采用離子交換樹脂對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行脫色的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種采用離子交換樹脂對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行脫色的方法，包括如下步驟：a)對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行預(yù)處理，得到分子量范圍為30KD～300KD的精制紫芝多糖；b)將步驟a)獲得的精制紫芝多糖置于離子交換樹脂，在脫色時間2～4h，樹脂用量0.25g～0.75g/10ml，脫色溫度25～35℃、pH值6～7的脫色條件下進行脫色，得到脫色之后的紫芝多糖。按照本發(fā)明方法得到脫色之后的紫芝多糖，其實際脫色率為85％～90％，多糖回收率為65％～70％。
【專利說明】采用離子交換樹脂對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行脫色的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種采用離子交換樹脂對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體多糖液進行脫色的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫芝(Ganoderma sinense)是我國名貴中藥靈芝的一種(國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S]2010年版一部北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:174)，是祖國中醫(yī)藥寶庫中的珍品，素有"仙草"之譽。古今藥理與臨床研究均證明，紫芝確有防病治病、延年益壽之功效。東漢時期的《神農(nóng)本草經(jīng)》、明代著名醫(yī)藥學(xué)家李時珍的《本草綱目》，都對紫芝的功效有詳細的極為肯定的記載?，F(xiàn)代藥理學(xué)與臨床實踐進一步證實了紫芝的藥理作用，大量研究表明紫芝多糖是其主要活性成分之一，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤(楊國紅，楊義芳，金雋迪.紫芝液體深層發(fā)酵液的抗腫瘤活性部位研究[J].中草藥，2008，39 (6):877-880)、抗氧化、抗病毒、降血糖和保肝等藥理作用，并證實紫芝多糖是紫芝扶正固本、滋補強壯、延年益壽的主要成分。
[0003]紫芝多糖產(chǎn)品顏色深、色素較多，嚴(yán)重影響多糖的純度、色度、生物活性，也阻礙了對多糖結(jié)構(gòu)與其生物活性關(guān)系的深入研究，因此在純化過程中應(yīng)當(dāng)進行脫色(羅璽，唐慶九*，張勁松，等.靈芝多糖 樹脂法脫色工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué)，2011,32(16):5-10)。傳統(tǒng)脫色方法一般有活性炭吸附、雙氧水氧化法等，其中活性炭法脫色時間較長，多糖保留率低，雙氧水是強氧化劑，容易破壞多糖結(jié)構(gòu)，影響其活性(袁紅波，張勁松，賈薇，等.利用大孔樹脂對低分子量靈芝多糖脫色的研究[J].食品工業(yè)科技，2009，30 (3):204-206)。
[0004]大孔樹脂脫色技術(shù)近年來常應(yīng)用于中草藥有效成分的脫色。大孔樹脂具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、比表面積大、處理能力大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、成本不高等諸多優(yōu)點，因此可利用樹脂的選擇性吸附功能將多糖中的色素除去。國內(nèi)外文獻大多采取正交試驗?zāi)Ｐ蛯`芝多糖脫色工藝進行優(yōu)化，而基于響應(yīng)面法(response surface methodology, RSM)對紫芝發(fā)酵多糖脫色優(yōu)化工藝的報道尚未出現(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明在單因素試驗的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面分析法對紫芝發(fā)酵多糖脫色工藝進行優(yōu)化，并結(jié)合實際生產(chǎn)條件，確定合理的脫色工藝參數(shù)，旨為后續(xù)紫芝多糖的分離純化和活性研究提供基礎(chǔ)，同時為脫色產(chǎn)業(yè)化提供一定的理論依據(jù)。
[0006]因此，本發(fā)明提供一種采用離子交換樹脂對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行脫色的方法，包括如下步驟:
[0007]a)對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行預(yù)處理，得到分子量范圍為30KD~300KD的精制紫芝多糖；
[0008]b)將步驟a)獲得的精制紫芝多糖置于離子交換樹脂，在脫色時間2~4h，樹脂用量0.25g~0.75g/10ml，脫色溫度25~35°C、pH值6~7的脫色條件下進行脫色，得到脫色之后的紫芝多糖。
[0009]本發(fā)明所使用的術(shù)語“紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖”是指利用液體深層發(fā)酵技術(shù)從菌絲體中提取的紫芝粗多糖。具體制備方法為將發(fā)酵完成的放罐液進行板框過濾，棄去胞外液，取過濾后菌絲體；將菌絲體用去離子水洗滌，洗至板框濾出液為無色透明并不再產(chǎn)生氣泡，過濾稱重，將洗滌過濾后的菌絲體稱重，按菌絲體重量加適量倍數(shù)去離子水，置浸泡罐以一定時間加熱提取數(shù)次后于板框過濾分離，提取液經(jīng)過刮板濃縮及單罐濃縮至一定量后加該濃縮液適量倍數(shù)質(zhì)量的85%乙醇于4°C放置12h ;將醇沉物置離心機1200r/min離心分離，取沉淀物；將濕醇沉物裝盤后放入箱式烘干器，控制真空度加熱至30~40°C烘干2h后取出醇沉物，粉碎；粉碎后重新裝盤，再放入烘箱，緩慢升溫至65°C烘干2h，最后得紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖。
[0010]根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，步驟a)所述的預(yù)處理包括如下步驟:
[0011]I)將紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖按液料比150:1~250:1溶解于水中；
[0012]2)以4000~5000rpm/min的速率離心兩次或兩次以上，取上清液，每次離心20~40min ；
[0013]3)上清液在溫度20~40°C、壓力0.02~0.06Mpa條件下過30KD中空纖維超濾膜，截留液稀釋后過300KD中空纖維超濾膜，超濾液濃縮冷凍干燥后，得精制紫芝多糖。
[0014]本發(fā)明所使用的術(shù)語“液料比”是指“液”的體積除以“料”的質(zhì)量，這里“液”指水，單位用ml，“料”指紫芝粗多糖，單位用g。
[0015]根據(jù)本發(fā)明一個特別優(yōu)選的實施方式，步驟I)中所述液料比為180: I~220: 1，更優(yōu)選 200: I。
[0016]根據(jù)本發(fā)明一個特別優(yōu)選的實施方式，步驟I)中所述水為去離子水。
[0017]根據(jù)本發(fā)明一個特別優(yōu)選的實施方式，步驟2)中所述離心速率為4500~5000rpm/min,更優(yōu)選 5000rpm/min ;離心時間為 25 ~35min,更優(yōu)選 30min。
[0018]根據(jù)本發(fā)明一個特別優(yōu)選的實施方式，步驟b)所述的離子交換樹脂為LS-850陰離子交換樹脂。
[0019]根據(jù)本發(fā)明一個特別優(yōu)選的實施方式，步驟b)中脫色時間為2.5h，樹脂用量為
0.75g/10ml，脫色溫度為28°C，pH值為6。
[0020]本發(fā)明所述脫色方法為將樹脂和紫芝多糖溶液置入具塞錐形瓶中，然后將錐形瓶置于搖床中進行。所述搖床的轉(zhuǎn)速為100~140r/min,優(yōu)選120r/min。
[0021]按照本發(fā)明方法得到脫色之后的紫芝多糖，其實際脫色率為85%~90%，多糖回收率為65%~70% ;在本發(fā)明最佳脫色條件下紫芝多糖的平均脫色率為87.8%，多糖回收率為65%~70%。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為實施例1所述的不同種類樹脂對紫芝多糖的脫色效果；
[0023]圖2為實施例2所述的脫色時間對紫芝多糖脫色效果的影響；
[0024]圖3為實施例3所述的樹脂用量對紫芝多糖脫色效果的影響；
[0025]圖4為實施例4所述的溫度對紫芝多糖脫色效果的影響；[0026]圖5為實施例5所述的pH值對紫芝多糖脫色效果的影響。
【具體實施方式】
[0027]原材料和試劑
[0028]用于以下實施例1-5的紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖的制備:將發(fā)酵完成的放罐液進行板框過濾，棄去胞外液，取過濾后菌絲體；將菌絲體用去離子水洗滌,洗至板框濾出液為無色透明并不再產(chǎn)生氣泡，過濾稱重，將洗滌過濾后的菌絲體稱重，按菌絲體重量加適量倍數(shù)去離子水，置浸泡罐以一定時間加熱提取數(shù)次后于板框過濾分離，提取液經(jīng)過刮板濃縮及單罐濃縮至一定量后加該濃縮液適量倍數(shù)質(zhì)量的85%乙醇于4°C放置12h ;將醇沉物置離心機1200r/min離心分離，取沉淀物裝盤后放入箱式烘干器，控制真空度加熱至30~40°C烘干2h后取出醇沉物，粉碎；粉碎后重新裝盤，再放入烘箱，緩慢升溫至65°C烘干2h，最后得紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖。
[0029]用于以下實施例1-5的精制紫芝多糖溶液的制備:紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖按液料比200: I溶解于雙蒸水中，離心(5000rpm/min)處理兩次，每次20分鐘，取上清液過30KD中空纖維超濾膜，截留液稀釋后過300KD中空纖維超濾膜，超濾液濃縮冷凍干燥后，得精制多糖GS-B，經(jīng)HPLC測定相對分子量為30KD~300KD ;取上述紫芝多糖GS-B
1.0g,溶解在100mL (液料比100:1)雙蒸水中，靜置30分鐘,離心(5000rpm/min)處理30分鐘，取上清液得精制紫芝多糖溶液；
[0030]離子交換樹脂DlOl、AB-8、XAD7-HP、LS-840、LS-850 (陜西藍深特種樹脂有限公司);苯酚、葡萄糖、硫酸、鹽酸、氫氧化鈉分析純(國藥集團試劑有限公司)。
[0031]設(shè)備儀器: [0032]UV-25OOPC(日本Shimadzu) ;AB204_S型電子天平(瑞士MettlerFoledo) ；PHS-3C型PH計(上海雷磁儀器有限公司)；ZHWY-3122A雙層特大容量搖瓶機(上海智城分析儀器制造有限公司)；BT01-100恒流泵(保定蘭格恒流泵有限公司)；BS-100A型自動收集儀(上海滬西分析儀器廠)。
[0033]多糖的檢測:多糖采用苯酚-硫酸法檢測。精確稱取105°C干燥至恒重的無水葡萄糖0.2540g，溶解定容于1000ml容量瓶中配成濃度為0.254mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，精確量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液并加蒸餾水至總體積為300 μ I ;以加蒸餾水的試管為空白，然后各加5%苯酚溶液300 μ 1，硫酸4.0ml，迅速搖勻在室溫下放置30min，于488nm處測定吸光度。以葡萄糖含量(Ug)為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A =
0.01lx+0.081 (R2 = 0.9982)
[0034]按式⑴計算多糖回收率(R1)。
[0035]R1 = M/M0*100%(I)
[0036]式中:
[0037]M-脫色后多糖含量，g ；
[0038]M0-脫色前多糖含量，go
[0039]脫色率(R2)的測定:以蒸餾水為空白，將多糖溶液進行全波長檢測，選擇吸收最大(263nm)處測定吸光度。
[0040]R2 = (A0-A)/A0^lOO %(2)[0041]式中:
[0042]A0-脫色前吸光度；
[0043]A-脫色后吸光度。
[0044]實施例1:樹脂篩選
[0045]取5種處理過的樹脂各0.5g，置入具塞錐形瓶中，每瓶加入IOml精制紫芝多糖溶液，置于搖床中，轉(zhuǎn)速120r/min,恒溫30°C,振搖3h,結(jié)果見圖1。
[0046]樹脂對大分子物質(zhì)的吸附主要以兩種方式進行:一是樹脂上的離子與吸附物質(zhì)的離子交換將其吸附；二是相似相吸，依靠次級鍵(疏水作用力、范德華力等)對物質(zhì)進行吸附。脫色效果除了主要考察脫色率外，還需要同時兼顧多糖回收率這項指標(biāo)。由圖1可知，LS-850陰離子交換樹脂對紫芝多糖脫色效果大大優(yōu)于其它類型樹脂(如圖1所示)。LS-850中陰離子通過離子鍵的形式與紫芝多糖中色素陰離子交換，并且色素的非極性部分與樹脂基質(zhì)中的基團以疏水力結(jié)合，從而達到脫色目的。因此本發(fā)明優(yōu)選LS-850陰離子交換樹脂對紫芝多糖進行脫色。
[0047]以下實施例2-5以LS-850為脫色樹脂研究對象，選取4個因素即脫色時間，樹脂用量，脫色溫度，PH值4個影響因素，研究其對紫芝多糖脫色效果的影響，以確定脫色因素變化范圍以及最佳響應(yīng)曲面考察范圍。
[0048]實施例2:脫色時間的影響
[0049]精確量取紫芝多糖溶液IOml 5份，在相同的樹脂用量LS-8500.5g、溫度為30°C、pH值為6.0的條件下，考察不同時間對脫色的影響，結(jié)果見圖2。
[0050]由圖2可知，隨著時間的延長，樹脂脫色效果明顯增強，LS-850樹脂到3h后，脫色率開始增加緩慢，并有減小的趨勢，說明色素的吸附和解吸活動開始朝著動態(tài)平衡方向發(fā)展。而多糖得率基本上與脫色率呈現(xiàn)相反的趨勢，4h以后，多糖得率幾乎不再下降。為了將多糖中的色素更多的去除，并且盡可能的減少多糖的損失，綜合考慮兩個指標(biāo)，將本發(fā)明方法的脫色時間響應(yīng)面分析考察范圍優(yōu)選為2~4h。
[0051]實施例3:樹脂用量的影響
[0052]精確量取紫芝多糖溶液IOml 5份，在相同的脫色時間為3h、溫度為30°C、pH值為
6.0的條件下，考察不同樹脂用量對脫色的影響，結(jié)果見圖3。
[0053]由圖3可知，隨著樹脂用量的增加，脫色率呈現(xiàn)上升趨勢，但當(dāng)樹脂用量達到0.5g以后，脫色率增加的趨勢明顯放緩，此時多糖回收率依然繼續(xù)走低。為了后續(xù)科學(xué)研究或工業(yè)上進一步深加工處理，盡可能增加脫色效果的同時兼顧較高的多糖回收率，降低多糖損耗率，故本發(fā)明方法的樹脂用量響應(yīng)面分析考察范圍優(yōu)選為0.25g~0.75g。
[0054]實施例4:脫色溫度的影響
[0055]精確量取紫芝多糖溶液1Oml 5份，在相同的脫色時間為3h、樹脂用量為0.5g、PH值為6.0的條件下，考察不同脫色溫度對脫色的影響，結(jié)果見圖4。
[0056]由圖4可知，溫度越高，理論上色素分子的擴散速度越快，多糖溶液粘度也下降，這有利于色素的吸附。由圖4可知，溫度在35°C時脫色率最高，而溫度在25°C時多糖得率最高，綜合考慮兩個指標(biāo)，將本發(fā)明方法的脫色溫度響應(yīng)面分析考察范圍優(yōu)選為25~35°C。
[0057]實施例5:pH值的影響
[0058]精確量取紫芝多糖溶液IOml 7份，在相同的脫色時間為3h、樹脂用量為0.5g、溫度為30°C的條件下，考察不同pH值對脫色的影響，結(jié)果見圖5。
[0059]pH值會影響溶液中分子的帶電情況，從而影響它們與樹脂作用力的大小，合適的PH值能促使樹脂吸附更多的色素并且減少多糖的損失。紫芝多糖為酸多糖，經(jīng)檢測pH值大約為6，呈弱酸性，由圖5可知，在pH值為6-7時，能較好的兼顧脫色率和多糖回收率兩項指標(biāo)?？紤]到為給后續(xù)響應(yīng)面分析減少實驗次數(shù)，即減少一個考察因素，優(yōu)選將溶液的PH值確定為6，即不改變紫芝多糖溶液的pH值。
[0060]實施例6:
[0061]將發(fā)酵完成的放罐液進行板框過濾，棄去胞外液，取過濾后菌絲體；將菌絲體用去離子水洗滌，洗至板框濾出液為無色透明并不再產(chǎn)生氣泡，過濾稱重，將洗滌過濾后的菌絲體稱重，按菌絲體重量加適量倍數(shù)去離子水，置浸泡罐以一定時間加熱提取數(shù)次后于板框過濾分離，提取液經(jīng)過刮板濃縮及單罐濃縮至一定量后加該濃縮液適量倍數(shù)質(zhì)量的85%乙醇于4°C放置12h ;將醇沉物置離心機1200r/min離心分離，取沉淀物裝盤后放入箱式烘干器，控制真空度加熱至30~40°C烘干2h后取出醇沉物，粉碎；粉碎后重新裝盤，再放入烘箱，緩慢升溫至65°C烘干2h，最后得紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖；取粗多糖按液料比200:1溶解于雙蒸水中，離心(5000rpm/min)處理兩次,每次20分鐘,取上清液過30KD中空纖維超濾膜，截留液稀釋后過300KD中空纖維超濾膜，超濾液濃縮冷凍干燥后，得精制多糖GS-B，經(jīng)HPLC測定相對分子量為30KD~300KD ;取上述紫芝多糖GS-B l.0g，溶解在100ml(液料比100: I)雙蒸水中，靜置30分鐘，離心(5000rpm/min)處理30分鐘，取上清液得精制紫芝多糖溶液；精確量取紫芝多糖溶液IOml 1份，將樹脂LS-8500.75g和紫芝多糖溶液置入具塞錐形瓶中，然后控制條件參數(shù)為溫度30°C、pH值6.0、時間2.5h、搖床的轉(zhuǎn)速120r/min，將錐形瓶置 于搖床中開始振搖脫色，結(jié)束后采用多糖回收率和脫色率測定方法，測得多糖回收率為67.3%，脫色率為87.1%。
[0062]實施例7:
[0063]將發(fā)酵完成的放罐液進行板框過濾，棄去胞外液，取過濾后菌絲體；將菌絲體用去離子水洗滌，洗至板框濾出液為無色透明并不再產(chǎn)生氣泡，過濾稱重，將洗滌過濾后的菌絲體稱重，按菌絲體重量加適量倍數(shù)去離子水，置浸泡罐以一定時間加熱提取數(shù)次后于板框過濾分離，提取液經(jīng)過刮板濃縮及單罐濃縮至一定量后加該濃縮液適量倍數(shù)質(zhì)量的85%乙醇于4°C放置12h ;將醇沉物置離心機1200r/min離心分離，取沉淀物裝盤后放入箱式烘干器，控制真空度加熱至30~40°C烘干2h后取出醇沉物，粉碎；粉碎后重新裝盤，再放入烘箱，緩慢升溫至65°C烘干2h，最后得紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖；取粗多糖按液料比200:1溶解于雙蒸水中，離心(5000rpm/min)處理兩次,每次20分鐘,取上清液過30KD中空纖維超濾膜，截留液稀釋后過300KD中空纖維超濾膜，超濾液濃縮冷凍干燥后，得精制多糖GS-B，經(jīng)HPLC測定相對分子量為30KD~300KD ;取上述紫芝多糖GS-B 1.0g,溶解在100ml(液料比100: I)雙蒸水中，靜置30分鐘，離心(5000rpm/min)處理30分鐘，取上清液得精制紫芝多糖溶液；精確量取紫芝多糖溶液1011111份，將樹脂1^-8500.75g和紫芝多糖溶液置入具塞錐形瓶中，然后控制條件參數(shù)為溫度28°C、pH值6.0、時間2.5h、搖床的轉(zhuǎn)速120r/min，將錐形瓶置于搖床中開始振搖脫色，結(jié)束后采用多糖回收率和脫色率測定方法，測得多糖回收率為66.1%，脫色率為89.2%。
[0064]實施例8:[0065] 將發(fā)酵完成的放罐液進行板框過濾，棄去胞外液，取過濾后菌絲體；將菌絲體用去離子水洗滌，洗至板框濾出液為無色透明并不再產(chǎn)生氣泡，過濾稱重，將洗滌過濾后的菌絲體稱重，按菌絲體重量加適量倍數(shù)去離子水，置浸泡罐以一定時間加熱提取數(shù)次后于板框過濾分離，提取液經(jīng)過刮板濃縮及單罐濃縮至一定量后加該濃縮液適量倍數(shù)質(zhì)量的85%乙醇于4°C放置12h ;將醇沉物置離心機1200r/min離心分離，取沉淀物裝盤后放入箱式烘干器，控制真空度加熱至30~40°C烘干2h后取出醇沉物，粉碎；粉碎后重新裝盤，再放入烘箱，緩慢升溫至65°C烘干2h，最后得紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖；取粗多糖按液料比200:1溶解于雙蒸水中，離心(5000rpm/min)處理兩次,每次20分鐘,取上清液過30KD中空纖維超濾膜，截留液稀釋后過300KD中空纖維超濾膜，超濾液濃縮冷凍干燥后，得精制多糖GS-B，經(jīng)HPLC測定相對分子量為30KD~300KD ;取上述紫芝多糖GS-B l.0g，溶解在100mL (液料比100:1)雙蒸水中，靜置30分鐘，離心(5000rpm/min)處理30分鐘，取上清液得精制紫芝多糖溶液；精確量取紫芝多糖溶液IOmll份，將樹脂LS-8500.75g和紫芝多糖溶液置入具塞錐形 瓶中，然后控制條件參數(shù)為溫度35°C、pH值6.0、時間3h、搖床的轉(zhuǎn)速120r/min，將錐形瓶置于搖床中開始振搖脫色，結(jié)束后采用多糖回收率和脫色率測定方法，測得多糖回收率為68.7%，脫色率為85.3%。
【權(quán)利要求】
1.一種采用離子交換樹脂對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行脫色的方法，包括如下步驟: a)對紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖進行預(yù)處理，得到分子量范圍為30KD~300KD的精制紫芝多糖； b)將步驟a)獲得的精制紫芝多糖置于離子交換樹脂，在脫色時間為2~4h，樹脂用量為0.25g~0.75g/10ml，脫色溫度為25~35°C、pH值為6~7的脫色條件下進行脫色，得到脫色之后的紫芝多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟a)所述的預(yù)處理包括如下步驟: 1)將紫芝液體深層發(fā)酵菌絲體粗多糖按液料比150:1~250: I溶解于水中； 2)以4000~5000rpm/min的速率離心兩次或兩次以上，取上清液，每次離心20~40min ； 3)上清液在溫度20~40°C、壓力0.02~0.06Mpa條件下過30KD中空纖維超濾膜，截留液稀釋后過300KD中空纖維超濾膜，超濾液濃縮冷凍干燥后，得精制紫芝多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟I)中所述液料比為180: I~220: 1，優(yōu)選 200: I。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟I)中所述水為去離子水。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟2)中所述離心速率為4500~5000rpm/min,優(yōu)選 5000rpm/min ;離心時間為 25 ~35min,優(yōu)選 30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟b)所述的離子交換樹脂為LS-850陰離子交換樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟b)中所述脫色時間為2.5h，所述樹脂用量為0.75g/10ml，所述脫色溫度為28°C，所述pH值為6。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟b)中脫色過程在搖床中進行。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述搖床的轉(zhuǎn)速為100~140r/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述搖床的轉(zhuǎn)速為120r/min。
【文檔編號】C08B37/00GK103880970SQ201210559585
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月20日
【發(fā)明者】楊義芳, 胡曉, 楊悅文, 羅永明, 吳春珍, 屈曉晟, 黃春躍 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院