專利名稱：一種基于谷物蛋白的、用于大規(guī)模培養(yǎng)細胞的微載體，制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及培養(yǎng)細胞用的微載體，特別是涉及一種基于谷物醇溶蛋白、用于大規(guī)模培養(yǎng)細胞的微載體、制備方法及用途，用于疫苗、抗體及組織工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
微載體培養(yǎng)技術(shù)是目前公認的最有發(fā)展前途的一種用于動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點，容易放大，條件可控。自1962年Capstile成功地大規(guī)模懸浮培養(yǎng)BHK21細胞(Capsitick PB et al.， 1962)，以及1967年Van Wezel (Van Wezel AL et al.，1967)首次成功應(yīng)用微載體培養(yǎng)貼壁動物細胞以來，至今國際市場上出售的微載體商品類型已達十幾種以上，其中常用的商品化微載體有三種Cytodexl、2、3，Cytopore 和 Cytoline。早期微載體多采用合成聚合物，如聚羥乙基丙烯酸甲酯(PHEMA)、葡聚糖等。合成聚合物制備的微載體重復(fù)性和力學(xué)性能可以達到較高水平，但缺乏細胞識別位點，影響細胞在其表面粘附、生長。天然聚合物及其衍生物因其取材方便、生物相容性好且價格低廉， 有望取代傳統(tǒng)微載體制備材料。例如明膠、膠原、纖維素、甲殼素及其衍生物以及海藻酸鈉等。膠原是一類可引導(dǎo)組織再生的生物材料，低抗原性、可參與組織愈合過程。Hillegas 等(US 4994388)在聚苯乙烯微球表面包覆一層膠原后表現(xiàn)出很好的效果。殼聚糖是甲殼質(zhì)脫乙酰后的產(chǎn)物，其分子鏈之間可以形成許多氫鍵，分子中β_(1，4)糖苷鍵為其提供剛性和穩(wěn)定性；氨基提供弱正電性；乙?；峁┦杷?；羥基具有良好的親水性，但又不溶解于水。用殼聚糖制備的細胞培養(yǎng)微載體已有報道(Tigli RS et al.，2009)。藻酸鹽是帶有二價陰離子的天然線性多糖，是由α-L-古洛糖醛酸和β-D甘露糖醛酸殘基組成的共聚物。研究表明，培養(yǎng)在海藻酸鹽載體上的軟骨細胞可以合成與軟骨材料相似的胞外基質(zhì)(Hauselmarm HJ，1996)。除單種材料制備微載體外，還有兩種及以上混合材料制備的微載體，如殼聚糖和明膠混合微載體(CN1321175C)，絲素蛋白和殼聚糖大孔微載體 (CN101624472A)，殼聚糖和多聚磷酸鈉多孔微載體(CN101844059A)。天然聚合物材料在組織工程化微顆粒方面也有應(yīng)用(CN101195044A)。微載體的制備方法主要有相分離法、乳化_溶劑揮發(fā)法、冷凍法和噴霧法。其中， 乳化-溶劑揮發(fā)法應(yīng)用最為廣泛，其法是將所用材料溶解在一種溶劑中，然后注入攪拌中的反相溶劑里乳化成所用材料的乳液，通過揮發(fā)掉原溶劑形成微載體。除此以外，有采用銳孔噴射器的方法制備多孔微球(CN1253556C)，同軸高壓靜電技術(shù)和冷凍干燥法制備絲素蛋白微載體(CN101972481A)。玉米醇溶蛋白(zein)由于其良好的生物降解性、生物相容性和可加工性，已有報道應(yīng)用于藥物釋放載體和食品工業(yè)中(US patent 5271961，5145702)，并可以制成 50-2000nm的微粒子膜和用于組織工程材料(CN 1401659A，CN1775307，CN1555892)。其中 US 5271961采用了相分離的制備方法，獲得的微球直徑小于30 μ m。US 5145702所用溶劑包括有機溶劑和強堿溶液，通過相分離或用酸中和形成沉淀的方法制備微球，其直徑小于 10 μ m。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供實心、空心、大孔或磁性微載體，其以生物相容性良好的谷物醇溶蛋白為原料，制備出既具有細胞親和性、有助于細胞粘附、支持大量細胞生長， 又能長期維持細胞活性和細胞功能，且成本低廉的、能夠用于大規(guī)模培養(yǎng)細胞的微載體。本發(fā)明的另一目的在于提供除能夠支持細胞生長外，還能滿足在力學(xué)、形態(tài)、滅菌、可降解、無熱源、可回收等多方面要求的微載體制備方法，該方法操作簡單，成本低廉， 易于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的又一目的在于提供上述微載體在大規(guī)模動物細胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的微載體一是呈球形或類球形，直徑為50-2000 μ m 的顆粒。推薦為150-2000 μ m的顆粒，尤其推薦為200-2000 μ m的顆粒。其內(nèi)部為空心多孔，表面為光滑或具有大孔，可以是實心、空心或磁性的微載體。是由谷物醇溶蛋白在一定條件下制得。所述的谷物醇溶蛋白是玉米醇溶蛋白或小麥醇溶蛋白。在本發(fā)明中，可通過下述方法制備所述微載體制備方法一稱取一定質(zhì)量玉米醇溶蛋白固體粉末，溶解于氫氧化鈉溶液，待完全溶解后，滴入含表面活性劑的鹽酸溶液中，液滴即可固化成微球，將固化后的微球在鹽酸溶液中浸泡后取出，用二次水洗滌，反復(fù)用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至中性，進行表面固化處理，干燥后得到成品微球。制備方法二 稱取一定質(zhì)量玉米醇溶蛋白固體粉末，置于容器中，高濕環(huán)境下高溫高壓固化處理，經(jīng)行星式球磨機磨制成球，過篩分選，表面固化，調(diào)節(jié)PH，干燥后得到成品微球。制備方法三稱取一定質(zhì)量玉米醇溶蛋白固體粉末，溶解于乙醇-水溶液后制成薄膜，粉碎或切割，過篩后得到所需大小顆粒，高塔造粒或分散于特定介質(zhì)表面，在高溫高壓處理下進行固化，調(diào)節(jié)PH，干燥后得到成品微球。制備方法一可以進一步的描述為通過下述步驟獲得方法一a)將谷物醇溶蛋白溶于pH為11-13的堿溶液，使得終濃度達到30_100g/L，得到谷物醇溶蛋白溶液；超聲15分鐘除去溶液中的氣泡；b)制備過程中，調(diào)整谷物醇溶蛋白溶液濃度和液滴體積得到不同大小顆粒，加入濃度為0-3(^八％或0-3(^八％的增塑劑；推薦加入濃度為0. 1-2(^八％或0. 1-20 八％的增塑劑；所述的增塑劑為油酸、硬脂酸、檸檬酸或甘油；c)將醇溶蛋白的堿溶液緩慢滴入pH為1-5、含有0. 001-0. 1 八％表面活性劑的酸溶液中，醇溶蛋白的堿溶液液滴體積為1-50微升，固化形成直徑在200-2000 μ m的表面光滑但空心多孔或者表面大孔的微球；所述的表面活性劑包括但不限于十六烷基三甲基溴化銨和十二烷基硫酸鈉；
d)將制成的微載體在鹽酸溶液中浸泡5-30分鐘；然后用0. lmol/L氫氧化鈉溶液，反復(fù)調(diào)節(jié)PH至中性；e)在攪拌條件下，將帶有微載體的溶液加熱到70-90°C，冷卻后再加熱，重復(fù)一到三次進行表面固化，用水洗滌，低溫干燥，滅菌，得到空心多孔或大孔微載體，粒徑范圍為 200-2000 μ m0制備方法二可以進一步的描述為通過下述步驟獲得a)將谷物醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95 %的醇溶液中，使得終濃度達到 30-500g/L，得到谷物醇溶蛋白的醇溶液；b)制備成厚度為50-1000 μ m的薄膜；c)將b)獲得的薄膜在100_121°C，0. l_lMPa，處理1_30分鐘，進行表面固化；d)粉碎機粉碎或者切割機切割，過篩，得到50-1000 μ m的立方體的粗顆粒，再進行球磨，獲得粒徑范圍為50-1000 μ m的圓整的球形微載體；或者e)將b)獲得的薄膜在高塔造粒，過篩，分散于玻璃、硫酸紙或者疏水介質(zhì)表面進行造粒，固化條件為在100-121 、 0. I-IMPa下，處理1-30分鐘，最后干燥收獲圓整的球形微載體，粒徑范圍為50-1000 μ m ；制備方法三可以進一步的描述為通過下述步驟分別獲得a)將谷物醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95 %的醇溶液中，使得終濃度達到 30-500g/L，得到谷物醇溶蛋白的醇溶液；b)用噴霧干燥、高塔造粒但不限于這兩種方法進行造粒；c)球磨后過篩；d)在100-121 °C、0. I-IMPa下，處理1_30分鐘，進行表面固化，干燥。所述的堿溶液推薦為NaOH溶液；所述的酸溶液推薦為HCl溶液；所述的谷物醇溶蛋白推薦為玉米醇溶蛋白。本發(fā)明的方法中，在100_121°C和0. I-IMPa下處理谷物醇溶蛋白1_30分鐘，進行表面固化和聚合，獲得的微載體密度為1-1. 3g/cm3。本發(fā)明的方法中，獲得的微載體可以進行滅菌后處理以鈷60射線輻照、紫外線輻照、或者是在將微載體以蒸餾水或者PBS溶液溶脹后，高溫滅菌。采用本發(fā)明所述的處理方法旨在使所制備的微載體能夠抵御濕熱滅菌，不發(fā)生連結(jié)或聚集等現(xiàn)象。而且，微載體能夠抵御胰酶消化，減少細胞回收環(huán)節(jié)其他成分的混入，保證后期抗體、疫苗制備的純度。并且不影響細胞再貼壁。本發(fā)明提供的微載體可以在上述微載體一的基礎(chǔ)上，對微載體表面進行化學(xué)修飾，使其帶有促進細胞黏附的正電荷；或交聯(lián)膠原蛋白等成分，提高與細胞的親和力。本發(fā)明提供的微載體以谷物醇溶蛋白為主要成分，因為谷物醇溶蛋白已經(jīng)被證明具備良好的生物相容性、難溶于水和可降解的特性。并且通過本發(fā)明，獲得了在濕態(tài)下有著優(yōu)良力學(xué)性能的微載體，可以較長時間維持微載體的結(jié)構(gòu)，抵抗攪拌等機械外力，滿足了既支持大量細胞生長，又能長期維持細胞活性和功能的要求，可用于高密度培養(yǎng)動物細胞，生產(chǎn)疫苗和抗體，還能用于組織工程領(lǐng)域。


圖1、表面光滑的玉米醇溶蛋白微載體(500-1000 μ m)及其內(nèi)部空心結(jié)構(gòu)。
圖2、表面光滑的玉米醇溶蛋白微載體(500-1000 μ m)表面細胞的掃描電鏡圖片。圖3、大孔的玉米醇溶蛋白微載體( 800 μ m)內(nèi)外結(jié)構(gòu)。圖4、大孔的玉米醇溶蛋白微載體(150-400 μ m)孔內(nèi)NIH3T3細胞的光鏡圖片。圖5、切割成型的微載體(200-400 μ m)的光鏡圖片。圖6、切割成型的微載體(200-400 μ m)與Vero細胞培養(yǎng)第2天和第6天時，熒光倒置顯微鏡觀察。圖7、制備方法一的工藝流程圖。圖8-9、制備方法二和三的工藝流程圖。圖10、去熱源處理前(Control)、后(D印yrogenation)，Vero細胞的生長曲線。縱軸為每毫升的細胞數(shù)。圖11、胰酶處理對Vero細胞再貼壁的影響。對照為商品cytodexl，縱軸為單位面積的細胞再貼壁數(shù)。具體實施方法以下通過具體實施例進一步詳細說明本發(fā)明。本發(fā)明提供的可用于大規(guī)模培養(yǎng)細胞的谷物醇溶蛋白微載體，可通過如下方法得到。實施例一1、玉米醇溶蛋白溶液的制備將2-3克玉米醇溶蛋白粉末溶解于30ml氫氧化鈉 (0. lmol/L)溶液中，攪拌至完全溶解，超聲15分鐘除去溶液中的氣泡；2、鹽酸溶液的制備制成100ml (0.01-lmol/LHCl，0. OOlg表面活性劑)鹽酸溶液；3、玉米醇溶蛋白微球的制備將玉米醇溶蛋白溶液通過壓力擠出，形成液滴，液滴體積為1-50微升，滴入鹽酸溶液，利用重力作用，液滴即可固化成微載體；4、酸液浸泡將制成的微載體在鹽酸溶液中浸泡5-30分鐘；5、pH調(diào)節(jié)用0. lmol/L氫氧化鈉溶液，反復(fù)調(diào)節(jié)pH至中性；6、表面固化在攪拌條件下，將帶有微載體的溶液加熱到70-90°C，冷卻后再加熱，重復(fù)一到三次；7、洗滌取出制備的微載體，反復(fù)用二次水沖洗，去除表面殘留的鹽酸溶液。8、低溫干燥，得到表面光滑且空心多孔微載體，粒徑范圍為150-2000 μ m(圖1、 2)；9、將微載體以蒸餾水或者PBS溶液溶脹后，高溫滅菌，備用。實施例二1、玉米醇溶蛋白溶液的制備將1-2克玉米醇溶蛋白粉末溶解于30ml氫氧化鈉 (0. lmol/L)溶液中，攪拌至完全溶解，鼓氣1-10分鐘；2、鹽酸溶液的制備制成100ml (0.01-lmol/LHCl，0. OOlg表面活性劑)鹽酸溶液；3、玉米醇溶蛋白微球的制備吸取玉米醇溶蛋白上層溶液(含氣泡)，將玉米醇溶蛋白溶液通過壓力擠出，形成液滴，液滴體積為1-50微升，滴入鹽酸溶液，利用重力作用， 液滴即可固化成微載體；4、酸液浸泡將制成的微載體在鹽酸溶液中浸泡5-30分鐘；
5、pH調(diào)節(jié)用0. lmol/L氫氧化鈉溶液，反復(fù)調(diào)節(jié)pH至中性；6、表面固化在攪拌條件下，將帶有微載體的溶液加熱到70-90°C，冷卻后再加熱，重復(fù)一到三次；7、洗滌取出制備的微載體，反復(fù)用二次水沖洗，去除表面殘留的鹽酸溶液。8、低溫干燥，得到大孔微載體，粒徑范圍為150-2000 μ m(圖3、4)；9、鈷60滅菌后備用。實施例三1、玉米醇溶蛋白溶液的制備將2-3克玉米醇溶蛋白粉末和0. 1-0. 3g氧化鐵粉末溶解于30ml氫氧化鈉(0. lmol/L)溶液中，攪拌至完全溶解，鼓氣1_10分鐘；2、鹽酸溶液的制備制成100ml (0.01-lmol/LHCl，0. OOlg表面活性劑)鹽酸溶液；3、玉米醇溶蛋白微球的制備將玉米醇溶蛋白溶液通過壓力擠出，形成液滴，液滴體積為1-50微升，滴入鹽酸溶液，利用重力作用，液滴即可固化成微載體；4、酸液浸泡將制成的微載體在鹽酸溶液中浸泡5-30分鐘；5、pH調(diào)節(jié)用0. lmol/L氫氧化鈉溶液，反復(fù)調(diào)節(jié)pH至中性；6、表面固化在攪拌條件下，將帶有微載體的溶液加熱到70-90°C，冷卻后再加熱，重復(fù)一到三次；7、洗滌取出制備的微載體，反復(fù)用二次水沖洗，去除表面殘留的鹽酸溶液。8、低溫干燥，得到空心磁性微載體，粒徑范圍為500-2000 μ m ；9、紫外滅菌后備用。實施例四1、玉米醇溶蛋白溶液的制備將玉米醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95%的醇溶液中，使得終濃度達到30-500g/L，得到蛋白的醇溶液，真空脫氣；2、玉米醇溶蛋白薄膜的制備在模板上反復(fù)涂布，得到50-1000 μ m厚度均勻的薄膜；3、玉米醇溶蛋白薄膜的固化100-121 ，0. l_lMPa，處理1_30分鐘，進行表面固化，干燥收獲；4、玉米醇溶蛋白顆粒的制備將固化后的薄膜在水溶液中浸泡1-30分鐘，待軟化后，使用切割機切割成邊長為50-1000 μ m的立方體；5、玉米醇溶蛋白顆粒的表面整形將切割好的立方體過篩，再進行1-12小時的球磨，最終得到較為圓整的球形微載體。粒徑范圍為50-1000μπι(圖5、6)。6、紫外滅菌后備用。實施例五1、小麥醇溶蛋白溶液的制備將小麥醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95%的醇溶液中，使得終濃度達到30-500g/L，得到蛋白的醇溶液，真空脫氣；2、小麥醇溶蛋白薄膜的制備在模板上反復(fù)涂布，得到50-1000 μ m厚度均勻的薄膜；3、小麥醇溶蛋白顆粒的制備將干燥后的薄膜在水溶液中浸泡1-30分鐘，待軟化后，使用切割機切割成邊長為50-1000 μ m的立方體；
4、小麥醇溶蛋白顆粒的固化100-121 ，0. l_lMPa，處理1_30分鐘，進行表面固化，干燥收獲；5、小麥醇溶蛋白顆粒的表面整形將切割好的立方體過篩，再進行1-12小時的球磨，最終得到較為圓整的球形微載體。粒徑范圍為50-1000μπι。6、將微載體以蒸餾水或者PBS溶液溶脹后，高溫滅菌。實施例六1、玉米醇溶蛋白溶液的制備將谷物醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95%的醇溶液中，使得終濃度達到30-500g/L，得到谷物醇溶蛋白的醇溶液，真空脫氣；2、玉米醇溶蛋白薄膜的制備在模板上反復(fù)涂布，得到50-1000 μ m厚度均勻的薄膜；3、玉米醇溶蛋白顆粒的制備粉碎機將干燥后的薄膜粉碎，過篩得到不同大小顆粒；4、玉米醇溶蛋白顆粒的固化將上步得到的顆粒均勻并不相互接觸的分散于玻璃、硫酸紙或者疏水介質(zhì)表面，100-121 ，0. 1-lMPa，處理1_30分鐘，進行表面固化，干燥收獲，最終得到較為圓整的球形微載體。粒徑范圍為50-1000μπι。5、鈷60滅菌后備用。實施例七1、玉米醇溶蛋白溶液的制備將谷物醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95%的醇溶液中，使得終濃度達到30-500g/L，得到谷物醇溶蛋白的醇溶液，真空脫氣；2、玉米醇溶蛋白薄膜的制備在模板上反復(fù)涂布，得到50-1000 μ m厚度均勻的薄膜；3、玉米醇溶蛋白顆粒的制備粉碎機將干燥后的薄膜粉碎，過篩得到不同大小顆粒；4、玉米醇溶蛋白顆粒的固化將上步得到的顆粒均勻噴灑于充滿蒸汽的反應(yīng)塔中，100-121 ，0. 1-lMPa，處理2秒鐘-30分鐘，進行表面固化，干燥收獲，最終得到較為圓整的球形微載體。粒徑范圍為50-1000 μ m。5、將微載體以蒸餾水或者PBS溶液溶脹后，高溫滅菌。實施例八1、所得微載體經(jīng)0. lmol/L氫氧化鈉溶液浸泡24小時，除去內(nèi)毒素；2、調(diào)節(jié)pH至中性；3、將微載體以蒸餾水或者PBS溶液溶脹后，高溫滅菌。4、經(jīng)過去熱源處理的微載體與Vero細胞培養(yǎng)，其細胞增殖速率不受影響(圖10)。實施例九1、所得微載體經(jīng)0. 25 %胰酶溶液消化2小時；2、消化處理的微載體在Vero細胞培養(yǎng)過程中的細胞再貼壁及其后的增殖速率與商業(yè)化產(chǎn)品Cytodex 1無顯著差異(圖11)。
權(quán)利要求
1.一種由谷物醇溶蛋白制備的用于細胞大規(guī)模培養(yǎng)的微載體，其特征是所述的該微載體是表面為光滑或具有大孔、內(nèi)部為空心、多孔或?qū)嵭慕Y(jié)構(gòu)的直徑為50-2000 μ m顆粒。
2.如權(quán)利要求1所述的由谷物醇溶蛋白制備的用于細胞大規(guī)模培養(yǎng)的微載體，其特征是所述的微載體的直徑為150-2000 μ m顆粒。
3.如權(quán)利要求1或2所述的由谷物醇溶蛋白制備的用于細胞大規(guī)模培養(yǎng)的微載體，其特征是所述的谷物醇溶蛋白是玉米醇溶蛋白或小麥醇溶蛋白；所述的微載體呈球形或類球形。
4.一種權(quán)利要求1或2所述的微載體制備方法，其特征通過方法一、二或者三的以下步驟分別獲得方法一a)將谷物醇溶蛋白溶于pH為11-13的堿溶液，使得終濃度達到30-100g/L，得到谷物醇溶蛋白的堿溶液；超聲15分鐘除去溶液中的氣泡；b)制備過程中，調(diào)節(jié)谷物醇溶蛋白溶液濃度和液滴體積得到不同大小的顆粒，加入濃度為0. 1-2(^八％或0. 1-20 八％的增塑劑；所述的增塑劑為油酸、硬脂酸、檸檬酸或甘油；c)將醇溶蛋白的堿溶液緩慢滴入pH為1-5、含有0.001-0.表面活性劑的酸溶液中，醇溶蛋白的堿溶液液滴體積為1-50微升，固化形成直徑在150-2000 μ m的微球；所述的表面活性劑包括但不限于十六烷基三甲基溴化銨和十二烷基硫酸鈉；d)將制成的微載體在鹽酸溶液中浸泡5-30分鐘；然后用0.lmol/L氫氧化鈉溶液，反復(fù)調(diào)節(jié)PH至中性；e)在攪拌條件下，將帶有微載體的溶液加熱到70-90°C，冷卻后再加熱，重復(fù)一到三次進行表面固化，用水洗滌，低溫干燥，滅菌，得到表面光滑、內(nèi)部空心多孔或者內(nèi)外均大孔的微載體，粒徑范圍為150-2000 μ m。方法二a)將谷物醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95%的醇溶液中，使得終濃度達到30-500g/L， 得到谷物醇溶蛋白的醇溶液；b)制備成厚度為50-1000μ m的薄膜；c)將b)獲得的薄膜在100-121°C，0.1-lMPa，處理1-30分鐘，進行表面固化；d)粉碎機粉碎或者切割機切割，過篩，得到50-1000μ m的立方體的粗顆粒，再進行球磨，獲得粒徑范圍為50-1000 μ m的圓整的球形微載體；或者e)將b)獲得的薄膜在高塔造粒、過篩，分散于玻璃、硫酸紙或者疏水介質(zhì)表面進行造粒，固化條件為在100-121°C、0. I-IMPa下，處理1_30分鐘，最后干燥收獲圓整的球形微載體，粒徑范圍為50-1000 μ m ；或者方法三a)將谷物醇溶蛋白溶于體積濃度為55-95%的醇溶液中，使得終濃度達到30-500g/L， 得到谷物醇溶蛋白的醇溶液；b)用噴霧干燥、高塔造粒但不限于這兩種方法進行造粒；c)球磨后過篩；d)在100-121°C、0. I-IMPa下，處理1_30分鐘，進行表面固化，干燥。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于采用了在100-121°C和0.I-IMPa下處理谷物醇溶蛋白1-30分鐘，進行表面固化和聚合，獲得的微載體密度為l-1.3g/cm3。
6.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于對獲得的微載體產(chǎn)品進行滅菌后處理 以鈷60射線輻照、紫外線輻照、或者是在將微載體以蒸餾水或者PBS溶液溶脹后，高溫滅菌。
7.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于還對獲得的微載體表面進行化學(xué)修飾， 使其帶有促進細胞黏附的正電荷；或交聯(lián)膠原蛋白成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及基于谷物蛋白的、用于大規(guī)模培養(yǎng)細胞的微載體、制備方法和用途。微載體成球形或類球形，空心、實心、大孔和磁性微載體的直徑為50-2000μm。由于谷物醇溶蛋白具備良好的生物相容性、疏水性和可降解特性，以及在濕態(tài)下有著優(yōu)良的力學(xué)性能，所以能夠較長時間維持微載體的結(jié)構(gòu)，既可以支持大量細胞生長，又能長期維持細胞活性和功能。本發(fā)明還提供能滿足在力學(xué)、形態(tài)、滅菌、可降解、無熱源、可回收等多方面要求的微載體制備方法，可以根據(jù)需要在較寬的范圍內(nèi)控制微載體的各項參數(shù)，如直徑、孔徑、密度等，制成的微載體成本低廉，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。其大規(guī)模、高密度培養(yǎng)的細胞可用于生產(chǎn)疫苗、抗體及組織工程領(lǐng)域。
文檔編號C08J9/00GK102516778SQ20111038834
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月29日
發(fā)明者王瑾曄, 韓亦龍 申請人:上海交通大學(xué)