專利名稱：球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋生化工程領(lǐng)域，具體涉及一種球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝。
背景技術(shù)：
球等鞭金藻(J1SocAzy1Si1S富含多不飽和脂肪酸,蛋白質(zhì)和多糖,營養(yǎng)豐富，是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中常用的餌料微藻。以往研究主要集中在多不飽和脂肪酸上。近年來，隨著微藻多糖研究的深入，對球等鞭金藻多糖的研究日益增多。然而，相對于其它微藻多糖的研究而言，球等鞭金藻多糖的研究尚處于起步階段，其多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定以及生理活性等還未見報道。其中，對其胞外多糖的研究則更少。海洋微藻在生長過程中會不斷向外分泌粘性物質(zhì),稱為胞外產(chǎn)物(Extracellular
products, ECP)ο 胞外多糖(Extracellular polysaccharides, ECPS)是胞外產(chǎn)物的主要組成成分，在海洋生態(tài)系統(tǒng)的微食物鏈及微生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。研究表明，微藻胞外多糖具有抗腫瘤、抗病毒、抗輻射和免疫調(diào)節(jié)等生理活性，并且，由于海洋微藻的生長條件和環(huán)境特點決定了其可能具有一些有別于陸生植物多糖的結(jié)構(gòu)和功能，此類多糖在醫(yī)藥和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用潛力越來越引起人們對其的研究興趣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的工藝更為合理的球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明是一種球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，其特點是，其步驟如下
(I)選取培養(yǎng)至指數(shù)生長階段的球等鞭金藻培養(yǎng)物，5000 rpm/ min下離心15 min,取上清液經(jīng)O. 22 Mffl微孔濾膜過濾后，45°C下減壓濃縮；冷凍干燥后，獲得白色粉末狀的胞外物質(zhì)；
(2 )取胞外物質(zhì)，加入蒸餾水中，蒸餾水與胞外物質(zhì)的質(zhì)量比為15:1，混合均勻后，用O. 5 M NaOH調(diào)節(jié)pH至9.0，在70°C水浴鍋中提取240 min ;提取結(jié)束后，5000 rpm/ min下離心5 min，取上清液加入質(zhì)量濃度3%的三氯乙酸，4°C下靜置4 h后，5000 rpm/ min下離心5 min,棄去沉淀；上清液加入3倍體積無水乙醇，4°C下靜置24 h, 5000 rpm/ min下離心5 min，收集白色乳狀沉淀；沉淀依次經(jīng)丙酮、無水乙醇洗脫后，40°C下烘干，粉碎后，得白色粉末狀物質(zhì)即為球等鞭金藻胞外粗多糖(ECPS)；
(3)采用DEAE-52離子交換柱層析對球等鞭金藻胞外粗多糖進(jìn)行分離，獲得中性多糖(ECPS I )和酸性多糖(ECPS II)組分；
(4)采用SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離純化中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分。其中，中性多糖組分經(jīng)分離，得到3個組分，分別記為ECPS I -A、ECPS I -B和ECPS I -C ;酸性多糖組分經(jīng)分離，得到5個組分，分別記為ECPS II -A、ECPS II -B、ECPS II -C、ECPS II -D 和 ECPS II -E ；
(5)上述8個多糖組分，除ECPS II -A組分外，其余多糖組分量很少，故此，僅富集ECPS II -A組分。多次富集，經(jīng)減壓濃縮后，將其加載于S^hadex G-IOO凝膠柱層析。洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到白色粉末狀固體，為胞外純多糖，記為 ECPS III。本發(fā)明所述的球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，步驟(3)、(4)和(5)進(jìn)一步優(yōu)選的方案如下
(3)球等鞭金藻胞外粗多糖溶解于蒸餾水后，加載于DEAE-52離子交換層析柱，依次用蒸懼水和I. O mol/L NaOH進(jìn)行洗脫,每管收集3 1^,流速為1.5 mL/min,以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分，換用下一洗脫液。多糖組分合并收集后，減壓濃縮(用NaOH進(jìn)行洗脫所收集的餾分先經(jīng)透析后，再減壓濃縮)，分別獲得中性多糖(ECPS I )和酸性多糖(ECPS II)組分； (4)采用SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離純化中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分，以蒸餾水為洗脫液，每管收集3 mL，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測。中性多糖組分ECPS I經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析分離后，獲得3個組分，分別記為 ECPS I -A,ECPS I -B 和 ECPS I -C ;ECPS II 經(jīng) S印hadex G-100 凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得 5 個組分，分別記為 ECPS II -A,ECPS II -B,ECPS II -C,ECPS II -D 和 ECPS II -E ；
(5)上述8個多糖組分，除ECPSII -A外，其它組分量很少，因此，僅富集ECPS II -A組分。多次富集，經(jīng)減壓濃縮后，將其加載于Sephadex G-100凝膠柱層析，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 !^，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測。洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到白色粉末狀固體，為胞外純多糖，記為ECPS III。本發(fā)明方法建立了球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，該工藝簡單合理，而且具有穩(wěn)定的重現(xiàn)性和良好的可操作性。該工藝填補(bǔ)了國內(nèi)外球等鞭金藻胞外多糖分離純化研究領(lǐng)域的空白，為后續(xù)研究此多糖的生理活性奠定了良好的實驗基礎(chǔ)；并且，該微藻多糖與其它多糖類物質(zhì)一樣，可以在醫(yī)藥和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到應(yīng)用。


圖I球等鞭金藻胞外多糖分離純化工藝流程 圖2為球等鞭金藻胞外粗多糖經(jīng)DEAE-52離子交換柱層析的洗脫曲線；
圖3為球等鞭金藻胞外中性多糖經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析的洗脫曲線；
圖4為球等鞭金藻胞外酸性多糖經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析的洗脫曲線；
圖5為球等鞭金藻胞外多糖組分ECPS II -A經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析的洗脫曲線。
具體實施例方式以下參照附圖，進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。實施例1，參照圖I，一種球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，其步驟如下
(I)選取培養(yǎng)至指數(shù)生長階段的球等鞭金藻培養(yǎng)物，5000 rpm/ min下離心15 min,取上清液經(jīng)O. 22 Mffl微孔濾膜過濾后，45°C下減壓濃縮；冷凍干燥后，獲得白色粉末狀的胞外物質(zhì)；
(2 )取胞外物質(zhì)，加入蒸餾水中，蒸餾水與胞外物質(zhì)的質(zhì)量比為15:1，混合均勻后，用O. 5 M NaOH調(diào)節(jié)pH至9.0，在70°C水浴鍋中提取240 min ;提取結(jié)束后，5000 rpm/ min下離心5 min，取上清液加入質(zhì)量濃度3%的三氯乙酸，4°C下靜置4 h后，5000 rpm/ min下離心5 min,棄去沉淀；上清液加入3倍體積無水乙醇，4°C下靜置24 h, 5000 rpm/ min下離心5 min，收集白色乳狀沉淀；沉淀依次經(jīng)丙酮、無水乙醇洗脫后，40°C下烘干，粉碎后，得白色粉末狀物質(zhì)即為球等鞭金藻胞外粗多糖；
(3)采用DEAE-52離子交換柱層析對球等鞭金藻胞外粗多糖進(jìn)行分離，獲得中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分；
(4)采用SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離純化中性多糖和酸性多糖組分；其中，中性多糖組分經(jīng)分離，得到3個組分，分別記為ECPS I -A,ECPS I -B和ECPS I -C ;酸 性多糖組分經(jīng)分離，得到5個組分，分別記為ECPS II -A,ECPS II -B,ECPS II -C,ECPS II -D和 ECPS II -E ；
(5)富集上述8個多糖組分中多糖組分量最大的ECPSII -A ;經(jīng)多次富集，經(jīng)減壓濃縮后，將其加載于Sephadex G-100凝膠柱層析；洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到白色粉末狀固體，為胞外純多糖，記為ECPS III。實施例2，參照圖I，一種球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，其步驟如下
(I)選取培養(yǎng)至指數(shù)生長階段的球等鞭金藻培養(yǎng)物，5000 rpm/ min下離心15 min,取上清液經(jīng)O. 22 Mffl微孔濾膜過濾后，45°C下減壓濃縮；冷凍干燥后，獲得白色粉末狀的胞外物質(zhì)；
(2 )取胞外物質(zhì)，加入蒸餾水中，蒸餾水與胞外物質(zhì)的質(zhì)量比為15:1，混合均勻后，用
O.5 M NaOH調(diào)節(jié)pH至9.0，在70°C水浴鍋中提取240 min ;提取結(jié)束后，5000 rpm/ min下離心5 min，取上清液加入質(zhì)量濃度3%的三氯乙酸，4°C下靜置4 h后，5000 rpm/ min下離心5 min,棄去沉淀；上清液加入3倍體積無水乙醇，4°C下靜置24 h, 5000 rpm/ min下離心5 min，收集白色乳狀沉淀；沉淀依次經(jīng)丙酮、無水乙醇洗脫后，40°C下烘干，粉碎后，得白色粉末狀物質(zhì)即為球等鞭金藻胞外粗多糖；
(3)球等鞭金藻胞外粗多糖溶解后，加載于DEAE-52離子交換層析柱，依次用蒸餾水和1.0 mol/L NaOH進(jìn)行洗脫,每管收集3 mL,流速為1.5 mL/min,以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分，換用下一洗脫液；多糖組分合并收集后，用NaOH進(jìn)行洗脫所收集的餾分先經(jīng)透析后，再減壓濃縮，分別獲得中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分；
(4)采用SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離純化中性多糖和酸性多糖組分，以蒸餾水為洗脫液，每管收集3 mL，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測；中性多糖組分ECPS I經(jīng)S印hadex G-100凝膠柱層析分離后，獲得3個組分，分別記為ECPS I -A、ECPS I -B和ECPS I -C ;ECPS II經(jīng)S印hadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得5個組分，分別記為 ECPS II -A, ECPS II -B、ECPS II -C、ECPS II -D 和 ECPS II -E ；
(5)富集上述8個多糖組分中多糖組分量最大的ECPSII -A，經(jīng)多次富集，經(jīng)減壓濃縮后，將其加載于Sephadex G-100凝膠柱層析，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 !^，流速為1.5mL/min,餾分采用硫酸_蒽酮法檢測；洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到白色粉末狀固體，為胞外純多糖，記為ECPS III。實施例3，球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝實驗一，其步驟如下
稱取實施例I步驟(2)制取的球等鞭金藻胞外粗多糖O. 5 g，溶解于100 mL蒸餾水中后，加載于DEAE-52離子交換柱層析，先用蒸餾水洗脫，每管收集3 1^，流速為1.5 mL/min,以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分。多糖組分合并收集，減壓濃縮至10 mL,得到中性多糖組分(ECPS I)。隨后，用1.0 mol/L NaOH繼續(xù)洗脫，每管收集3 mL，流速為
1.5mL/min，以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分。多糖組分合并收集，透析24 h后,減壓濃縮至10 mL,得到酸性多糖組分(ECPS II)。采用Sephadex G-100柱層析進(jìn)一步純化中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 mL,流速為I. 5 mL/min,懼分采用硫酸-蒽酮法檢測。中性多糖組分ECPS I經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得3個組分，分別記為ECPS I -A, ECPS I -B和ECPS I -C;ECPS II經(jīng)S印hadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得5個組分，依次記為ECPS II -A、ECPS II -B、ECPS II -C、ECPS II -D 和 ECPS II -E (上述 8 個多糖組分，除 ECPS II -A 組分 夕卜，其它組分量很少)。將ECPS II -A加載于Sephadex G-100凝膠柱層析，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 mL，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測。洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到O. 190 g胞外純多糖。本實施例中，球等鞭金藻胞外粗多糖經(jīng)DEAE-52離子交換柱層析的洗脫曲線參見圖2 ;球等鞭金藻胞外中性多糖經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析的洗脫曲線參見圖3 ;球等鞭金藻胞外酸性多糖經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析的洗脫曲線參見圖4 ;球等鞭金藻胞外多糖組分ECPS II -A經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析的洗脫曲線參見圖5。本實施例制得的胞外純多糖ECPS III的檢測方法如下
胞外純多糖ECPS III重新溶解于蒸餾水中，制備成多糖溶液。依次采用下列方法，鑒定并檢測其純度。①經(jīng)蒽酮-硫酸顯色反應(yīng)，ECPS III溶液呈現(xiàn)藍(lán)綠色，表明ECPS III為多糖類物質(zhì)；經(jīng)碘溶液實驗和茚三酮反應(yīng)檢測，溶液均未出現(xiàn)顏色反應(yīng)，表明，ECPS III不含淀粉，也不含游離(或結(jié)合)蛋白質(zhì)。②由于多糖在分子大小上表現(xiàn)為連續(xù)變化，所以它的純化只代表某一多糖的相似鏈長的平均分布，所以，可以用凝膠柱層析來檢測其純度。將此多糖溶液加載于SephadexG-100凝膠柱層析，蒸餾水洗脫，流速為I. 5 mL/min，每管收集3 mL，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測。經(jīng)洗脫，得到單一的峰形對稱的洗脫峰。結(jié)果表明，ECPS III為均一多糖。實施例4，球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝實驗二，其步驟如下
稱取實施例I步驟(2)制取的球等鞭金藻胞外粗多糖O. 4 g，溶解于80 mL蒸餾水中后，加載于DEAE-52離子交換柱層析，先用蒸餾水洗脫，每管收集3 1^，流速為1.5 mL/min,以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分。多糖組分合并收集，減壓濃縮至8 mL,得到中性多糖組分(ECPS I)。隨后，用1.0 mol/L NaOH繼續(xù)洗脫，每管收集3 mL，流速為
1.5mL/min，以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分。多糖組分合并收集，透析24 h后,減壓濃縮至8 mL,得到酸性多糖組分(ECPS II)。采用Sephadex G-100柱層析進(jìn)一步純化中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 mL,流速為I. 5 mL/min,懼分采用硫酸-蒽酮法檢測。中性多糖組分ECPS I經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得3個組分，分別記為ECPS I -A, ECPS I -B和ECPS I -C;ECPS II經(jīng)S印hadex G-IOO凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得5個組分，依次記為ECPS II -A、ECPS II -B,ECPS II -C,ECPS II -D 和 ECPS II -E。將 ECPS II -A 組分加載于 S印hadex G-100凝膠柱層析，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 mL，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測。洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到O. 150 g胞外純多糖。實施例5，球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝實驗三，其步驟如下
稱取實施例I步驟(2)制取的球等鞭金藻胞外粗多糖O. 3 g，溶解于60 mL蒸餾水中后，加載于DEAE-52離子交換柱層析，先用蒸餾水洗脫，每管收集3 1^，流速為1.5 mL/min,以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分。多糖組分合并收集，減壓濃縮至6 mL,得到中性多糖組分(ECPS I)。隨后，用1.0 mol/L NaOH繼續(xù)洗脫，每管收集3 mL，流速為
1.5mL/min，以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分。多糖組分合并收集，透析24 h后,減壓濃縮至6 mL,得到酸性多糖組分(ECPS II)。采用Sephadex G-100柱層析進(jìn)一步純化中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 mL,流 速為I. 5 mL/min,懼分采用硫酸-蒽酮法檢測。中性多糖組分ECPS I經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得3個組分，分別記為ECPS I -A, ECPS I -B和ECPS I -C;ECPS II經(jīng)S印hadex G-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離后，獲得5個組分，依次記為ECPS II -A、ECPS II -B,ECPS II -C,ECPS II -D 和 ECPS II -E。將 ECPS II -A 組分加載于 S印hadex G-100凝膠柱層析，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 mL，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測。洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥后，得到O. 108 g胞外純多糖。
權(quán)利要求
1.一種球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，其特征在于，其步驟如下 (1)選取培養(yǎng)至指數(shù)生長階段的球等鞭金藻培養(yǎng)物，5000rpm/ min下離心15 min,取上清液經(jīng)O. 22 Mffl微孔濾膜過濾后，45°C下減壓濃縮；冷凍干燥后，獲得白色粉末狀的胞外物質(zhì)； (2)取胞外物質(zhì)，加入蒸餾水中，蒸餾水與胞外物質(zhì)的質(zhì)量比為15:1，混合均勻后，用O.5 M NaOH調(diào)節(jié)pH至9.0，在70°C水浴鍋中提取240 min ;提取結(jié)束后，5000 rpm/ min下離心5 min，取上清液加入質(zhì)量濃度3%的三氯こ酸，4°C下靜置4 h后，5000 rpm/ min下離心5 min,棄去沉淀；上清液加入3倍體積無水こ醇，4°C下靜置24 h, 5000 rpm/ min下離心5 min，收集白色乳狀沉淀；沉淀依次經(jīng)丙酮、無水こ醇洗脫后，40°C下烘干，粉碎后，得白色粉末狀物質(zhì)即為球等鞭金藻胞外粗多糖ECPS ； (3)采用DEAE-52離子交換柱層析對球等鞭金藻胞外粗多糖進(jìn)行分離，獲得中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分； (4)采用SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)ー步分離純化中性多糖和酸性多糖組分；其中，中性多糖組分經(jīng)分離，得到3個組分，分別記為ECPS I -A,ECPS I -B和ECPS I -C ;酸性多糖組分經(jīng)分離，得到5個組分，分別記為ECPS II -A,ECPS II -B,ECPS II -C,ECPS II -D和 ECPS II -E ； (5)富集上述8個多糖組分中多糖組分量最大的ECPSII -A ;經(jīng)多次富集，經(jīng)減壓濃縮后，將其加載于Sephadex G-100凝膠柱層析；洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)こ醇沉淀和冷凍干燥后，得到白色粉末狀固體，為胞外純多糖，記為ECPS III。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，其特征在于，所述的步驟(3)、(4)和(5)的具體操作如下 (3)球等鞭金藻胞外粗多糖溶解后，加載于DEAE-52離子交換層析柱，依次用蒸餾水和1.0 mol/L NaOH進(jìn)行洗脫,姆管收集3 mL,流速為1.5 mL/min,以硫酸-蒽酮法檢測多糖，直至檢測不出多糖組分，換用下一洗脫液；多糖組分合并收集后，用NaOH進(jìn)行洗脫所收集的餾分先經(jīng)透析后，再減壓濃縮，分別獲得中性多糖ECPS I和酸性多糖ECPS II組分； (4)采用SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)ー步分離純化中性多糖和酸性多糖組分，以蒸餾水為洗脫液，每管收集3 mL，流速為1.5 mL/min，餾分采用硫酸-蒽酮法檢測；中性多糖組分ECPS I經(jīng)S^hadex G-100凝膠柱層析分離后，獲得3個組分，分別記為ECPS I -A、ECPS I -B和ECPS I -C ；ECPS II經(jīng)S^hadex G-100凝膠柱層析進(jìn)ー步分離后，獲得5個組分，分別記為 ECPS II -A, ECPS II -B、ECPS II -C、ECPS II -D 和 ECPS II -E ； (5)富集上述8個多糖組分中多糖組分量最大的ECPSII -A，經(jīng)多次富集，經(jīng)減壓濃縮后，將其加載于Sephadex G-100凝膠柱層析，用蒸餾水進(jìn)行洗脫，每管收集3 !11し流速為1.5mL/min,餾分采用硫酸_蒽酮法檢測；洗脫后，獲得單一多糖組分，經(jīng)こ醇沉淀和冷凍干燥后，得到白色粉末狀固體，為胞外純多糖，記為ECPS III。
全文摘要
一種球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，它以球等鞭金藻培養(yǎng)液為原料制得球等鞭金藻胞外粗多糖；采用離子交換柱層析對球等鞭金藻胞外粗多糖ECPS進(jìn)行分離，獲得中性多糖和酸性多糖組分；將中性多糖和酸性多糖組分加載于凝膠柱層析，獲得8個組分，除ECPSⅡ-A組分外，其余多糖組分量較少；采用凝膠柱層析純化ECPSⅡ-A組分，獲得單一多糖組分。經(jīng)乙醇沉淀和冷凍干燥，制備到胞外純多糖ECPSⅢ。本發(fā)明方法建立了球等鞭金藻胞外多糖的分離純化工藝，該工藝簡單合理，而且具有穩(wěn)定的重現(xiàn)性和良好的可操作性。為后續(xù)研究此多糖的生理活性奠定了良好的實驗基礎(chǔ)；并且該微藻多糖與其它多糖類物質(zhì)一樣，可以在醫(yī)藥和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到應(yīng)用。
文檔編號C08B37/00GK102838684SQ20121036846
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者孫穎穎 申請人:淮海工學(xué)院