專利名稱：魷魚透明質(zhì)酸的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魷魚透明質(zhì)酸的提取エ藝。
背景技術(shù)：
魷魚透明質(zhì)酸，廣泛存在于魷魚各個(gè)組織中，是ー種由β-D-N-こ酰基葡萄糖和β-D-葡萄糖醛酸為結(jié)構(gòu)單元以β-1，4-糖苷鍵縮合而成的ー種酸性黏多糖，屬于糖胺聚糖。透明質(zhì)酸以其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤(rùn)滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水電解質(zhì)擴(kuò)散及運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等。尤為重要的是，它具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質(zhì)，被稱為理想的天然保濕因子。透明質(zhì)酸可以改善皮膚營(yíng)養(yǎng)代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、増加弾性、防止衰老，在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑。與其他營(yíng)養(yǎng)成分配合使用，可以起到促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收的更理想效果。透明質(zhì)酸保健食品發(fā)展迅速，在美容養(yǎng)顏方面的功效越來(lái)越受到關(guān)注，美容食品將會(huì)得到快速發(fā)展。人們已經(jīng)充分認(rèn)識(shí)到透明質(zhì)酸對(duì)機(jī)體的重要性，它的應(yīng)用開(kāi)發(fā)處于蓬勃發(fā)展階段，相信越來(lái)越多的產(chǎn)品會(huì)涌現(xiàn)，為人類作出貢獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決魷魚透明質(zhì)酸提取率低，活性不高的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，采用強(qiáng)電場(chǎng)制備魷魚透明質(zhì)酸，能有效提高魷魚透明質(zhì)酸的提取率和產(chǎn)品活性。本發(fā)明魷魚透明質(zhì)酸的提取方法的步驟如下
一、魷魚透明質(zhì)酸的提取將魷魚組織清洗、切塊、搗碎，以料液比Ikg 3^4L的比例分別加入魷魚組織和水溶液，用強(qiáng)電場(chǎng)萃取3(Γ40分鐘，得到含有魷魚透明質(zhì)酸萃取液，最后用臥螺式離心機(jī)以150(T2000r/min的速度進(jìn)行固液分離，分離出提取液和殘?jiān)瑢堅(jiān)僖粤弦罕葹镮kg ,4L的比例加入水溶液，繼續(xù)進(jìn)行強(qiáng)電場(chǎng)提取和離心分離，連續(xù)提取3次，除去殘?jiān)?，合并提取液?br> ニ、濃縮將魷魚透明質(zhì)酸提取液采用真空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為45 50°C，真空度為O. Γ0. 15mbar，得到魷魚透明質(zhì)酸濃縮液；
三、純化將濃縮液分別調(diào)pH為3.0,5. 0,7. 0,9. 0,11. O、13. O沉淀蛋白，離心后再次將溶液調(diào)至PH為中性，加O. IM NaCl (5. 85g/L)，以I 1的體積比加入氯仿，除去脂溶相，靜置分層后，分離出水相，之后將水相溶液通過(guò)流體分配器加入高效色譜層析柱，用氯化鈉溶液洗脫，流速為8 15mL/min，得魷魚透明質(zhì)酸洗脫液，再用真空刮板式薄膜濃縮設(shè)備濃縮；
四、干燥用真空凍干機(jī)在O.4^0. 7mbar、溫度_40'50で條件下將魷魚透明質(zhì)酸濃縮液真空凍干后粉碎成固體粉末，即得魷魚透明質(zhì)酸凍干粉末。 本發(fā)明在魷魚透明質(zhì)酸提取方法中，采用強(qiáng)電場(chǎng)輔助萃取配合臥螺式離心循環(huán)萃取的方法，使魷魚透明質(zhì)酸得以充分釋放，使透明質(zhì)酸的提取率可達(dá)到85%，比超聲波提取法或溶劑回流提取法的提取率分別高了 15 20和2(Γ25%。其活性比提取法中超聲波提取法或溶劑回流提取法高了 25 30%，大大提高了魷魚透明質(zhì)酸的附加經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本發(fā)明エ藝簡(jiǎn)單，提取率高，適宜推廣和應(yīng)用。本發(fā)明制備的魷魚透明質(zhì)酸活性高，可用于美容化妝品、醫(yī)藥、保健品等領(lǐng)域。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一 本實(shí)施方式按照如下步驟提取魷魚透明質(zhì)酸
一、魷魚透明質(zhì)酸的提取先進(jìn)行魷魚須、板、眼睛的篩選，購(gòu)買新鮮的魷魚，清洗、切塊、搗碎，以料液比Ikg :3 4L的比例分別加入魷魚組織和水溶液，用強(qiáng)電場(chǎng)萃取3(Γ40分鐘，得到含有魷魚透明質(zhì)酸萃取液，最后用臥螺式離心機(jī)以150(T2000r/min的速度進(jìn)行固液分離，分離出提取液和殘?jiān)?，將殘?jiān)僖粤弦罕葹镮kg 3^4L的比例加入水溶液，繼續(xù)進(jìn)行強(qiáng)電場(chǎng)提取和離心分離，連續(xù)提取3次，除去殘?jiān)喜⑻崛∫海?br> ニ、濃縮將魷魚透明質(zhì)酸提取液采用真空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為45 50°C，真空度為O. Γ0. 15mbar，得到魷魚透明質(zhì)酸濃縮液；
三、純化將濃縮液分別用HCl、NaOHi周pH為3.0,5. 0,7. 0,9. O、11. O、13. O沉淀蛋白，離心后再次將溶液調(diào)至pH=7. 5，加O. IM NaCl (5. 85g/L)，以I :1的體積比加入氯仿，除去脂溶相，靜置分層后，分離出水相，之后將水相溶液通過(guò)流體分配器加入高效色譜層析柱，用氯化鈉溶液洗脫，流速為8 15mL/min，得魷魚透明質(zhì)酸洗脫液，再用真空刮板式薄膜濃縮設(shè)備濃縮；
四、干燥用真空凍干機(jī)在O.4^0. 7mbar、溫度_40'50で條件下將魷魚透明質(zhì)酸濃縮液真空凍干后粉碎成60目固體粉末，即得魷魚透明質(zhì)酸凍干粉末。
具體實(shí)施方式
ニ 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中萃取電場(chǎng)強(qiáng)度為每平方厘米6(Γ90千伏，高壓電場(chǎng)沖數(shù)60(Γ800次，脈沖頻率20(Γ300Ηζ。其他步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一、ニ不同的是步驟ニ中濃縮液中固形物質(zhì)量百分比為6(Γ70%。其他與具體實(shí)施方式
一、二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一、ニ、三不同的是步驟三中高效色譜層析柱純化，所用固相介質(zhì)為Sephadex樹(shù)脂，流動(dòng)相介質(zhì)為用質(zhì)量濃度為O. 5^1. O的氯化鈉洗脫。其他與具體實(shí)施方式
一、ニ、三相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一、ニ、三、四不同的是步驟三中真空凍干時(shí)間為24 48小時(shí)。其他與具體實(shí)施方式
一、ニ、三、四相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式按照如下步驟提取魷魚透明質(zhì)酸
一、魷魚透明質(zhì)酸的提取先進(jìn)行魷魚須、板、眼睛的篩選，購(gòu)買新鮮的魷魚，清洗、切塊、搗碎，以料液比Ikg :3L的比例分別加入魷魚組織和水溶液，用強(qiáng)電場(chǎng)萃取40分鐘，萃取電場(chǎng)強(qiáng)度為每平方厘米80千伏，高壓電場(chǎng)沖數(shù)800次，脈沖頻率300Hz，得到含有魷魚透明質(zhì)酸萃取液，最后用臥螺式離心機(jī)以2000r/min的速度進(jìn)行固液分離，分離出提取液和殘?jiān)?，將殘?jiān)僖粤弦罕葹镮kg :3L的比例加入水溶液，繼續(xù)進(jìn)行強(qiáng)電場(chǎng)提取和離心分離。連續(xù)提取3次，除去殘?jiān)喜⑻崛∫海?br> ニ、濃縮將魷魚透明質(zhì)酸提取液采用真空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為50°C，真空度為O. 15mbar，得到魷魚透明質(zhì)酸濃縮液，濃縮液的質(zhì)量百分比為65% ；三、純化將濃縮液分別用HCl、NaOHi周pH為3.0,5. 0,7. 0,9. O、11. O、13. O沉淀蛋白，離心后再次將溶液調(diào)至pH=7. 5，加O. IM NaCl (5. 85g/L)，以I :1的體積比加入氯仿，除去脂溶相，靜置分層后，分離出水相，之后將水相溶液通過(guò)流體分配器加入高效色譜層析柱，所用固相介質(zhì)為sephadex樹(shù)脂,用氯化鈉溶液洗脫,流速為10mL/min,得魷魚透明質(zhì)酸洗脫液，再用真空刮板式薄膜濃縮設(shè)備濃縮；
四、干燥用真空凍干機(jī)在O.6mbar、溫度_50°C條件下將魷魚透明質(zhì)酸濃縮液真空凍干，凍干時(shí)間為36h，將凍干物粉碎，過(guò)60目篩，即得魷魚透明質(zhì)酸凍干粉末。本具體實(shí)施方式
中魷魚透明質(zhì)酸的提取率為85%，純度為8(Γ87%，所得魷魚透明質(zhì)酸活性高，品質(zhì)好。
權(quán)利要求
1.魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，其特征在于所述提取方法為 一、魷魚透明質(zhì)酸的提取將魷魚組織清洗、切塊、搗碎，以料液比Ikg3^4L的比例分別加入魷魚組織和水溶液，用強(qiáng)電場(chǎng)萃取3(Γ40分鐘，得到含有魷魚透明質(zhì)酸萃取液，最后用臥螺式離心機(jī)以150(T2000r/min的速度進(jìn)行固液分離，分離出提取液和殘?jiān)瑢堅(jiān)僖粤弦罕葹镮kg :3 4L的比例加入水溶液，繼續(xù)進(jìn)行強(qiáng)電場(chǎng)提取和離心分離，連續(xù)提取3次，除去殘?jiān)?，合并提取液? 二、濃縮將魷魚透明質(zhì)酸提取液采用真空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為45 50°C，真空度為O. Γ0. 15mbar，得到魷魚透明質(zhì)酸濃縮液； 三、純化將濃縮液分別調(diào)pH為3.0,5. 0,7. 0,9. 0,11. 0,13. O沉淀蛋白，離心后再次將溶液調(diào)至PH為中性，加O. IM NaCl，以I :1的體積比加入氯仿，除去脂溶相，靜置分層后，分離出水相，之后將水相溶液通過(guò)流體分配器加入高效色譜層析柱，用氯化鈉溶液洗脫，流速為8 15mL/min，得魷魚透明質(zhì)酸洗脫液，再用真空刮板式薄膜濃縮設(shè)備濃縮； 四、干燥用真空凍干機(jī)在O.4^0. 7mbar、溫度-4(T-50°C條件下將魷魚透明質(zhì)酸濃縮液真空凍干后粉碎成固體粉末，即得魷魚透明質(zhì)酸凍干粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，其特征在于步驟一中萃取電場(chǎng)強(qiáng)度為每平方厘米60 90千伏，高壓電場(chǎng)沖數(shù)600 800次，脈沖頻率20(Γ300Ηζ。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，其特征在于步驟二中濃縮液中固形物質(zhì)量百分比為6(Γ70%。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，其特征在于步驟三中高效色譜層析柱純化，所用固相介質(zhì)為sephadex樹(shù)脂，流動(dòng)相介質(zhì)為用質(zhì)量濃度為O. 5^1. O的氯化鈉洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，其特征在于步驟三中真空凍干時(shí)間為24 48小時(shí)。
全文摘要
魷魚透明質(zhì)酸的提取方法，涉及一種魷魚透明質(zhì)酸的提取工藝。為了解決魷魚透明質(zhì)酸提取率低，活性不高的問(wèn)題，本發(fā)明按照下述方法提取魷魚透明質(zhì)酸魷魚組織清洗，切塊，組織搗碎，經(jīng)強(qiáng)電場(chǎng)萃取，用超速離心機(jī)分離提取液，除去蛋白及脂類物質(zhì)，再用真空刮板式薄膜濃縮，用真空凍干機(jī)進(jìn)行凍干，即得魷魚透明質(zhì)酸凍干粉末。本發(fā)明制備的魷魚透明質(zhì)酸為天然提取物，對(duì)人體無(wú)副作用，具有改善皮膚營(yíng)養(yǎng)代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、增加彈性、防止衰老等作用，在保濕的同時(shí)又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑。與其他營(yíng)養(yǎng)成分配合使用，可以起到促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收的更理想效果?？蓱?yīng)用于美容化妝品、醫(yī)藥、保健品等領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C08B37/08GK102627702SQ201210121520
公開(kāi)日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月24日
發(fā)明者左麗麗, 王振宇, 程翠林, 黃永鑫 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)