專利名稱：粗品肝素鈉的除雜工藝的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及肝素鈉純化技術(shù)領域，特別涉及一種粗品肝素鈉的除雜工藝。
背景技術(shù)：
肝素鈉又稱肝素，是一種含有硫酸基的酸性粘多糖類天然抗凝血物質(zhì)。肝素鈉為白色或類白色粉末，無臭無味，有引濕性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六環(huán)等有機溶劑。肝素鈉廣泛存在于哺乳動物肝、肺、腸黏膜中，多與蛋白質(zhì)結(jié)合成復合體存在。酶解蛋白可分離肝素鈉，肝素鈉是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在PH8-9時，帶負電荷，可與陰離子交換劑進行離子交換，進行粗分離，多糖液在高濃度乙醇中沉淀進行精純。 肝素鈉是血液化學成分測定中最好的抗凝劑。肝素鈉是一種含硫酸基團的黏多糖，分子量為I. 5萬，其抗凝機制是與抗凝酶II一起，在低濃度能抑制因子IX a、VDI和PF3之間的作用，并能加強抗凝血酶III滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成；還有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。目前，國內(nèi)生產(chǎn)的粗品肝素鈉，其中往往含有較多的雜質(zhì)，純度較低，產(chǎn)品質(zhì)量不高，然而粗品肝素鈉中這些雜質(zhì)去除的難度較大，這對后續(xù)的進一步純化成藥用肝素鈉增加了難度，所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品往往品質(zhì)不佳，難以滿足要求。CN1844165A的發(fā)明公開了一種粗品肝素鈉分離純化為高純度肝素鈉的方法，以粗品肝素鈉為原料，通過離子交換層析、高錳酸鉀氧化、超濾和有機溶劑分級沉淀生產(chǎn)高純度肝素鈉原料藥。該方法采用化學處理的方法對粗品肝素鈉純化，這將破壞肝素鈉的分子結(jié)構(gòu)，致使豬肝素鈉和牛、羊肝素鈉等無法區(qū)分，而牛、羊肝素鈉的價格及效用往往無法和豬肝素鈉的價格及效用相媲美，這樣最終會較大影響產(chǎn)品的藥用效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有粗品肝素鈉中往往含有較多的雜質(zhì)，純度較低，產(chǎn)品質(zhì)量不高，對后續(xù)的進一步純化成藥用肝素鈉增加了難度，導致所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品往往品質(zhì)不佳，難以滿足要求的問題，提供了一種粗品肝素鈉的除雜工藝，本發(fā)明采用純物理方法對粗品肝素鈉進行除雜，除雜效果好，除雜后的粗品肝素鈉純度較高，降低了后續(xù)進一步純化成藥用肝素鈉的難度，確保最終所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好。本發(fā)明的除雜工藝操作簡單可靠，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是
一種粗品肝素鈉的除雜工藝，所述的除雜工藝具體步驟如下
(I)溶解
先在溶解罐中加入粗品肝素鈉重量10-12倍的水，打開蒸汽閥門，加熱，開啟攪漿，投入粗品肝素鈉溶解，在溶解的過程中控制溫度在60°C以下，粗品肝素鈉完全溶解后得料液；粗品肝素鈉為市售產(chǎn)品；(2)吸附
調(diào)節(jié)料液的PH值在7. 0-7. 5，然后控制料液的溫度在50-60°C，調(diào)節(jié)料液的鹽度至
2.5-3. 0°，向料液中加入羅門哈斯樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加4. 5-6kg羅門哈斯樹脂，攪拌吸附6小時之后，取樣檢測吸附后的料液中肝素鈉的含量，檢測值小于I. 5U/ml,放料收集樹脂；
若檢測值在I. 5U/ml以上則繼續(xù)吸附；羅門哈斯樹脂具體為羅門哈斯FPA98型樹脂，屬于丙烯酸類強堿性陰離子交換樹脂；
(3)洗脫
將步驟(2)收集的樹脂倒入洗脫罐中，加入鹽度21±1°的氯化鈉溶液，氯化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入I. 2-1. 5L氯化鈉溶液的量計，攪拌條件下洗脫3個小時以上，收 集洗脫液，按照以上洗脫操作洗脫3-5次；
(4)沉淀
合并步驟(3)收集到的洗脫液，倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°以上的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到50° -55°為準，靜置沉淀8-10小時，收集沉淀物；
(5)干燥
步驟(4)得到的沉淀物加入酒精度90°以上的酒精進行抽濾脫水，濾干后做烘干處理即可。發(fā)明人經(jīng)過長期生產(chǎn)實踐發(fā)現(xiàn)以豬小腸粘膜為原料采用鹽解、酶解法獲得的粗品肝素鈉，其往往含有較多的雜質(zhì)，純度低，效價通常在70-80U/mg，這樣的粗品肝素鈉難以滿足藥用肝素鈉生產(chǎn)企業(yè)(制藥廠)對粗品肝素鈉原料的要求。由于粗品肝素鈉中存在較多雜質(zhì)，由其是一些常規(guī)手段難以除去的雜質(zhì)，藥用肝素鈉生產(chǎn)企業(yè)采用常規(guī)的純化手段往往很難獲得純度好，效價高的藥用肝素鈉產(chǎn)品，這樣較大影響了藥用肝素鈉產(chǎn)品的產(chǎn)品質(zhì)量，產(chǎn)品的藥用效果不理想。因此藥用肝素鈉生產(chǎn)企業(yè)對于粗品肝素鈉原料提出了更高的要求。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，影響藥用肝素鈉生產(chǎn)企業(yè)提純的主要因素是粗品肝素鈉中存在的2. 3峰雜質(zhì)，該雜質(zhì)因在核磁共振圖譜上顯示在2. 3ppm左右的位置而得名。無論是粗品肝素鈉原料生產(chǎn)企業(yè)，還是藥用肝素鈉生產(chǎn)企業(yè)，采用常規(guī)的方法往往無法去除2. 3峰雜質(zhì)，這樣較大影響了藥用肝素鈉產(chǎn)品的品質(zhì)。本發(fā)明的技術(shù)方案中，鹽度的控制異常關鍵，溫度在50-60°C下調(diào)節(jié)料液的鹽度至
2.5-3. 0°，是影響除雜能否成功的關鍵因素之一，鹽度過高和過低都不能將2. 3峰雜質(zhì)有效除去。本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人多年的研究和技術(shù)路線的優(yōu)化，采用純物理的方法，有效除去了粗品肝素鈉中存在的2. 3峰雜質(zhì)，大大提高了粗品肝素鈉的品質(zhì)，粗品肝素鈉的效價可達140U/mg以上，使得藥用肝素鈉生產(chǎn)企業(yè)在常規(guī)的提純工藝下即可獲得高品質(zhì)的藥用肝素納廣品，提聞了藥效和經(jīng)濟效益。作為優(yōu)選，步驟(2)吸附中，樹脂活化處理后再使用，活化處理為樹脂用50_60°C溫水浸泡20小時以上后用清水沖洗干凈并浙干,再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液pH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計。對樹脂活化處理有利于提高吸附效果，采用本發(fā)明的活化方法，利于獲得更好地吸附效果，同時對于樹脂的再生處理也較為容易。作為優(yōu)選，步驟(2)吸附中，樹脂吸附使用2-3次后需做再生處理，再生處理為樹脂用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液浸泡并攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液pH為中性，浙干備用，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計。作為優(yōu)選，再生處理后的樹脂可以暫時浸泡在鹽度5°的鹽水(氯化鈉溶液)中備用(樹脂保養(yǎng)，使其在使用時有最佳的吸附效果)。作為優(yōu)選，步驟(5)干燥中，抽濾脫水的時間在I個小時以上，烘干處理的溫度為60-70°C，時間為18±2小時。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明采用純物理方法對粗品肝素鈉進行除雜，除雜效果好，除雜后的粗品肝素鈉純度較高，降低了后續(xù)進一步純化成藥用肝素鈉的難度，確保最終所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好。本發(fā)明的除雜工藝操作簡單可靠，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。


圖I是粗品肝素鈉除雜前的核磁共振圖譜；
圖2是圖I的放大 圖3是粗品肝素鈉除雜后的核磁共振圖譜。
具體實施例方式下面通過具體實施例，并結(jié)合附圖，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的具體說明。本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設備等均可從市場購得或是本領域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規(guī)方法。樹脂活化處理
將新的羅門哈斯FPA98型樹脂(市售進口樹脂，經(jīng)銷商北京博賽斯生物技術(shù)有限公司)用50°C溫水浸泡20小時后用清水沖洗干凈并浙干,再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計。研究表明，樹脂活化處理中采用的溫水溫度在50-60°C之間，浸泡時間在16-24小時之間，對樹脂的活化處理效果是等同的，在此不做--贅述。實施例I :
(I)溶解
先在溶解罐中加入粗品肝素鈉(市售，杭州龍揚生物科技有限公司生產(chǎn))重量10倍的水，打開蒸汽閥門，加熱，開啟攪漿，投入粗品肝素鈉溶解，在溶解的過程中控制溫度在60°c以下，粗品肝素鈉完全溶解后得料液。(2)吸附
調(diào)節(jié)料液的PH值在7. 0，然后控制料液的溫度在50°C，調(diào)節(jié)料液的鹽度約至3. 0°，向料液中加入羅門哈斯FPA98型樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加4. 5kg羅門哈斯FPA98型樹脂，攪拌吸附6小時之后，取樣檢測吸附后的料液中肝素鈉的含量，檢測值小于I. 5U/、ml，放料收集樹脂。若檢測值在I. 5U/ml以上，繼續(xù)吸附，直至檢測值小于I. 5U/ml，再放料收集樹脂，這樣的分離效果最佳。(3)洗脫
將步驟(2)收集的樹脂倒入洗脫罐中，加入鹽度21±1°的氯化鈉溶液，氯化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入I. 2L氯化鈉溶液的量計，攪拌條件下洗脫約4個小時，收集洗脫液，按照以上洗脫操作洗脫3次。(4)沉淀
合并步驟(3 )收集到的洗脫液，倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°以上的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到50°左右為準，靜置沉淀8小時，收集沉淀物。(5)干燥· 步驟(4)得到的沉淀物加入酒精度90°以上的酒精進行抽濾脫水約I小時，濾干后，送入烘箱內(nèi)，在溫度約60°C下烘16小時即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明除雜后的粗品肝素鈉的效價> 140U/mg。
實施例2
(I)溶解
先在溶解罐中加入粗品肝素鈉重量12倍的水，打開蒸汽閥門，加熱，開啟攪漿，投入粗品肝素鈉溶解，在溶解的過程中控制溫度在60°C以下，粗品肝素鈉完全溶解后得料液。(2)吸附
調(diào)節(jié)料液的PH值在7. 5，然后控制料液的溫度在60°C，調(diào)節(jié)料液的鹽度約至2. 5°，向料液中加入羅門哈斯FPA98型樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加6kg羅門哈斯FPA98型樹脂，攪拌吸附6小時之后，取樣檢測吸附后的料液中肝素鈉的含量，檢測值小于I. 5U/ml,放料收集樹脂。若檢測值在I. 5U/ml以上，繼續(xù)吸附，直至檢測值小于I. 5U/ml，再放料收集樹脂，這樣的分離效果最佳。(3)洗脫
將步驟(2)收集的樹脂倒入洗脫罐中，加入鹽度21±1°的氯化鈉溶液，鹽水的加入量為每千克樹脂加入I. 5L鹽水的量計，攪拌條件下洗脫約3個小時，收集洗脫液，按照以上洗脫操作洗脫5次。(4)沉淀
合并步驟(3)收集到的洗脫液，倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°以上的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到55°左右為準，靜置沉淀10小時，收集沉淀物。(5)干燥
步驟(4)得到的沉淀物加入酒精度90°以上的酒精進行抽濾脫水約I. 5小時，濾干后，送入烘箱內(nèi)，在溫度約70°C下烘20小時即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明除雜后的粗品肝素鈉的效價> 140U/mg。
實施例3 (I)溶解
先在溶解罐中加入粗品肝素鈉重量11倍的水，打開蒸汽閥門，加熱，開啟攪漿，投入粗品肝素鈉溶解，在溶解的過程中控制溫度在60°C以下，粗品肝素鈉完全溶解后得料液。(2)吸附
調(diào)節(jié)料液的PH值在7. 2，然后控制料液的溫度在55°C，調(diào)節(jié)料液的鹽度約至3. 0°，向料液中加入羅門哈斯FPA98型樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加5kg羅門哈斯FPA98型樹脂，攪拌吸附6小時之后，取樣檢測吸附后的料液中肝素鈉的含量，檢測值小于I. 5U/ml,放料收集樹脂。若檢測值在I. 5U/ml以上，繼續(xù)吸附，直至檢測值小于I. 5U/ml，再放料收集樹脂，這樣的分離效果最佳。(3)洗脫
將步驟(2)收集的樹脂倒入洗脫罐中，加入鹽度21±1°的氯化鈉溶液，鹽水的加入量為每千克樹脂加入I. 3L鹽水的量計，攪拌條件下洗脫約3個小時，收集洗脫液，按照以上洗脫操作洗脫3次。(4)沉淀
合并步驟(3 )收集到的洗脫液，倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°以上的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到52°左右為準，靜置沉淀9小時，收集沉淀物。(5)干燥
步驟(4)得到的沉淀物加入酒精度90°以上的酒精進行抽濾脫水約I小時，濾干后，送入烘箱內(nèi)，在溫度約65°C下烘18小時即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明除雜后的粗品肝素鈉的效價> 140U/mg。本發(fā)明的工藝中，樹脂吸附使用2次或3次后做再生處理(2次或3次后做再生處理效果等同)，再生處理為樹脂用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液浸泡并攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，浙干備用，氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加A IL氫氧化鈉溶液的量計。粗品肝素鈉在除雜前和除雜后的核磁共振圖譜見圖I及圖3 (核磁共振的參數(shù)設置為頻率500MHz，脈沖不少于16，脈沖寬度90度，
采樣時間至少I秒，脈沖間隔20秒，光譜窗口 8000Hz)，從圖I、圖2中看出，粗品肝素鈉在除雜前明顯在2. 3ppm左右的位置存在雜質(zhì)峰(即存在2. 3峰雜質(zhì))，而從圖3中看出，經(jīng)過本發(fā)明的工藝除雜后，粗品肝素鈉的2. 3峰消失了，即2. 3峰雜質(zhì)有效去除了。與現(xiàn)有市售粗品肝素鈉70_80U/mg的效價相比，經(jīng)過本發(fā)明的工藝除雜后的粗品肝素鈉效價在140U/mg以上，本發(fā)明的除雜效果好，降低了后續(xù)進一步純化成藥用肝素鈉的難度，確保最終所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好。本發(fā)明的除雜工藝操作簡單可靠，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。以上所述的實施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。
權(quán)利要求
1.一種粗品肝素鈉的除雜工藝，其特征在于所述的除雜工藝具體步驟如下 (1)溶解 先在溶解罐中加入粗品肝素鈉重量10-12倍的水，打開蒸汽閥門，加熱，開啟攪漿，投入粗品肝素鈉溶解，在溶解的過程中控制溫度在60°C以下，粗品肝素鈉完全溶解后得料液； (2)吸附 調(diào)節(jié)料液的PH值在7. 0-7. 5，然后控制料液的溫度在50-60°C，調(diào)節(jié)料液的鹽度至2.5-3. 0°，向料液中加入羅門哈斯樹脂，按每億國際單位粗品肝素鈉加4. 5-6kg羅門哈斯樹脂，攪拌吸附6小時之后，取樣檢測吸附后的料液中肝素鈉的含量，檢測值小于I. 5U/ml,放料收集樹脂； (3)洗脫 將步驟(2)收集的樹脂倒入洗脫罐中，加入鹽度21±1°的氯化鈉溶液，氯化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入I. 2-1. 5L氯化鈉溶液的量計，攪拌條件下洗脫3個小時以上，收集洗脫液，按照以上洗脫操作洗脫3-5次； (4)沉淀合并步驟(3)收集到的洗脫液，倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°以上的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到50° -55°為準，靜置沉淀8-10小時，收集沉淀物； (5)干燥 步驟(4)得到的沉淀物加入酒精度90°以上的酒精進行抽濾脫水，濾干后做烘干處理即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的粗品肝素鈉的除雜工藝，其特征在于步驟(2)吸附中，樹脂活化處理后再使用，活化處理為樹脂用50-60°C溫水浸泡16-24小時后用清水沖洗干凈并浙干，再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液pH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的粗品肝素鈉的除雜工藝，其特征在于步驟(2)吸附中，樹脂吸附使用2-3次后需做再生處理，再生處理為樹脂用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液浸泡并攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，浙干備用，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3所述的粗品肝素鈉的除雜工藝，其特征在于步驟(5)干燥中，抽濾脫水的時間在I個小時以上，烘干處理的溫度為60-70°C，時間為18±2小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種粗品肝素鈉的除雜工藝，其目的在于解決現(xiàn)有粗品肝素鈉中往往含有較多的雜質(zhì)，純度較低，產(chǎn)品質(zhì)量不高，對后續(xù)的進一步純化成藥用肝素鈉增加了難度，導致所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品往往品質(zhì)不佳，難以滿足要求的問題。本發(fā)明采用純物理方法對粗品肝素鈉進行溶解、吸附、洗脫、沉淀和干燥處理，以對粗品肝素鈉除雜。本發(fā)明對粗品肝素鈉除雜效果好，除雜后的粗品肝素鈉純度較高，降低了后續(xù)進一步純化成藥用肝素鈉的難度，確保最終所獲得的藥用肝素鈉產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好。本發(fā)明的除雜工藝操作簡單可靠，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C08B37/10GK102746421SQ20121016179
公開日2012年10月24日 申請日期2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月23日
發(fā)明者潘為中, 潘為群, 花瑞華 申請人:杭州龍揚生物科技有限公司