專利名稱：海參多糖的電離輻射降解法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多糖類化合物的降解法，特別是涉及一種電離輻射降解海參多糖的方法。
背景技術(shù)：
海參多糖主要有海參硫酸軟骨素(seacucumber chondroitin sulfate, SC-CHS) (J Biol Chem 1996,271，(39)，23973-84 ;J Biol Chem 1988,263，(34),18176-83 ； Journal of Biological Chemistry 1991,266, (21), 13530-13536)和海參巖藻聚糖硫酸酯(SC-FUC) (Carbohydr Res 1994，255，225-40)兩種多糖，其中 SC-CHS 是從海參體壁中提取的一種多糖，可來(lái)源于多種海參，雖其化學(xué)結(jié)構(gòu)不盡相同，但生物學(xué)活性相似。Yutaka Kariya(J Biochem 2002，132，(2)，335-43)對(duì)日本刺參中SC-CHS的進(jìn)行提取，糖組成分析表明其中巖藻糖(Fuc)乙酰氨基半乳糖(GalNAc)葡萄糖醛酸(GlcA)硫酸根(S042_) 為 2. 5 : 0. 47 : 0. 53 : I. 73。Paulo Mourao(J Biol Chem 1996，271，(39)，23973-84)課題組提純了 L.grisea中的SC-CHS，糖組成分析表明其含有Fuc GalNAc GlcA S042—約為 I : I : I : 2. 7。硫酸巖藻糖分支結(jié)構(gòu)與SC-CHS的多種生物學(xué)活性相關(guān)，其特異性的空間排列是SC-CHS抗凝活性的基礎(chǔ)，SC-CHS延長(zhǎng)激活的部分凝血活酶時(shí)間(APTT)的作用明顯強(qiáng)于具有相同硫酸化程度的線性巖藻糖同源性多聚體(Thromb Haemost 2008,100, (3), 420-8)。脫巖藻糖和脫硫酸酯后，SC-CHS喪失抗凝作用。Mourao (Thromb Res 2001，102，
(2)，167-76 ;Thromb Res 1999,93, (3)，129-35)等在兔靜脈血栓形成模型中進(jìn)一步驗(yàn)證了硫酸巖藻糖支鏈對(duì)SC-CHS抗血栓活性的重要性。用人活化血清激活內(nèi)源性凝血途徑和純化的FVIII激活外源性凝血途徑后，靜脈注射SC-CHS可減少血栓形成，而去除硫酸巖藻糖分支后，SC-CHS 作用消失(Blood 2006，107，(10) ,3876 ；Br J Haematol 1998， 101，(4) ,647-52) 硫酸巖藻糖支鏈還與 SC-CHS 降血脂(Atherosclerosis 1996，126，
(2)，185-195)、促進(jìn)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖和移位、促進(jìn)血管再生作用相關(guān)(Mol Cancer Res 2002，I，(2)，96-102)。Lubor BorsigQ Biol Chem 2007，282，(20)，14984-91)等人發(fā)現(xiàn)支鏈巖藻糖還與其抑癌活性密切相關(guān)。因此制備富含巖藻糖支鏈的低分子量海參硫酸軟骨素具有重要的意義。目前海參硫酸軟骨素(SC-CHS)的降解方法常見(jiàn)的有用稀酸法和氧化降解法。而先前Yutaka Kariya(JBiochem 2002，132，(2)，335-43)和Paulo Mourao(J Biol Chem 1996，271，(39)， 23973-84)等課題組均采用了稀酸法制備寡糖方法，容易導(dǎo)致硫酸基和支鏈硫酸巖藻糖的脫落，影響相關(guān)的活性。而氧化分解法操作繁瑣，過(guò)程難以控制，重現(xiàn)性差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種工藝簡(jiǎn)潔、效率高的海參多糖的電離輻射降解法。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種海參多糖的電離輻射降解法，依次包括以下步驟I)、將海參多糖完全溶于蒸餾水中，得到海參多糖的水溶液；2)、于常溫下采用6tlCo進(jìn)行電離輻射降解海參多糖水溶液，吸收劑量為2kGy 200kGy ；3)、將步驟2)的所得物經(jīng)靜置沉降或離心除去非降解沉淀(蛋白質(zhì)和殘?jiān)?得到清液；將所述清液干燥，得到低分子量的寡糖。作為本發(fā)明的海參多糖的電離輻射降解法的改進(jìn)海參多糖的水溶液中海參多糖的質(zhì)量濃度為O. I % 10%。作為本發(fā)明的海參多糖的電離輻射降解法的進(jìn)一步改進(jìn)海參多糖為海參硫酸軟骨素或海參巖藻聚糖硫酸酯。作為本發(fā)明的海參多糖的電離輻射降解法的進(jìn)一步改進(jìn)輻射劑量率為45kGy/ min0作為本發(fā)明的海參多糖的電離輻射降解法的進(jìn)一步改進(jìn)海參多糖的水溶液中海參多糖的質(zhì)量濃度為1% 2 %，吸收劑量為20kGy IOOkGy。本發(fā)明的海參多糖的輻照降解法，其實(shí)質(zhì)在于利用一定條件的電離輻射使海參多糖的糖苷鍵發(fā)生斷裂，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)多糖降解。本發(fā)明的海參多糖的輻照降解法，適合于所有海參多糖。經(jīng)本發(fā)明的方法處理后， 即，海參多糖水溶液輻照后所得低分子量寡糖的分子量分布指數(shù)范圍I. 20 I. 40。本發(fā)明的海參多糖的電離輻射降解法具有如下優(yōu)點(diǎn)I、不引入無(wú)機(jī)鹽，降解后無(wú)需脫鹽即可經(jīng)干燥得到最終產(chǎn)品；2、不導(dǎo)致活性鏈的斷裂或活性基團(tuán)的脫落；可實(shí)現(xiàn)多糖分子量的連續(xù)均勻下降， 通過(guò)控制輻照劑量及多糖濃度即可獲得不同分子量的降解產(chǎn)物，且降解產(chǎn)物分子量分布指數(shù)接近于I ;3、不使用任何添加劑；方法穩(wěn)定，重現(xiàn)性好；工藝簡(jiǎn)單，容易控制；節(jié)約能源、加工效率高；無(wú)環(huán)境污染。綜上所述，與傳統(tǒng)的多糖降解方法如酸降解法、氧化降解法等相比，本法無(wú)需酸堿，故無(wú)后續(xù)中和、脫鹽步驟，簡(jiǎn)化操作的同時(shí)減少了后續(xù)處理對(duì)產(chǎn)物的損耗，且不會(huì)導(dǎo)致多糖活性鏈的斷裂或活性基團(tuán)的脫落，極大有利于降解產(chǎn)物尤其是寡糖的制備；對(duì)降解產(chǎn)物分子量的控制可通過(guò)調(diào)節(jié)輻照劑量及多糖濃度實(shí)現(xiàn)，能夠滿足各分子量降解產(chǎn)物制備的需求，且產(chǎn)物分子量均勻、集中，分子量分布指數(shù)接近于1，產(chǎn)品的均一性較好。該法還同時(shí)具有重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便、成本低的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例中所用的菲律賓海參硫酸軟骨素可根據(jù)2010年8月公開(kāi)的陳士國(guó)《高溫1HNMR鑒別8種海參硫酸軟骨素》中海參多糖的提取方法制備而得。實(shí)施例I :海參多糖的電離輻射降解法稱取四份菲律賓海參硫酸軟骨素(每份均為50mg)，分別配制成水溶液，質(zhì)量百分比濃度分別為均用電離輻射處理，吸收劑量為50kGy，輻射劑量率為45kGy/min ;輻照后靜置I. 5小時(shí)，非降解物沉降到容器底部，取上清液。將上述4份上清液分別真空冷凍干燥(_40°C )，從而分別得低分子的硫酸軟骨素 (即，低分子量的寡糖)42mg、39mg、40mg、35mg。采用HPLC高效凝膠滲透色譜(TSK3000，4000)測(cè)定不同濃度硫酸軟骨素同一輻照劑量降解后的相對(duì)分子量及數(shù)均分子量、重均分子量、分子量分布指數(shù)。具體如表I所示。表I
權(quán)利要求
1.海參多糖的電離輻射降解法，其特征是依次包括以下步驟1)、將海參多糖完全溶于蒸餾水中，得到海參多糖的水溶液；2)、于常溫下采用6tlCo進(jìn)行電離輻射降解海參多糖水溶液，吸收劑量為2kGy 200kGy ；3)、將步驟2)的所得物經(jīng)靜置沉降或離心除去非降解沉淀得到清液；將所述清液干燥，得到低分子量的寡糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的海參多糖的電離輻射降解法，其特征是所述海參多糖的水溶液中海參多糖的質(zhì)量濃度為O. I % 10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的海參多糖的電離輻射降解法，其特征是所述海參多糖為海參硫酸軟骨素或海參巖藻聚糖硫酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的海參多糖的電離輻射降解法，其特征是所述輻射劑量率為 45kGy/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的海參多糖的電離輻射降解法，其特征是所述海參多糖的水溶液中海參多糖的質(zhì)量濃度為1% 2%，吸收劑量為20kGy lOOkGy。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種海參多糖的電離輻射降解法，依次包括以下步驟1)將海參多糖完全溶于蒸餾水中，得到海參多糖的水溶液；2)于常溫下采用60Co進(jìn)行電離輻射降解海參多糖水溶液，吸收劑量為2kGy～200kGy；3)將步驟2)的所得物經(jīng)靜置沉降或離心除去非降解沉淀得到清液；將清液干燥，得到低分子量的寡糖。采用本發(fā)明方法處理后所得的產(chǎn)物，分子量均勻、集中，分子量分布指數(shù)接近于1，產(chǎn)品的均一性較好。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102585023SQ20121000758
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月3日
發(fā)明者劉東紅, 葉興乾, 吳丹, 吳念, 孫玉敬, 胡亞芹, 陳士國(guó), 陳建初 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)