專利名稱：一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)產(chǎn)品綜合利用領(lǐng)域，具體涉及一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法。
背景技術(shù)：
由于林蛙皮具有較強(qiáng)的修復(fù)能力和韌性，并且即使死亡也幾十年不腐，因此引起了諸多學(xué)者的興趣，研究認(rèn)為這與林蛙皮含有大量抗菌活性物質(zhì)和大量膠原蛋白有關(guān)，其中蛙皮膠原蛋白含量在26% -48%之間。多數(shù)研究集中于林蛙皮抗菌活性物質(zhì)的研究，而關(guān)于蛙皮膠原蛋白的研究較少。膠原海綿是膠原液經(jīng)發(fā)泡、固化、凍干和滅菌而制成的一種海綿狀固體制劑，由于膠原具有優(yōu)越的生物相容性和安全性、生物可降解性和弱抗原性，使得它成為最優(yōu)越的生物醫(yī)學(xué)材料。從林蛙殘皮(提取完抗菌活性物質(zhì))制備膠原海綿可促進(jìn)林蛙綜合利用，提高林蛙附加值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法。該方法工藝簡(jiǎn)單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。所述方法包括干燥、酸酶提取、酶滅活、純化和凍干。干燥經(jīng)醇提處理的蛙皮殘?jiān)蜏馗稍?。酸酶提取在冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶和蛙皮殘?jiān)崛∧z原蛋白。酶滅活加入EDTA滅活蛋白酶。純化抽濾獲得濾液，鹽析沉淀，蒸餾水透析過(guò)夜。凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射，冷凍干燥，獲得膠原海綿。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I干燥經(jīng)醇提處理的蛙皮殘?jiān)蜏馗稍?35 °C )。酸酶提取在50ml冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶20mg和蛙皮殘?jiān)黮g，37°C提取 48h。酶滅活加入20mM EDTA滅活蛋白酶。純化抽濾獲得濾液，加入硫酸銨5mg，蒸餾水透析過(guò)夜。凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射254nm，工作距離5cm，輻照時(shí)間4h，冷凍溫度-40°C冷凍干燥，獲得膠原海綿。實(shí)施例2 干燥經(jīng)醇提處理的蛙皮殘?jiān)蜏馗稍?40°C )。
酸酶提取在200ml冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶80mg和蛙皮殘?jiān)?g，37°C提取
48h。
酶滅活加入20mM EDTA滅活蛋白酶。純化抽濾獲得濾液，加入硫酸銨20mg，蒸餾水透析過(guò)夜。
凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射365nm，工作距離10cm，輻照時(shí)間3h，冷凍溫度-40 V冷凍干燥，獲得膠原海綿。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種從林蛙殘皮制備膠原海綿的方法，其特征在于所述方法包括下述步驟 a)干燥將經(jīng)醇提處理的蛙皮殘?jiān)蜏馗稍铮? b)酸酶提取在冰醋酸提取緩沖液中加入蛋白酶和蛙皮殘?jiān)? c)酶滅活加入EDTA滅活蛋白酶； d)純化抽濾獲得濾液，鹽析沉淀，蒸餾水透析過(guò)夜； e)凍干將透析后的膠原蛋白溶液用紫外線輻射，冷凍干燥，獲得膠原海綿。
2.根據(jù)權(quán)利要求Ia所述的干燥，其特征在于干燥溫度低于40°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求Ib所述的酸酶提取，其特征在于冰醋酸濃度0.5M，提取緩沖液蛋白酶蛙皮殘?jiān)?50 20 l(mL mg g)，37°C提取 48h。
4.根據(jù)權(quán)利要求Ic所述的酶滅活，其特征在于EDTA終濃度為20mM。
5.根據(jù)權(quán)利要求Id所述的純化，其特征在于硫酸銨濃度為0.lg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求Ie所述的凍干，其特征在于紫外線波長(zhǎng)254-365nm，工作距離5-lOcm，輻照時(shí)間l_4h，冷凍溫度-40°C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從林蛙殘皮制備膠原海綿方法。該方法工藝簡(jiǎn)單，成本低，耗時(shí)短，適合工業(yè)化生產(chǎn)。所述方法包括干燥、酸酶提取、酶滅活、純化和凍干，為林蛙殘皮的綜合利用和高值產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。
文檔編號(hào)C08L89/00GK102634055SQ20121013228
公開(kāi)日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月3日
發(fā)明者關(guān)爽, 盧靜, 李提提, 焦雪軍, 王大成, 王振寧, 許琳莉, 鄧旭明, 黃國(guó)任 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)