專利名稱：一種制備牛膝多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物多糖的制備方法，尤其涉及一種從生藥牛膝中制備牛膝多糖的方法。
背景技術(shù)：
牛膝(學名Achyranthes bidentata)為覓科牛膝屬的植物。牛膝作為我國傳統(tǒng)的中藥材，從明代李時珍的《本草綱目》到清代葉天士的《本草經(jīng)解》，以及近代醫(yī)學《中藥大辭典》都記載了它特有的臨床應(yīng)用價值補肝腎、強筋骨、治腰膝酸麻、肝腸眩暈、散瘀血、消癰腫等等。
牛膝多糖(Achyranthesbidentata polysaccharide, ABP)是從牛膝的根提取獲得。它是由果糖-葡萄糖組成的小分子化合物，牛膝多糖是體內(nèi)重要的信息分子，具有廣泛的生物學活性。近幾年來，國內(nèi)外對牛膝多糖做了大量研究，藥理研究和臨床試用后認為，牛膝多糖制品能增強人體免疫力，升高血清溶血素和脾臟內(nèi)抗體形成的細胞數(shù)，提高血清免疫球蛋白，激發(fā)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，促進淋巴細胞增殖，增強NK細胞和CTL細胞的活性。因此，牛膝多糖制備及其產(chǎn)品的開發(fā)對臨床具有重要意義。關(guān)于牛膝多糖的提取分離方法，常見的報道是由牛膝的根經(jīng)水提、反復(fù)醇沉、再透析制得。但其得到的牛膝多糖純度不高，已無法滿足目前日益提高的制劑制備要求，鑒于此，研發(fā)一種從生藥牛膝中制備牛膝多糖的新方法尤為必要。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種從生藥牛膝中制備牛膝多糖的方法。本發(fā)明所述制備牛膝多糖的方法，由下述步驟組成(I)將牛膝切成片狀或粉碎至顆粒直徑為300 500 Pm，與水以質(zhì)量比計，按I 6 8的量浸于蒸餾水中，浸泡50 70小時；(2)以3000 5000rpm離心(I)所述浸泡液13 16min,得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其體積3 4倍量的90% 95%乙醇，攪拌25 35min ；(4)以3000 5000rpm離心(3)所述攪拌混合液13 16min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重為I. 05 I. 15的溶液；(5)選取內(nèi)徑和高度比為I : 30 50的層析柱；向柱內(nèi)加入葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的65% 85% ；(6)凝膠過濾層析步驟(4)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0. 4 0. 5ml/min,以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常規(guī)真空冷凍干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。
上述制備牛膝多糖的方法中，步驟(2)或(4)所述離心速度優(yōu)選4000rpm，離心時間優(yōu)選15min。上述制備牛膝多糖的方法中，步驟(5)所述層析柱的內(nèi)徑和高度比優(yōu)選I : 40。上述制備牛膝多糖的方法中，步驟(5)所述向柱內(nèi)加入的具有分子篩作用的葡聚糖凝膠量優(yōu)選為柱體積的70% 80%。上述制備牛膝多糖的方法中，步驟(5)所述葡聚糖凝膠選用SephadexG-150或SephadexG-200。進一步的,步驟(5)所述葡聚糖凝膠優(yōu)選SephadexG-150。上述制備牛膝多糖的方法中，步驟(6)所述流速優(yōu)選0. 4ml/min。 利用本發(fā)明提出的制備牛膝多糖的方法，可以制備出純度達95%以上的牛膝多糖，根本解決了牛膝多糖分離難，純度低，質(zhì)量不穩(wěn)定的不足，且本發(fā)明的方法設(shè)備及環(huán)境要求低，方法簡便，成本低，靈活實用，利于推廣、開發(fā)和應(yīng)用。采用本發(fā)明的分離純化方法制備出的牛膝多糖在臨床應(yīng)用和保健食品開發(fā)上將有很廣闊的前景。
具體實施例方式實施例I :(I)將牛膝切成片狀，與水以質(zhì)量比計，按I : 6的量浸于蒸餾水中，浸泡50小時；(2)以3000rpm離心(I)所述浸泡液16min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其體積3倍量的95%乙醇，攪拌25min ；(4)以3000rpm離心(3)所述攪拌混合液16min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重為I. 10 I. 15的溶液；(5)選取內(nèi)徑和高度比為I : 30的層析柱；向柱內(nèi)加入S印hadexG-150葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的75% ；(6)凝膠過濾層析步驟(4)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0. 4ml/min,以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常規(guī)真空冷凍干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。實施例2 (I)將牛膝粉碎至顆粒直徑為400 500 iim，與水以質(zhì)量比計，按I : 7的量浸于蒸餾水中，浸泡60小時；(2)以4000rpm離心(I)所述浸泡液15min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其體積4倍量的90%乙醇，攪拌35min ；(4)以4000rpm離心(3)所述攪拌混合液15min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重為I. 11 I. 15的溶液；(5)選取內(nèi)徑和高度比為I : 40的層析柱；向柱內(nèi)加入S印hadexG-200葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的85% ；(6)凝膠過濾層析步驟(4)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0. 4ml/min,以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常規(guī)真空冷凍干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。
實施例3 (I)將牛膝粉碎至顆粒直徑為300 400 U m,與水以質(zhì)量比計，按I : 8的量浸于蒸餾水中，浸泡70小時；(2)以5000rpm離心⑴所述浸泡液13min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其體積3倍量的95%乙醇，攪拌30min ；(4)以5000rpm離心(3)所述攪拌混合液13min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重為
I.05 I. 10的溶液；(5)選取內(nèi)徑和高度比為I : 50的層析柱；向柱內(nèi)加入S印hadexG-150葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的80% ；(6)凝膠過濾層析步驟⑷的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0. 5ml/min,以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常規(guī)真空冷凍干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。本發(fā)明中涉及的“SephadexG-150、SephadexG-200” 為 pharmacia 公司產(chǎn)品。我國代理經(jīng)銷Pharmacia產(chǎn)品的公司有“北京拜爾迪生物技術(shù)公司，北京市海淀區(qū)中關(guān)村北二街4號水清木華園I號樓910室(100080);電話(TEL) =010-82642396 ;傳真(FAX)010-82642395?！?br> 權(quán)利要求
1.一種制備牛膝多糖的方法，由下述步驟組成 (1)將牛膝切成片狀或粉碎至顆粒直徑為300 500iim，與水以質(zhì)量比計，按I : 6 8的量浸于蒸餾水中，浸泡50 70小時； (2)以3000 5000rpm離心(I)所述浸泡液13 16min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其體積3 4倍量的90% 95%乙醇，攪拌25 35min； (4)以3000 5000rpm離心(3)所述攪拌混合液13 16min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重為1.05 I. 15的溶液； (5)選取內(nèi)徑和高度比為I: 30 50的層析柱；向柱內(nèi)加入葡聚糖凝膠,加入量為柱體積的65% 85% ； (6)凝膠過濾層析步驟(4)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0.4 0. 5ml/min,以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得牛膝多糖的提取液； (7)常規(guī)真空冷凍干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。
2.如權(quán)利要求I所述制備牛膝多糖的方法，其特征是，步驟(2)或(4)所述離心速度是4000rpm,離心時間是15min。
3.如權(quán)利要求I所述制備牛膝多糖的方法，其特征是，步驟(5)所述層析柱的內(nèi)徑和高度比為I : 40。
4.如權(quán)利要求I所述制備牛膝多糖的方法，其特征是，步驟(5)所述向柱內(nèi)加入的具有分子篩作用的葡聚糖凝膠量為柱體積的70% 80%。
5.如權(quán)利要求I所述制備牛膝多糖的方法，其特征是，步驟(5)所述葡聚糖凝膠選用SephadexG-150 或 SephadexG-200。
6.如權(quán)利要求5所述制備牛膝多糖的方法，其特征是，步驟(5)所述葡聚糖凝膠選用SephadexG—150。
7.如權(quán)利要求I所述制備牛膝多糖的方法，其特征是，步驟(6)所述流速為0.4ml/mirio
全文摘要
本發(fā)明公開一種制備牛膝多糖的方法，是將牛膝切成片狀或粉碎后浸于蒸餾水中，離心得含牛膝多糖的上清液，然后加入乙醇攪拌，離心，收集沉淀并用蒸餾水溶稀，凝膠過濾層析，選擇吸收峰洗脫液收集，真空冷凍干燥，得牛膝多糖。利用本發(fā)明制備的牛膝多糖純度達95％以上，且本發(fā)明的方法設(shè)備及環(huán)境要求低，方法簡便，成本低，靈活實用，利于推廣、開發(fā)和應(yīng)用。
文檔編號C08B37/00GK102617749SQ20121010492
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月11日
發(fā)明者張尚立, 張恒 申請人:山東大學