r · mirT1。
4.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中貽貝肉組織搗碎機搗碎后加入2倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液，緩慢攪拌30min，在4°C提取24h。
5.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中貽貝(NH4)2SO4沉淀蛋白用2倍液固比(v/w)的PBS緩沖溶液溶解，在4°C，PBS緩沖溶液透析過夜。
6.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的堿為氫氧化鈉。
7.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟3)中1，2_苯并異噻唑啉-3-酮的質(zhì)量濃度為O. 1% .
8.根據(jù)權利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟4)中貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照貽貝蛋白粉占60 %的質(zhì)量比例混勻。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復合蛋白膠黏劑的制備方法，步驟為先制備貽貝蛋白粉，以水為溶劑，依次加入堿、尿素，使得pH值為9-10.5，尿素的濃度為2-3.5mol/L，再加入BIT，使BIT的濃度為0.1％，再將貽貝蛋白粉與大豆蛋白按照貽貝蛋白粉占20～80％的質(zhì)量比例混勻后，加入水中，使液固比為10-15mL/g，于室溫下攪拌2-4小時，得到復合蛋白膠粘劑。本發(fā)明在堿性條件下，用尿素誘導大豆蛋白分子變性，將貽貝蛋白質(zhì)的結構引入大豆蛋白中，克服了大豆蛋白耐水性差、力學性能差，以及貽貝足絲蛋白水溶性差且很難結晶的缺點。本制備方法具有操作簡單、原料易得、成本較低、設備要求簡單的特點，制得的貽貝蛋白/大豆蛋白復合膠粘劑具有膠粘強度高，以及高韌性、強防水性的特點，適合工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C08H1/00GK102965070SQ201110262489
公開日2013年3月13日 申請日期2011年8月31日 優(yōu)先權日2011年8月31日
發(fā)明者歐陽小琨, 楊立業(yè), 吳偉建, 李維娜, 萬雄 申請人:浙江海洋學院