用于向細(xì)胞內(nèi)遞送的二嵌段共聚物和其多核苷酸復(fù)合物本申請是申請?zhí)枮?00980122888.3、申請日為2009年5月13日、發(fā)明名稱為“用于向細(xì)胞內(nèi)遞送的二嵌段共聚物和其多核苷酸復(fù)合物”的發(fā)明專利申請的分案申請。交叉參考本申請要求2008年5月13日提交的美國臨時申請案61/052,908、2008年5月13日提交的美國臨時申請案61/052,914、2008年8月22日提交的美國臨時申請案61/091,294、2008年11月6日提交的美國臨時申請案61/112,054、2008年11月6日提交的美國臨時申請案61/112,048、2008年12月12日提交的美國臨時申請案61/120,769、2008年12月24日提交的美國臨時申請案61/140,779、2008年12月24日提交的美國臨時申請案61/140,774和2009年4月21日提交的美國臨時申請案61/171,377（所有這些文獻(xiàn)的內(nèi)容以其全文通過引用合并入本文）的權(quán)益。關(guān)于聯(lián)邦政府資助的研究的聲明本發(fā)明是在由國立衛(wèi)生研究院給予的合同號5ROlEB2991-03下的政府資助下進(jìn)行的。政府具有本發(fā)明的某些權(quán)利。領(lǐng)域本發(fā)明涉及有機(jī)化學(xué)、高分子化學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。具體地其涉及共聚物（例如，二嵌段共聚物）和其與多核苷酸的復(fù)合物，待用作將多核苷酸遞送入活細(xì)胞的載體（vehicle）。發(fā)明背景在某些情況下，給活細(xì)胞提供治療劑（例如，寡核苷酸）是有益的。在一些情況下，此類多核苷酸至活細(xì)胞的遞送提供了治療益處。概述在一些實施方案中，本文中提供了包含至少兩個嵌段的共聚物，其中第一嵌段包含至少一個親水性（例如，在大約生理pH下）的結(jié)構(gòu)單元，第二嵌段包含多個疏水性部分。在某些實施方案中，第二嵌段還包含以帶電荷或不帶電荷狀態(tài)存在的可帶電荷的種類，其在生理pH是陰離子性的。然而，當(dāng)pH處于該可帶電荷種類的大約pKa時，將存在以兩種形式存在的可帶電荷種類的平衡分布，即大約50%將是陰離子性的，并且大約50%將不帶電荷。pH離該可帶電荷種類的pKa越遠(yuǎn)，則該平衡中將存在相應(yīng)的偏移，從而在更高的pH值下，陰離子形式將占優(yōu)勢，而在更低的pH值下，未帶電荷的形式將占優(yōu)勢。本文中描述的實施方案包括在任何pH值下的共聚物的形式。在內(nèi)體的pH值(內(nèi)體pH)下，可帶電荷的種類將主要以未帶電荷的形式存在。優(yōu)選地，在某些情況（其中將本文中描述的聚合物與細(xì)胞膜接觸）下，其將破裂膜或使膜失去穩(wěn)定并且進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)環(huán)境。在特定的實施方案中，本文中提供的聚合物是內(nèi)體裂解性的或使內(nèi)體膜失去穩(wěn)定的。在某些實施方案中，本文中提供了細(xì)胞膜去穩(wěn)定化（例如，內(nèi)體裂解性或內(nèi)體膜去穩(wěn)定化）的共聚物，其包含：(a)第一嵌段，該第一嵌段為親水性嵌段，和(b)第二嵌段，該第二嵌段為膜去穩(wěn)定化的疏水性嵌段，其包含(i)在大約生理pH下為陰離子性的第一可帶電荷種類(ii)在大約生理pH下為陽離子性的第二可帶電荷種類。在一些實施方案中，本文中提供了細(xì)胞膜去穩(wěn)定化(例如，內(nèi)體裂解性或內(nèi)體膜去穩(wěn)定化)的共聚物，其包含：(a)第一嵌段，該第一嵌段是包含在大約生理pH下為陽離子性的第一可帶電荷種類的親水性嵌段，(b)第二嵌段，該第二嵌段為膜去穩(wěn)定化的疏水性嵌段，其包含(i)在大約中性pH下為陰離子性的第二可帶電荷種類;和(ii)在大約生理pH下為陽離子性的第三可帶電荷種類;和(c)與第一嵌段締合的寡核苷酸。在某些實施方案中，本文中提供了細(xì)胞膜去穩(wěn)定化（例如，內(nèi)體裂解性或內(nèi)體膜去穩(wěn)定化)的共聚物，其包含：(a)第一嵌段，該第一嵌段為親水性嵌段，(b)第二嵌段，該第二嵌段是包含丙烯酸殘基或烷基丙烯酸殘基的膜去穩(wěn)定化疏水性嵌段。在一個方面，本發(fā)明涉及共聚物（例如，二嵌段共聚物），其包含：第一嵌段，其包含在正常生理pH下為親水性的第一結(jié)構(gòu)單元;第二嵌段，其包含：在正常生理pH下為陽離子性的并且可以與第一結(jié)構(gòu)單元相同或不同的第二結(jié)構(gòu)單元;在正常生理pH下為陰離子性的第三結(jié)構(gòu)單元;疏水性增強(qiáng)部分，其中：該疏水性增強(qiáng)部分共價連接至第二結(jié)構(gòu)單元;或該疏水性增強(qiáng)部分共價連接至第三結(jié)構(gòu)單元;或該疏水性增強(qiáng)部分包含在第二嵌段的第四結(jié)構(gòu)單元中;或上述結(jié)構(gòu)的任何組合;和第二嵌段在總電荷上基本上是中性的。在不同實施方案中，第一結(jié)構(gòu)單元在正常生理pH（即，大約生理pH）下為陽離子性的，在正常生理pH下為陰離子性的,在正常生理pH下為中性的，或在正常生理pH下為兩性離子性的。在一些實施方案中，共聚物的第一嵌段在正常生理pH下為聚陽離子性的，在正常生理pH下為聚陰離子性的，在正常生理pH下為中性的，或在正常生理pH下為多兩性離子性的。在另外的實施方案中，共聚物的第一嵌段在內(nèi)體pH下具有與在正常生理pH下大體相同的離子性質(zhì)，例如，在內(nèi)體pH下為聚陽離子性的，在內(nèi)體pH下為聚陰離子性的，在內(nèi)體pH下為中性的，或在內(nèi)體pH下為聚兩性離子性的。在一個方面，本發(fā)明涉及共聚物（例如，二嵌段共聚物），其包含：第一嵌段，其包含在正常生理pH下為陽離子性的第一結(jié)構(gòu)單元;第二嵌段，其包含：在正常生理pH下為陽離子性的并且可以與第一結(jié)構(gòu)單元相同或不同的第二結(jié)構(gòu)單元;在正常生理pH下為陰離子性的第三結(jié)構(gòu)單元;疏水性增強(qiáng)部分，其中：該疏水性增強(qiáng)部分共價連接至第二結(jié)構(gòu)單元;或，該增強(qiáng)疏水性增強(qiáng)部分共價連接至第三結(jié)構(gòu)單元;或，該疏水性增強(qiáng)部分包含在第二嵌段的第四結(jié)構(gòu)單元中;或，上述結(jié)構(gòu)的任何組合;和第二嵌段在總電荷上基本上是中性。在本發(fā)明的一個方面，第一結(jié)構(gòu)單元包含陽離子氮種類(即，在正常生理pH下為陽離子性的氮種類)。在本發(fā)明的一個方面，所述陽離子氮種類是銨種類。在本發(fā)明的一個方面，第二結(jié)構(gòu)單元與第一結(jié)構(gòu)單元相同。在本發(fā)明的一個方面，所述陰離子種類包括羧酸陰離子。在本發(fā)明的一個方面，第一嵌段還包括隨機(jī)散布在第一結(jié)構(gòu)單元之間的電荷中性的結(jié)構(gòu)單元。在本發(fā)明的一個方面，第一和/或第二嵌段包含至少一個反應(yīng)性或易于修飾的基團(tuán)。在本發(fā)明的一個方面，如果存在的話，則第四結(jié)構(gòu)單元包括按重量計算占第二嵌段的大約10%至大約60%。在某些實施方案中，第一聚合物嵌段大小為大約10,000道爾頓，或大約2,000道爾頓至大約30,000道爾頓，或大約8,500道爾頓至大約13,000道爾頓。在一些實施方案中，第一聚合物嵌段在絕對值上具有與待遞送的siRNA分子上的凈負(fù)電荷相似的凈正電荷。在一些實施方案中，第二聚合物嵌段在分子量上與第一聚合物嵌段大致相等，或是第一聚合物嵌段的大小的大約0.2-5倍或大約1-3倍，并且在許多優(yōu)選實施方案中，第二聚合物嵌段是第一聚合物嵌段的大小的大約2-3倍。在一些實施方案中，親水性的帶電荷的嵌段與至少一個核苷酸（包括多核苷酸，例如siRNA）復(fù)合(在本文中可與例如通過一個或多個共價鍵、一個或多個離子相互作用、其組合等與之“締合”或“連接”互換使用)。在本發(fā)明的一個方面，將多核苷酸嵌段通過任選地可切割的共價鍵連接至一個聚合物嵌段。在本發(fā)明的一個方面，多核苷酸選自DNA、RNA和其天然及合成類似物。在本發(fā)明的一個方面，多核苷酸是反義的。在本發(fā)明的一個方面，多核苷酸是RNA。在本發(fā)明的一個方面，RNA選自mRNA、piRNA、miRNA和siRNA。在本發(fā)明的一個方面，RNA是siRNA。在本發(fā)明的一個方面，每一個結(jié)構(gòu)單元獨立地從乙烯型單體(ethylenicmonomer)衍生而來，共聚物的合成包括活性聚合。在本發(fā)明的一個方面，乙烯型單體是丙烯酸單體。在本文中在某些實施方案中提供了二嵌段共聚物，其具有化學(xué)式I：在一些實施方案中：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；Y4選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)和芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟基取代；Y0，Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；各R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q0是選自下述的殘基：在生理pH下為親水性的并且在生理pH下至少部分帶正電荷的殘基(例如，氨基、烷基氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基、吡啶基等)、在生理pH下至少部分帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基(例如，羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根、磷酸根等)、在生理pH下基本上為中性（或不帶電荷）的殘基(例如，羥基、聚氧化烷基、聚乙二醇、聚丙二醇、硫醇等)、在生理pH下為至少部分兩性離子性的殘基(例如，在生理pH下包含磷酸根和銨基的單體殘基)、可綴合的或可官能化的殘基(例如，包含反應(yīng)性基團(tuán)的殘基，例如疊氮化物、炔、琥珀酰亞胺酯、四氟苯酯、五氟苯酯、對硝基苯酯、吡啶基二硫化物等)；或氫;Q1是下述的殘基，所述殘基在生理pH下為親水性的并且在生理pH下至少部分帶正電荷(例如，氨基、烷氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基、吡啶基等);在生理pH下至少部分帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化(例如，羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根、磷酸根等)、在生理pH下基本為中性(例如，羥基、聚氧化烷基、聚乙二醇、聚丙二醇、硫醇等)、或在生理pH下為至少部分兩性離子性的(例如，在生理pH下包含磷酸根和銨基的單體殘基);Q2是在生理pH下帶正電荷的殘基，包括但不限于氨基、烷氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基、吡啶基;Q3在生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基，包括但不限于羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根和磷酸根;m是0至小于1.0(例如，0至大約0.49);n為大于0至1.0（例如，大約0.51至大約1.0);其中m+n=1p是大約0.1至大約0.9(例如，大約0.2至大約0.5);q是大約0.1至大約0.9(例如，大約0.2至大約0.5);其中r是0至大約08(例如，0至大約0.6);其中p+q+r=1v是大約1至大約25kDa;以及，w是大約1至大約50kDa。在特定的實施方案中，v是大約5至大約25kDa。在另外的或可選擇的特定實施方案中，w是大約1至大約50kDa。在一些實施方案中，由p和q代表的單體殘基的數(shù)目或比率在彼此的大約30%，彼此的大約20%，彼此的大約10%等內(nèi)。在特定的實施方案中，p大體上與q相同。在某些實施方案中，至少部分帶電荷通常包括痕量以上的帶電荷種類，包括例如至少20%的殘基帶電荷，至少30%的殘基帶電荷，至少40%的殘基帶電荷，至少50%的殘基帶電荷，至少60%的殘基帶電荷，至少70%的殘基帶電荷等。在某些實施方案中，m是0并且Q1是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性（或不帶電荷）的殘基。即，在生理pH下，Q1上任何可帶電荷的種類主要以中性形式存在。在一些實施方案中，基本上不帶電荷包括例如，低于5%帶電荷，低于3%帶電荷，低于1%帶電荷等。在某些實施方案中，m是0并且Q1是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陽離子性的殘基。在某些實施方案中，m是0并且Q1是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陰離子性的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q0或Q1中的一個是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陽離子性的殘基，而Q0或Q1中的另一個是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q0或Q1中的一個是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陰離子性的殘基，而Q0或Q1中的另一個是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q1是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陽離子性的殘基，并且Q0是可綴合的或可官能化的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q1是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性的殘基，并且Q0是為綴合的或可官能化的殘基的。在本文某些實施方案中提供了具有至少兩個嵌段的共聚物，其中第一嵌段具有化學(xué)式Ia，第二嵌段具有化學(xué)式Ib，其中本文中描述的每一個術(shù)語是如上所述的。在某些實施方案中，本文中提供了式II的化合物：在一些實施方案中：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)和芳基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R51和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；各R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q1和Q2是在生理pH下帶正電荷的殘基，包括但不限于氨基、烷基氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基和吡啶基；Q3是在生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基，包括但不限于羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根和磷酸根;m是0至大約0.49;n是大約0.51至大約1.0;其中m+n=1p是大約0.2至大約0.5;q是大約0.2至大約0.5;其中:p大體上與q相同;r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約5至大約25kDa;以及，w是大約5至大約50kDa。在本文中的一些實施方案中提供了二嵌段共聚物，其具有（在正常生理pH下）化學(xué)式III：在一些實施方案中：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-;其中，a是1-4;b是2-4;R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11獨立地選自氫、(1C-5C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基和苯基，其中任意個任選地被一個或多個氟原子取代;Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基和苯基，其中任意個可任選地被一個或多個氟基取代;Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-;Y3選自共價鍵、(1C-5C)烷基和苯基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R7-R11和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；Z是生理上可接受的抗衡離子，m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相同；r是0至大約0.6；其中p+q+r＝1v是大約5至大約25kDa；以及，w是大約5至大約50kDa。在本發(fā)明的一個方面，A1是-C-C-Y1是-C(O)OCH2CH2-，R6是氫，R7和R8各自是-CH3；以及，R2是-CH3。在本發(fā)明的一個方面，A2是-C-C-；Y2是-C(O)OCH2CH2-；R9是氫；R10和R11各自是-CH3；以及，R3是-CH3。在本發(fā)明的一個方面，A3是-C-C-;R3是CH3CH2CH2-;Y3是共價鍵;以及Z是生理上可接受的陰離子（例如，聚陽離子或多個陽離子）。在某些實施方案中：A4是-C-C-;R5選自氫和-CH3;以及，Y4是-C(O)O(CH2)3CH3。在一些實施方案中：A0是C-C-R1選自氫和(1C-3C)烷基;以及Y0選自-C(O)O(1C-3C)烷基。在一些實施方案中，m是0。在某些實施方案中，r是0。在一些實施方案中，m和r都是0。在某些實施方案中，本文中提供了將多核苷酸遞送入細(xì)胞的方法，其包括將細(xì)胞與本文中的聚合物:多核苷酸復(fù)合物接觸。在特定的實施方案中，以任何適當(dāng)?shù)姆绞?，包括但不限于例如離子性和非離子性相互作用（例如一個或多個共價鍵）、其組合等連接所述聚合物：多核苷酸復(fù)合物。在特定的實施方案中，本文中提供了將多核苷酸遞送入細(xì)胞的方法，其包括將細(xì)胞與聚合物和多核苷酸的共價綴合物接觸。在本發(fā)明的一個方面，所述多核苷酸選自DNA、RNA以及其天然和合成類似物。在本發(fā)明的一個方面，DNA、RNA或者其天然或合成類似物是反義的。在本發(fā)明的一個方面，多核苷酸是RNA。在本發(fā)明的一個方面，RNA是siRNA。在本發(fā)明的一個方面，將siRNA體內(nèi)遞送至細(xì)胞。在本發(fā)明的一個方面，將本發(fā)明的聚合物連接至或復(fù)合至靶向部分。在本發(fā)明的一個方面，將靶向部分共價地連接至共聚物（例如，二嵌段共聚物）的α-末端。在本發(fā)明的一個方面，將靶向部分共價連接至共聚物的ω末端，或共價連接至共聚物（例如，二嵌段共聚物）的側(cè)基（pendantgroup）。在本發(fā)明的一個方面，靶向部分選自但不限于抗體、抗體片段、抗體樣分子、肽、環(huán)肽和小分子。通過引用合并本說明書中提及的所有出版物和專利申請就引述的目的通過引用合并入本文，其引用程度就如同每一個個別出版物或?qū)＠暾埍幻鞔_和個別地指定通過引用合并一樣。附圖概述本發(fā)明的新特征特別地示于所附權(quán)利要求中。通過參考下列詳細(xì)描述和附圖將獲得對本發(fā)明的特征和有利方面的更好理解，所述描述提供了其中利用本發(fā)明的原理的舉例說明性實施方案，所述附圖是：圖1是本文中描述的各種聚合物的舉例說明性概述圖2是[PEGMAw]-[B-P-D]的舉例說明性合成。圖3是P7-PEGMA100-40kDa的舉例說明性表征。圖4是PEGMA-DMAEMA共聚物的組成和性質(zhì)的舉例說明性描述。圖5是[PEGMAw-MAA(NHS)]-[B-P-D]的舉例說明性合成。圖6是PEGMA與MAA-NHS的舉例說明性RAFT共聚反應(yīng)。圖7是DMAEMA與MAA-NHS的舉例說明性RAFT共聚反應(yīng)。圖8是PDSMA的舉例說明性合成。圖9是用于siRNA綴合的HPMA-PDSMA共聚物的舉例說明性合成。圖10舉例說明(A)聚合物和(B)聚合物/siRNA構(gòu)建體的溶血作用。圖11舉例說明FAM-標(biāo)記的siRNA和聚合物/siRNA復(fù)合物的HeLa細(xì)胞內(nèi)化作用。圖12舉例說明作為siRNA聚合物載體的函數(shù)的非特異性HeLa細(xì)胞毒性(A)和GAPDH敲低（knockdown）(B)。圖13舉例說明HeLas中的GAPDH敲低。圖14舉例說明用于聚[HPMA]-b-[(PAA)(BMA)(DMAEMA)]的聚合物設(shè)計。圖15舉例說明吡啶基二硫化物-CTA的合成。圖16舉例說明吡啶基二硫化物聚合物末端基團(tuán)與肽半胱氨酸的反應(yīng)。圖17舉例說明用于表征肽-聚合物綴合物的SDSPAGE凝膠。圖18舉例說明用于測量聚合物觸發(fā)脂雙層膜的pH依賴性破裂的能力的膜破裂測定。圖19舉例說明在聚合物綴合后肽的細(xì)胞內(nèi)定位。圖20舉例說明缺乏pH響應(yīng)型嵌段的綴合物與兩個對照組相似并且不導(dǎo)致顯著的毒性。圖21舉例說明肽綴合物的生物活性。發(fā)明詳述雖然在本文中已顯示并且描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將很顯然的是，此類實施方案僅以舉例說明的方式提供。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說可作許多變型、變化和置換而不背離本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，對本文中描述的本發(fā)明實施方案的各種改變可用于實施本發(fā)明。在本文中意圖由下列權(quán)利要求確定本發(fā)明的范圍，并且涵蓋這些權(quán)利要求范圍內(nèi)的方法和結(jié)構(gòu)以及它們的等價物。聚合物在某些實施方案中，本發(fā)明提供了載體聚合物和聚合物:多核苷酸構(gòu)建體。在某些情況下，此類聚合物和聚合物:多核苷酸構(gòu)建體滿足了對于用于將治療性多核苷酸遞送入細(xì)胞的安全、強(qiáng)效系統(tǒng)的需要。在某些實施方案中，本文中提供了細(xì)胞膜去穩(wěn)定化（例如，內(nèi)體裂解性或內(nèi)體膜去穩(wěn)定化）的共聚物，其包含(a)第一嵌段，該第一嵌段是親水性嵌段，和(b)第二嵌段，該第二嵌段是膜去穩(wěn)定化的疏水性嵌段，其包含：(i)在大約生理pH下為陰離子性的第一可帶電荷種類(ii)在大約生理pH下為陽離子性的第二可帶電荷種類。在一些實施方案中，本文中提供了細(xì)胞膜去穩(wěn)定化（例如內(nèi)體裂解性或內(nèi)體膜去穩(wěn)定化）的共聚物，其包含(a)第一嵌段，該第一嵌段是包含在大約生理pH下為陽離子性的第一可帶電荷種類的親水性嵌段：(b)第二嵌段，該第二嵌段是膜去穩(wěn)定化的疏水性嵌段，其包含：(i)在大約中性pH下為陰離子性的第二可帶電荷種類；和(ii)在大約生理pH下為陽離子性的第三可帶電荷種類；和(c)與第一嵌段締合的寡核苷酸。在本文中描述的聚合物的一些特定實施方案中，各可帶電荷的種類存在于不同結(jié)構(gòu)單元上。在一些實施方案中，第一結(jié)構(gòu)單元包含第一可帶電荷種類。在另外的或可選擇的實施方案中，第二結(jié)構(gòu)單元包含第二可帶電荷種類。在另外的或可選擇的實施方案中，第三結(jié)構(gòu)單元包含第三可帶電荷的種類。本發(fā)明的一些結(jié)構(gòu)單元據(jù)稱在正常生理pH下為陽離子性的或陰離子性的。因此，在某些情況下，在正常生理pH下，所述種類具有導(dǎo)致其被質(zhì)子化(陽離子性的，帶正電荷)或去質(zhì)子化(陰離子性的，帶負(fù)電荷)的pKa。目前優(yōu)選生理pH下的陽離子種類是氮種類，例如銨、-NRR'R”、胍「(-NRC(＝NR’H)+NR”R’”忽略對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的規(guī)范形式)，其中R基團(tuán)獨立地是氫、烷基、環(huán)烷基或芳基，或連接至相同或相鄰的氮源子的兩個R基團(tuán)還可以彼此連接以形成雜環(huán)種類例如吡咯、咪唑、吲哚等。在正常生理pH下為陽離子性的本文中描述的單體殘基或結(jié)構(gòu)單元包括帶陽離子電荷或可帶陽離子電荷的種類，包括可去質(zhì)子化的陽離子種類。在本文中描述的各種實施方案中，本文中描述的在生理pH下為陽離子性的或帶正電荷的結(jié)構(gòu)單元(包括，例如，某些親水性結(jié)構(gòu)單元)包含一個或多個氨基、烷氨基、胍基、咪唑基、吡啶基等或其質(zhì)子化、烷基化或其它帶電荷的形式。在一些實施方案中，本文中使用的在正常生理pH下為陽離子性的結(jié)構(gòu)單元包括但不限于例如甲基丙烯酸二烷基氨基烷基酯(例如，DMAEMA)的單體殘基。在本文中描述的不同實施方案中，本文中描述的在生理pH下為陰離子或帶負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)單元(包括，例如，某些親水性結(jié)構(gòu)單元)包含一個或多個酸基團(tuán)或其共軛堿，包括但不限于例如，羧酸根、磺酰胺、硼酸根、膦酸根、磷酸根等。在一些實施方案中，本文中使用的在正常生理pH下為陰離子性的或帶負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)單元包括但不限于例如丙烯酸、烷基丙烯酸(例如，甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、丙基丙烯酸等)等的單體殘基。在本文中描述的不同實施方案中，在正常生理pH下為中性的親水性結(jié)構(gòu)單元包含一個或多個親水性基團(tuán)，例如羥基、聚氧化烷基、聚乙二醇、聚丙二醇、硫醇等。在一些實施方案中，本文中許多變型、變化和置換使用的在生理pH下為中性的親水性結(jié)構(gòu)單元包括但不限于例如PEG化的丙烯酸、PEG化的甲基丙烯酸、羥基烷基丙烯酸、羥基烷基烷基丙烯酸（hydroxyalkylalkacrylicacid）(例如，HPMA)等的單體殘基。在本文中描述的不同實施方案中，在生理pH下為兩性離子性的親水性結(jié)構(gòu)單元包括在生理pH下為陰離子或帶負(fù)電荷的基團(tuán)和在生理pH下為陽離子或帶電荷的基團(tuán)。在一些實施方案中，本文中使用的在正常生理pH下為兩性離子性的親水性結(jié)構(gòu)單元包括但不限于例如在生理pH下包含磷酸根和銨基的單體殘基，例如US7,300,990（以其公開內(nèi)容通過引用合并入本文）中所示。在某些實施方案中，本文中提供的聚合物還包含含有可綴合的或可官能化的側(cè)鏈（例如單體殘基的側(cè)基）的一個或多個結(jié)構(gòu)單元。在一些情況下，可綴合的或可官能化的側(cè)鏈?zhǔn)蔷哂幸粋€或多個反應(yīng)性基團(tuán)的基團(tuán)，所述反應(yīng)性基團(tuán)可用于通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的化學(xué)法例如“click”化學(xué)法(例如“click”反應(yīng)，參見Wu，P.;Fokin，V.V.CatalyticAzide-AlkyneCycloaddition:ReactivityandApplications.Aldrichim.Acta，2007，40，7-17)聚合后引入額外的功能性。在某些實施方案中，本文中提供的可綴合的或可官能化的側(cè)鏈包含一個或多個任何適當(dāng)?shù)幕罨鶊F(tuán)，例如但不限于N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯、HOBt(1-羥基苯并三唑)酯、對硝基苯酯、四氟苯酯、五氟苯酯、吡啶二硫基等。在一些實施方案中，在正常生理pH下為陰離子性的結(jié)構(gòu)單元包括羧酸例如但不限于2-丙基丙烯酸的單體殘基(即，來源于其的結(jié)構(gòu)單元，2-丙基丙酸，-CH2C((CH2)2CH3)(COOH)-(PAA))，雖然可作為被保護(hù)的種類例如酯或作為游離酸存在于選擇的聚合過程中的任何有機(jī)或無機(jī)酸也在本發(fā)明的考慮內(nèi)。本文中描述的陰離子性單體殘基或結(jié)構(gòu)單元包括帶電荷或可帶電荷成陰離子的種類，包括可質(zhì)子化的陰離子性種類。在某些情況下，陰離子性單體殘基在中性pH7.0下可以是陰離子性的。單體例如馬來酸酐，(ScottM.Henry，MohamedE.H.El-Sayed，ChristopherM.Pirie，AllanS.Hoffman，和PatrickS.Stayton"pH-Responsivepoly(styrene-alt-maleicanhydride)AlkylamideCopolymersforIntracellularDrugDelivery"Biomacromolecules7:2407-2414，2006)也可用于將帶負(fù)電荷的單元(例如，第三結(jié)構(gòu)單元)引入第二嵌段。在此類實施方案中，帶負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)單元是馬來酸酐單體殘基。本發(fā)明的一個實施方案是具有下列式I的聚合物：在一些實施方案中：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-;其中，a是1-4;b是2-4;Y4選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟基團(tuán)取代;Y0、Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-0(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-、-(4C-10C)雜芳基-和-(6C-10C)芳基-;Y3選自共價鍵、-(1C-10C)烷基-、-(4C-10C)雜芳基-和-(6C-10C)芳基-，其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代A1-A4四價碳原子;R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代;Q0是選自下述的殘基：在生理pH下為親水性的并且在生理pH下至少部分帶正電荷的殘基(例如，氨基、烷基氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基、吡啶基等)、在生理pH下至少部分帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基(例如，羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根、磷酸根等)、在生理pH下基本為中性（或不帶電荷）的殘基(例如，羥基、聚氧化烷基、聚乙二醇、聚丙二醇、硫醇等)、在生理pH下至少為部分兩性離子性的殘基(例如，在生理pH下包含磷酸根和銨基的單體殘基)、可綴合的或可官能化的殘基(例如，包含反應(yīng)性基團(tuán)的殘基，例如疊氮化物、炔烴、琥珀酰亞胺酯、四氟苯酯、五氟苯酯、對硝基苯酯、吡啶基二硫化物等)或氫。Q1是在生理pH下是親水性的并且在生理pH下至少部分帶正電荷的殘基(例如，氨基、烷氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基、吡啶基等);在生理pH下至少部分帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基(例如，羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根、磷酸根等)、在生理pH下基本為中性的殘基(例如，羥基、聚環(huán)氧烷、聚乙二醇、聚丙二醇、硫醇等)或在生理pH下是至少為部分兩性離子性(例如，在生理pH下包含磷酸根和銨基)的殘基;Q2是在生理pH下帶正電荷的殘基，包括但不限于氨基、烷氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基和吡啶基;Q3在生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基，包括但不限于羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根和磷酸根;m是0至小于1.0(例如，0至大約0.49);n大于0至大約1.0（例如，大約0.51至大約1.0);其中m+n=1p是大約0.1至大約0.9(例如，大約0.2至大約0.5);q是大約0.1至大約0.9(例如，大約0.2至大約0.5);其中r是0至大約0.8(例如，0至大約0.6);其中p+q+r=1v是大約1至大約25kDa;或大約5至大約25kDa;以及，w是大約1至大約50kDa;或大約5至大約25kDa。在一些實施方案中，由p和q代表的單體殘基的數(shù)目或比率在彼此的大約30%，彼此的大約20%，彼此的大約10%等內(nèi)。在特定的實施方案中，p大體上與q相等。在某些實施方案中，至少部分帶電荷通常包括痕量以上的帶電荷種類，包括，例如至少20%的殘基帶電荷，至少30%的殘基帶電荷，至少40%的殘基帶電荷，至少50%的殘基帶電荷，至少60%的殘基帶電荷，至少70%的殘基帶電荷等。在某些實施方案中，m是0并且Q1是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性（或不帶電荷）的殘基。在一些實施方案中，基本上不帶電荷包括例如，低于5%帶電荷，低于3%帶電荷，低于1%帶電荷等。在某些實施方案中，m是0并且Q1是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陽離子性的殘基。在某些實施方案中，m是0并且Q1是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陰離子性的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q0或Q1中的一個是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陽離子性的殘基，而Q0或Q1中的另一個是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q0或Q1中的一個是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陰離子性的殘基，而Q0或Q1中的另一個是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q1是在生理pH下為親水性的并且至少部分為陽離子性的殘基，并且Q0是可綴合的或可官能化的殘基。在某些實施方案中，m大于0并且n大于0，并且Q1是在生理pH下為親水性的并且基本上為中性的殘基，Q0是可綴合的或可官能化的殘基。在一些實施方案中，在生理pH下帶正電荷或至少部分帶正電荷的基團(tuán)是-NR’R’’基團(tuán)，其中R’和R’’獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基或雜烷基，其可任選地被一個或多個鹵素、氨基、羥基取代和/或包含一個或多個不飽和鍵。在一些實施方案中，將R’和R’’一起形成取代的或未取代的雜芳基或脂環(huán)雜環(huán)。在一些實施方案中，本文中描述為在生理pH下帶正電荷或至少部分帶正電荷的基團(tuán)可包括但不限于例如氨基、烷基氨基、二烷基氨基、環(huán)氨基(例如，哌啶或N-烷基化哌啶)、脂環(huán)亞胺基(例如，二氫-吡啶基、2,3,4,5-四氫-吡啶基等)、雜芳基亞胺基(例如，吡啶基)等。在一些實施方案中，本文中描述為在生理pH下帶負(fù)電荷或至少部分帶負(fù)電荷但在更低pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的基團(tuán)是例如但不限于例如，羧酸(COOH)、磺酰胺、硼酸、磺酸、亞磺酸、硫酸、磷酸、次膦酸、亞磷酸、碳酸、其去質(zhì)子化的共軛堿等。在某些實施方案中，本文中提供了式II的化合物：在一些實施方案中：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-，其中：a是1-4，b是2-4，Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)和芳基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子;R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代;Q1和Q2是在生理pH下帶正電荷的殘基，包括但不限于氨基、烷基氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基和吡啶基Q3是在生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基，包括但不限于羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根和磷酸根;m是0至大約0.49;n是大約0.51至大約1.0;其中m+n=1p是大約0.2至大約0.5;q是大約0.2至大約0.5;其中:p大體上與q相等;r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約1至大約25kDa，或大約5至大約25kDa;以及，w是大約1至大約50kDa，或大約5至大約50kDa。在某些實施方案中，所述嵌段共聚物是二嵌段共聚物，其具有式III的化學(xué)式（在正常生理或大約中性pH下）：在某些實施方案中，如所指示取代的A0、A1、A2、A3和A4包括式III的聚合物的結(jié)構(gòu)單元（在本文中可與“單體單元”和“單體殘基”互換使用）。在一些特定的實施方案中，構(gòu)成式III的A基團(tuán)的單體單元在適當(dāng)?shù)臈l件下是聚合上相容的。在某些情況下，乙烯型主鏈或結(jié)構(gòu)單元-(C-C-)m-聚合物（其中各C被H和/或任何其他適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)進(jìn)行二取代）使用含有碳-碳雙鍵（>C=C<）的單體進(jìn)行聚合。在某些實施方案中，各A基團(tuán)(例如，A0、A1、A2、A3和A4中的每一個)可以是(即，獨立地選自)-C-C-(即，乙烯型單體單元或聚合物主鏈)、-C(O)(C)aC(O)O-(即，聚酐單體單元或聚合物主鏈)、-O(C)aC(O)-(即，聚酯單體單元或聚合物主鏈)、-O(C)bO-(即，聚亞烷基二醇單體單元或聚合物主鏈)等(其中各C被H和/或任何其他適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)例如本文中描述的基團(tuán)（包括上述R12和/或R13）二取代)。在一些特定的實施方案中，術(shù)語“a”是從1至4的整數(shù)，并且“b”是從2至4的整數(shù)。在某些情況下，連接至式III主鏈的各“Y”和“R”基團(tuán)(即，Y0、Y1、Y2、Y3、Y4、R1、R2、R3、R4、R5的任意個)連接至該特定單體單元的任何“C”(包括任何(C)a或(C)b)上。在特定的實施方案中，特定單體單元的Y和R連接至同一“C”上。在某些特定的實施方案中，特定單體單元的Y和R都連接至同一“C”上，并且該“C”針對于該單體單元的羰基而言為α碳位（如果存在的話）。在特定的實施方案中，R1-R11獨立地選自氫、烷基（例如，1C-5C烷基)、環(huán)烷基(例如，3C-6C環(huán)烷基)或苯基，其中R1-R11的任意個任選地被一個或多氟、環(huán)烷基或苯基（其可被一個或多個烷基進(jìn)一步取代）取代。在某些特定的實施方案中，Y0和Y4獨立地選自氫、烷基(例如，1C-10C烷基)、環(huán)烷基(例如，3C-6C環(huán)烷基)、O-烷基(例如，O-(2C-10C)烷基、-C(O)O-烷基(例如-C(O)O-(2C-10C)烷基)或苯基，其中任意個任選地被一個或多個氟取代。在一些實施方案中，Y1和Y2獨立地選自共價鍵、烷基（目前優(yōu)選是(1C-10C)烷基）、-C(O)O-烷基（目前優(yōu)選是-C(O)O-(2C-10C)烷基）、-OC(O)烷基（目前優(yōu)選是-OC(O)-(2C-10C)烷基）、O-烷基（目前優(yōu)選是-O(2C-10C)烷基）和-S-烷基（目前優(yōu)選是-S-(2C-10C)烷基）。在某些實施方案中，Y3選自共價鍵、烷基（目前優(yōu)選是(lC-5C)烷基）和苯基。在一些實施方案中，Z-存在或不存在。在某些實施方案中，其中R1和/或R4是氫，Z-是OH-。在某些實施方案中，Z是任何抗衡離子(例如，一種或多種抗衡離子)，優(yōu)選是生物相容性的抗衡離子，例如但不限于例如氯化物、無機(jī)或有機(jī)磷酸根、硫酸根、磺酸根、乙酸根、丙酸根、丁酸根、戊酸根、己酸根、辛酸根、癸酸根、月桂酸根、肉豆蔻酸根、軟脂酸根、硬脂酸根、棕櫚油酸根、油酸根、亞油酸根、廿酸根（arachidate）、順9-二十碳烯酸根（gadoleate）、vaccinate、乳酸根、羥乙酸根、水楊酸根、脫氨基苯基丙氨酸（desamionphenylalanine），脫氨基絲氨酸（desaminoserine）、脫氨基蘇氨酸（desaminothreonine）、ε-羥基己酸根、3-羥基丁酸根、4-羥基丁酸根或3-羥基戊酸根。在一些實施方案中，當(dāng)各Y、R和任選的氟共價連接至選定主鏈的碳時，用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全取代的任何碳。數(shù)字m、n、p、q和r代表了各結(jié)構(gòu)單元在其嵌段中的摩爾分?jǐn)?shù)，v和w提供了各嵌段的分子量。在某些實施方案中，A0、A1、A2、A3和A4選自-C-、-C-C-、-C(O)(CR12R13)aC(O)O-、-O(CR12R13)aC(O)-和O(CR12R13)bO；其中，a是1-4；b是2-4；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7.R8、R9、R10、R11、R12和R13獨立地選自氫、(1C-5C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(5C-10C)芳基、(4C-10C)雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基和苯基，其任何一個任選地可用一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-5C)烷基和苯基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；Z是一種或多種生理上可接受的抗衡離子，m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相同；r是0至大約0.6；其中p+q+r＝1v是大約1至大約25kDa，或大約5至大約25kDa；以及，w是大約1至大約50kDa，或大約5至大約50kDa。在一個特定的實施方案中，A0、A1、A2、A3和A4獨立地選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和O(C)bO；其中，a是1-4；b是2-4；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7.R8、R9、R10和R11獨立地選自氫、(1C-5C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基和苯基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基和苯基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-5C)烷基和苯基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；Z是生理上可接受的抗衡離子，m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5;q是大約0.2至大約0.5;其中:p大體上與q相同;r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約1至大約25kDa;以及，w是大約5至大約50kDa。在一些實施方案中，A1是-C-C-，Y1是-C(O)OCH2CH2-;R6是氫;R7和R8各自是-CH3;以及，R2是-CH3。在一些實施方案中，A2是-C-C-;Y2是-C(O)OCH2CH2-;R9是氫;R10和R11各自是-CH3;以及，R3是-CH3。在一些實施方案中，A3是-C-C-;R4是CH3CH2CH2-;Y3是共價鍵;以及Z-是生理上可接受的陰離子。在一些實施方案中，A4是-C-C-;R5選自氫和-CH3;以及，Y4是-C(O)O(CH2)3CH3。在一些實施方案中，A0是C-C-，R1選自氫和(1C-3C)烷基;以及，Y0選自-C(O)O(1C-3C)烷基。在一些實施方案中，m是0。在一些實施方案中，r是0。在一些實施方案中，m和r都是0。在一些實施方案中提供了示例性的但非限定性的本發(fā)明的聚合物：在某些情況下，化合物1的結(jié)構(gòu)單元如左邊的方括號和右邊圓括號中顯示的，并且它們衍生自以下單體：字母p、q和r代表其嵌段內(nèi)的各結(jié)構(gòu)單元的摩爾分?jǐn)?shù)。字母v和w代表二嵌段共聚物中各嵌段的分子量(數(shù)均分子量)。在一些實施方案中，本文中提供的一種化合物是具有下列結(jié)構(gòu)的化合物：如上所述，字母p、q和r代表其嵌段內(nèi)的各結(jié)構(gòu)單元的摩爾分?jǐn)?shù)。字母v和w代表二嵌段共聚物中各嵌段的分子量(數(shù)均分子量)。在一些實施方案中，本文中提供了下列聚合物：[DMAEMA]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]wIV3[PEGMA]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]wIV4[PEGMAm-/-DMAEMAn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]wIV5[PEGMAm-/-MAA(NHS)n]v-[Bp-/-Pq/-Dr]wIV6[DMAEMAm-/-MAA(NHS)n]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]wIV7[HPMAm-/-PDSMn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]wIV8[PEGMAm-/-PDSMn]v-[Bp-/-Pq-/-Dr]wIV9在一些實施方案中，B是甲基丙烯酸丁酯殘基;P是丙基丙烯酸殘基;D和DMAEMA是甲基丙烯酸二甲氨基乙酯殘基;PEGMA是甲基丙烯酸聚乙二醇酯（polyethyleneglycolmethacrylate）殘基(例如，具有1-20個環(huán)氧乙烷單元，例如化合物IV-2中舉例說明的，或4-5個環(huán)氧乙烷單元或7-8個環(huán)氧乙烷單元);MAA(NHS)是甲基丙烯酸-N-羥基琥珀酰亞胺（methylacrylicacid-N-hydroxysuccinimide）殘基;HPMA是N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺殘基;以及PDSM是吡啶二硫基甲基丙烯酸酯（pyridyldisulfidemethacrylate）殘基。在某些實施方案中，術(shù)語m、n、p、q、r、w和v是如本文中所描述的。在一些特定的實施方案中，w是v的大約0.1倍至大約5倍，或是v的大約1倍至大約5倍。聚合物IV1-IV9是本文中提供的包含組成聚合物第一嵌段的許多種結(jié)構(gòu)單元的聚合物實例。此外，本文中特別地提供了各附圖和表中所示的聚合物以及結(jié)構(gòu)相關(guān)聚合物（例如MW和/或單體殘基比率有變化）。在一些實施方案中，改變或化學(xué)處理第一嵌段的結(jié)構(gòu)單元以產(chǎn)生這樣的聚合物，其中第一嵌段是或包含為中性(例如，PEGMA)、陽離子性(例如，DMAEMA)、陰離子性(例如，PEGMA-NHS，其中NHS被水解成酸或丙烯酸)、兩性(例如，DMAEMA-NHS，其中NHS被水解成酸)或兩性離子（例如，聚[2-甲基丙烯酰氧-2'三甲基銨乙基磷酸])的結(jié)構(gòu)單元。在一些實施方案中，聚合物在第一嵌段例如[PEGMA-PDSM]-[B-P-D]中包含吡啶基二硫化物功能性，其可以與和任選地與硫代siRNA反應(yīng)以形成聚合物-siRNA綴合物。在一些實施方案中，本發(fā)明的聚合物是“二嵌段共聚物”。術(shù)語“共聚物”表示聚合物是兩個或更多個不同單體的聚合的結(jié)果。在一些情況下，“嵌段”共聚物是指其中將結(jié)構(gòu)單元的不同亞組合（sub-combination）連接在一起的結(jié)構(gòu)。在某些情況下，“嵌段”是指具有特定特征的聚合物的區(qū)段或部分（例如，梯度共聚物的親水性區(qū)段或疏水性區(qū)段）。在一些情況下，二嵌段共聚物只包括兩個嵌段，這樣的聚合物的示意性概括可看似：[AaBbCc…]m-[XxYyZz…]n,其中各字母代表結(jié)構(gòu)單元，結(jié)構(gòu)單元的各下標(biāo)代表該單元在該特定嵌段中的摩爾分?jǐn)?shù)，3個點表示各嵌段中可能存在更多（但當(dāng)然也可能存在更少）的結(jié)構(gòu)單元，m和n表示二嵌段共聚物中各嵌段的分子量。如由示意圖所表明的，對于各嵌段單獨地控制各結(jié)構(gòu)單元的數(shù)目和性質(zhì)。應(yīng)理解示意圖無意表示并且不應(yīng)當(dāng)解釋為暗示每一個嵌段中結(jié)構(gòu)單元的數(shù)目或結(jié)構(gòu)單元的不同類型的數(shù)目之間的任何關(guān)系。示意圖也無意描述結(jié)構(gòu)單元在特定嵌段內(nèi)的任何特定排列。即，除非另外明確地指出，否則在各嵌段中，可以以完全隨機(jī)、交替隨機(jī)（alternatingrandom）、規(guī)整交替（regularalternating）、規(guī)整嵌段（regularblock）或隨機(jī)嵌段的構(gòu)型排列結(jié)構(gòu)單元。完全隨機(jī)構(gòu)型可以例如是x-x-y-z-x-y-y-z-y-z-z-z…或y-z-x-y-z-y-z-x-x…。交替隨機(jī)構(gòu)型可以是x-y-x-z-y-x-y-z-y-x-z…，以及規(guī)整交替構(gòu)型可以是x-y-z-x-y-z-x-y-z…。規(guī)整嵌段構(gòu)型具有下列一般構(gòu)型：…x-x-x-y-y-y-z-z-z-x-x-x…，而隨機(jī)嵌段構(gòu)型具有一般構(gòu)型：…x-x-x-z-z-x-x-y-y-y-y-z-z-z-x-x-z-z-z-…。上述一般性實例中沒有一個是單個結(jié)構(gòu)單元或嵌段的特定排列或嵌段中結(jié)構(gòu)單元的數(shù)目或嵌段的數(shù)目意味著或應(yīng)當(dāng)被解釋為以任何方式影響或限制本發(fā)明的二嵌段共聚物的實際結(jié)構(gòu)。還應(yīng)理解，包括結(jié)構(gòu)單元的圓括號不表示并且不應(yīng)被解釋為表示結(jié)構(gòu)單元本身形成嵌段。即方括號內(nèi)的結(jié)構(gòu)單元可以以任何方式與嵌段內(nèi)的其他結(jié)構(gòu)單元組合，即完全隨機(jī)、交替隨機(jī)、規(guī)整交替的、規(guī)整嵌段或隨機(jī)嵌段構(gòu)型。因此在二嵌段共聚物1中，p、q和r代表嵌段中該結(jié)構(gòu)單元的摩爾分?jǐn)?shù)，其無意并且也不得解釋為表示或暗示括號內(nèi)的結(jié)構(gòu)單元在嵌段內(nèi)包含嵌段。因此，當(dāng)在本文中提及電荷中性的結(jié)構(gòu)單元可在本發(fā)明二嵌段共聚物的第一嵌段的第一結(jié)構(gòu)單元之間“隨機(jī)散布”時，其是指第一嵌段可具有在屬類上與上文針對完全隨機(jī)構(gòu)型所描述的結(jié)構(gòu)類似的結(jié)構(gòu)。在一些實施方案中，本文中描述的任何嵌段共聚物在大約中性pH下的水溶液或介質(zhì)中的溶解度為1mg/mL以上，5mg/mL以上，10mg/mL以上，25mg/mL以上，50mg/mL以上，100mg/mL以上和500mg/mL以上。在一些實施方案中，特別是對于具有親水性(例如，陽離子性親水性)第一嵌段的二嵌段聚合物，存在于疏水嵌段中的3個種類（陰離子性的、陽離子性的和疏水性的）以隨機(jī)共聚物嵌段的形式存在，或以散布的順序存在而使嵌段在其整個長度上是大致凈中性電荷的。在一些情況下，該定位提供了增加的嵌段共聚物的溶解度。在某些實施方案中，本文中提供了表1中所示的二嵌段共聚物;在某些情況下，此類共聚物用作多核苷酸復(fù)合劑（complexingagent）和載體。應(yīng)理解，可將表1和本文中其它部分描述的二嵌段共聚物的特征轉(zhuǎn)移至本文中的其他二嵌段共取物，從而基于本文中的公開內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠制備此類共聚物，其因而將在本發(fā)明的范圍內(nèi)。示例性二嵌段共聚物的第一嵌段由甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)的單體殘基組成，所述甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯在生理pH下高效地結(jié)合至核酸并且使核酸縮合。本文中描述的示例性聚合物的第二嵌段包含DMAEMA的單體殘基（作為陽離子性結(jié)構(gòu)單元）;丙基丙烯酸(PAA)的單體殘基（作為陰離子性結(jié)構(gòu)單元的），其由于有疏水性的丙基取代基，因此也作為疏水性增強(qiáng)部分的貢獻(xiàn)者;和甲基丙烯酸丁酯（butylmethylacrylate）(BMA)的單體殘基（作為分開的結(jié)構(gòu)單元），其構(gòu)成或包含疏水性增強(qiáng)部分。在某些情況下，第二嵌段使得結(jié)合的核酸能夠通過pH誘導(dǎo)的構(gòu)象變化（所述構(gòu)象變化在一些情況下導(dǎo)致膜失去穩(wěn)定）逃離內(nèi)體。在一些情況下，在生理條件下，第二或疏水核心嵌段以相似的量具有帶正電荷(例如，質(zhì)子化的DMAEMA)殘基和負(fù)電荷(例如，去質(zhì)子化的PAA)的殘基，從而通過離子對的形成導(dǎo)致核心的大致電荷中性和電荷穩(wěn)定化。在某些情況下，在本文中描述的聚合物-核酸組合物被攝入細(xì)胞的內(nèi)體區(qū)室后，內(nèi)體環(huán)境的更低的pH使第三結(jié)構(gòu)單元(例如，PAA羧酸根)的陰離子性殘基質(zhì)子化，從而具有膜破裂性。在一些情況下，一些或所有陰離子性殘基的質(zhì)子化或中和導(dǎo)致PAA酸性殘基的電中和以及在某些情況下導(dǎo)致聚合物的構(gòu)象變化成為疏水性的膜去穩(wěn)定化形式。表1.聚(DMAEMA)macroCTA、所得的二嵌段共聚物的分子量、多分散性和單體組成以及它們相應(yīng)的命名。a如通過串聯(lián)至ViscotekGPCmaxVE2001和折射計（refractometer）VE3580(Viscotek，Houston，TX)的SECTosohTSK-GELR-3000和R-4000柱(TosohBioscience，Mongomeryville，PA)測定的。含有0.1wt%LiBr的HPLC級DMF用作流動相。使用一系列聚(甲基丙烯酸甲酯)標(biāo)準(zhǔn)測定合成的共聚物的分子量。b如通過1HNMR光譜法(3wt%于CDCL3中;BrukerDRX499)測定的。以任何適當(dāng)?shù)姆绞街苽浔疚闹惺褂玫木?DMAEMA)和其他聚合物實體(例如，BMA、DMAEMA和PAA的共取物或共聚物嵌段)。在一種情況下，通過在RAFTCTA、ECT和自由基引發(fā)劑存在的情況下聚合DMAEMA來制備聚（DMAEMA）。在一些情況下，將嵌段聚(DMAEMA)(9,100g/mol，DP58)用于制備一系列二嵌段共聚物，其中增加BMA的含量并且保持等摩爾量的DMAEMA和PAA。所得聚合物的特征示于表1中。對于所有7種二嵌段（假定聚合物的總分子量為大約20,000g/mol）觀察到相似的嵌段大小。在某些實施方案中，選擇更低的分子量。在一些情況下，更低分子量的聚合物可使得聚合物毒性降至最低并且使得能夠腎清除聚合物以確保能夠轉(zhuǎn)換成體內(nèi)檢測。表1中還顯示了理論和實驗推斷的第二嵌段的單體組成。所列的各聚合物是一類相關(guān)聚合物的實例。例如，P7類的聚合物具有幾種形式，其中一種在表1中進(jìn)行了表征。雖然所有聚合物相對接近理論組成，但在所有情況下均觀察到一定的偏差，所述偏差可能是由于單體反應(yīng)性比率（reactivityratio）的差異造成的?？蛇x擇地，反轉(zhuǎn)二嵌段聚合物上嵌段的方向，以使聚合物的ω末端是親水性嵌段。在不同實施方案中，這可用任何適當(dāng)?shù)姆绞?，包括許多合成方法來實現(xiàn)。例如，本發(fā)明的嵌段共聚物的合成始于PAA/BMA/DMAEMA疏水性嵌段的制備，然后在第二合成步驟中通過將所得的PAA/BMA/DMAEMAmacroCTA經(jīng)歷第二RAFT聚合步驟來加入親水性帶電荷的嵌段。一些變通方法包括還原PAA/BMA/DMAEMAmacroCTA以形成巰基末端，然后將預(yù)先形成的親水性帶電荷的聚合物共價連接至形成的巰基。該合成方法提供了在聚合鏈的親水性末端的ω-末端上引入反應(yīng)性基團(tuán)的方法，從而提供了化學(xué)綴合至聚合物的可選擇的方法。二嵌段共聚物P7，本發(fā)明的聚合物的一個實例，由兩個嵌段組成，一個是聚(DMAEMA)，其在生理pH下是親水性的并且?guī)щ姾桑硪粋€嵌段是單體單元:疏水性(BMA)和離子化的/疏水性的或可離子化的/疏水性單元(PAA，DMAEMA)的隨機(jī)共聚物。定義和實施方案應(yīng)理解，關(guān)于本申請，除非另外明確地指出，否則單數(shù)的使用包括復(fù)數(shù)并且反之亦然。即，“a”和“the”是指一個或多個所述單詞修飾的名詞。例如，"所述聚合物"或"一種核苷酸"可以指一個/種聚合物或核苷酸或指多個/種聚合物或核苷酸。出于同樣的原因，除非明確地指出或根據(jù)上下文很顯然地看出其含義確非如此，否則“聚合物”和“核苷酸”可指一個/種聚合物或一個/種核苷酸并且也可指多個/種聚合物或核苷酸。如本文中所使用的，近似的單詞例如但不限于“大約”、“大體上”、“基本上”和“大致”是指所修飾的限制成分不必正好是寫出的形式，而是其可在一定程度上與該書面描述不同。描述可變化的程度將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員可接受并且仍然認(rèn)為該要素具有該要素或限定的特征和能力的變化有多大。通常，但是視之前的論述而定，由近似的詞語修飾的本文中的許多數(shù)值可與所述數(shù)值相異至少±15%、大約±15%、大約±10%、大約±5%、大約±3%、大約±2%或大約±1%。作為本發(fā)明的一個特定的非限定性實例，本發(fā)明的二嵌段共聚物的第二嵌段（其在正常生理pH下包含陽離子和陰離子種類）描述為是“總電荷基本上是中性的”和基本上是疏水性的。然而，在實驗上，極難獲得真正的中性，而是陽離子性種類或陰離子性種類可在一定程度上占優(yōu)勢，如表1中舉例說明的。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可接受具有稍微過量的一種或另一種帶電荷種類的第二嵌段仍然為“基本上中性的”。如本文中所使用的，“聚合物”是指由一個或多個更小的稱為“單體”的分子組成的分子。單體可與其本身反應(yīng)，從而產(chǎn)生均聚物，或其可與一個或多個其他單體反應(yīng)，從而產(chǎn)生共聚物?？蓪⒊山M的單體反應(yīng)以形成“預(yù)聚物（prepolymer）”，然后它們組合在一起形成聚合物。單體包括聚合物的‘結(jié)構(gòu)單元'?！半姾芍行浴被颉安粠щ姾伞钡慕Y(jié)構(gòu)單元是指其中在生理pH下沒有原子具有完全正電荷或負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)單元，即偶極分子仍然被認(rèn)為是“電荷中性的”或“不帶電荷的”。電荷中性結(jié)構(gòu)單元的一個非限定性實例可以是從甲基丙烯酸丁酯CH2=C(CH3)C(O)O(CH2)3CH3單體衍生的結(jié)構(gòu)單元。如本文中所使用的，“烷基”是指完全飽和（無雙鍵或三鍵）的直鏈或支鏈烴(只有碳和氫)基。烷基的實例包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。如本文中所使用的，“烷基”包括“亞烷基”，其是指具有2個而非1個開放化合價（以與其他基團(tuán)結(jié)合）的直鏈或支鏈完全飽和的烴基。亞烷基的實例包括但不限于亞甲基-CH2-、亞乙基、-CH2CH2-、亞丙基、-CH2CH2CH2-、亞正丁基-CH2CH2CH2CH2-、亞仲丁基-CH2CH2CH(CH3)-等。本發(fā)明的烷基可任選地用一個或多氟基取代。如本文中所使用的，“mC至nC”（其中m和n是整數(shù)）表示指定基團(tuán)中可能的碳原子的數(shù)目。即，基團(tuán)可包含“m”至“n”個（包括上下限）碳原子。本發(fā)明的烷基可包含1至10個碳原子，即，m是1以及n是10。當(dāng)然，特定的烷基可能更受限。例如但不限于此，本發(fā)明的烷基可由3至8個碳原子組成，在該情況下其可表示為(3C-8C)烷基。這些數(shù)字被包括在內(nèi)，并且包括具有指定碳原子數(shù)目的所有直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)。例如但不限于此，“C1至C4烷基”基團(tuán)是指具有1至4個碳原子的所有烷基基團(tuán)，即CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-、CH3CH(CH3)-、CH3CH2CH2CH2-、CH3CH2CH(CH3)-、(CH3)2CHCH2-和(CH3)3CH-。如本文中所使用的，環(huán)烷基是指其中烷基鏈的末端碳原子彼此共價連接的烷基。數(shù)字“m”和“n”是指所形成的環(huán)中的碳原子數(shù)目。因此例如，(3C-8C)環(huán)烷基是指3、4、5、6、7或8元環(huán)，即環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷和環(huán)辛烷。本發(fā)明的環(huán)烷基可任選地用一個或多個氟基和/或一個或多個烷基取代。如本文中所使用的，“苯基”僅指基，如所顯示的，其可任選地用一個或多個氟基取代。如本文中所使用的，“疏水性增強(qiáng)部分”在本文中可與“疏水性種類”互換使用，并且是指共價連接至二嵌段共聚物的結(jié)構(gòu)單元的取代基，此類結(jié)構(gòu)單元具有所述疏水性增強(qiáng)部分的后將導(dǎo)致二嵌段共聚物比在不加入該部分的情況下更具膜破裂性或以其它方式更能使膜去穩(wěn)定。此類部分的實例包括但不限于烷基、環(huán)烷基和苯基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代。在一些實施方案中，疏水性增強(qiáng)部分具有大約1或更高的π值。化合物的π值是其相對親水-親脂性值的量度(參見，例如，Cates，LA，"CalculationofDrugSolubilitiesbyPharmacyStudents"AmJPharmEduc45：11-13(1981))。本文中描述的疏水性單體殘基或結(jié)構(gòu)單元包括一個或多個疏水性種類。此外，親水性單體殘基包括一個或多個親水性種類。關(guān)于上文顯示的本發(fā)明的非限定性示例性聚合物IV1，這樣的聚合物可表征為“乙烯型的（ethylenic）”，因為結(jié)構(gòu)單元是從乙烯-C=C-（每一個單體的官能團(tuán)）的反應(yīng)衍生的。上述實例的特定的乙烯型單體可進(jìn)一步描述為是“丙烯酸的”，因為它們都是丙烯酸CH2=CHC(O)OH的衍生物，上述第一單體是甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯，第二單體是2-丙基丙烯酸以及第三單體是甲基丙烯酸丁酯。如本文中所使用的，“正常生理pH”是指哺乳動物身體主要流體例如血液、血清、正常細(xì)胞的細(xì)胞溶膠等的pH。此外，如本文中所使用的，可與“大致生理pH”或“大致中性的pH”互換使用的“正常生理pH”，通常是指大致中性的pH(即，大約pH7)，包括例如，為大約7.2至大約7.4的pH。在特定的情況下，“正常生理pH”是指水性介質(zhì)例如血液、血清等中大致中性的pH。如本文中所使用的，RNA是指包含A、C、G或U核苷酸的多核苷酸，DNA是指包含dA、dC、dG和dT的多核苷酸，其中“d”表示糖是脫氧核糖。如本文中所使用的，“天然DNA類似物”或“天然RNA類似物”是其中用一個或多個天然核苷酸取代特定DNA或RNA的天然核苷酸但仍然展示原始DNA或RNA的功能性的多核苷酸。這包括在非天然環(huán)境中天然發(fā)生的核苷酸，例如，核糖核苷酸替代DNA分子中的脫氧核糖核苷酸，或脫氧核糖核苷酸替代RNA分子中的核糖核苷酸。如本文中所使用的，“合成DNA類似物”或“合成RNA類似物”是指由一個或多個經(jīng)修飾的核苷酸組成的多核苷酸。“經(jīng)修飾的核苷酸”是指包含化學(xué)改變（chemicallyaltered）的堿基、糖和/或磷酸二酯鍵的非天然發(fā)生的核苷酸?；瘜W(xué)改變可包括天然核苷酸的單個原子的添加、缺失或置換或者該核苷酸的整個官能團(tuán)的添加、缺失或置換。為了本發(fā)明的目的，經(jīng)修飾的核苷酸確實可包含與天然核苷酸相似度極低（如果真有的話）、但仍然能夠被整合入上述一般性結(jié)構(gòu)的多核苷酸內(nèi)的分子。合成DNA或RNA類似物通常得到保持的一個性質(zhì)是該分子通常帶負(fù)電荷（如同所有天然多核苷酸），從而其可與本發(fā)明的二嵌段共聚物復(fù)合。不受權(quán)利要求中未明確引用的理論束縛，膜去穩(wěn)定化聚合物可直接或間接地引發(fā)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)（例如，內(nèi)體膜）的變化（例如，通透性變化），從而允許試劑（例如，多核苷酸）與聚合物締合地或獨立于聚合物地穿過這樣的膜結(jié)構(gòu)-例如進(jìn)入細(xì)胞或離開細(xì)胞小泡(例如，內(nèi)體)。膜去穩(wěn)定化聚合物可以是(但不必是)膜破裂性聚合物。膜破裂性聚合物可直接或間接地引起細(xì)胞小泡的裂解或細(xì)胞膜的破裂(例如，如對于大部分細(xì)胞膜群體觀察到的)。通常，聚合物的膜去穩(wěn)定化或膜破裂性性質(zhì)可通過不同方法來估量。在一個非限定性方法中，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的變化可通過在測定中估量來觀察，所述測定測量（直接或間接）試劑（例如，多核苷酸）從細(xì)胞膜（例如，內(nèi)體膜）的釋放-例如，通過測定此類試劑或此類試劑的活性在對于該膜而言屬外部的環(huán)境中的存在或不存在來測量。另一個非限定性方法包括測量紅細(xì)胞裂解（溶血作用）-例如，作為用于目的細(xì)胞膜的替代測定。此類測定可在單個pH值下或在一系列pH值下進(jìn)行。優(yōu)選地本文中提供的二嵌段共聚物是生物相容性的。如本文中所使用的，“生物相容性”是指聚合物的性質(zhì)，其特征在于其或其體內(nèi)降解產(chǎn)物對活組織是無害的或是至少最低限度和/或可修復(fù)的損害;和/或不會或至少最低限度地和可控地在活組織中引起免疫反應(yīng)。關(guān)于鹽，在本說明書中優(yōu)選地陽離子性和陰離子性種類都是生物相容性的。如本文中所使用的，“生理上可接受的”可與生物相容性互換。在某些方面，本文中描述的組合物和/或試劑用作體內(nèi)治療劑?！绑w內(nèi)”是指意欲將它們給需要此類治療的受試者施用?！笆茉囌摺笔侵缚赡苁芤嬗谑褂帽景l(fā)明復(fù)合物的治療的任何活的實體。如本文中所使用的，“受試者”和“患者”可互換使用。受試者或患者特別地是指哺乳動物例如但不限于貓、狗、馬、牛、綿羊、兔子等，優(yōu)選在本發(fā)明中是人類。如本文中所使用的，“治療劑”是指本文中的復(fù)合物，當(dāng)其以治療有效量給患病受試者施用時對受試者的健康和狀況具有治療性有益效果。對受試者的健康和狀況的治療性有益效果包括但不限于(1)治愈疾病，(2)減緩疾病的進(jìn)展，(3)使疾病消退，或(4)減輕疾病的一個或多癥狀。如本文中所使用的，治療劑還包括本文中的任何復(fù)合物當(dāng)其給已知患有疾?。ㄔ诒疚闹刑貏e是遺傳病）或懷疑對所述疾病特別易感的患者施用時，對患者的健康和狀況具有預(yù)防性的有益效果。對患者的健康和狀況的預(yù)防性有益效果包括但不限于(1)首先預(yù)防或延遲疾病的發(fā)作，(2)當(dāng)已通過治療有效量的復(fù)合物實現(xiàn)疾病的消退水平時，將疾病維持在該水平，或(3)在使用治療有效量的復(fù)合物的療程結(jié)束后預(yù)防或延遲疾病的復(fù)發(fā)。在一些情況下，治療劑是治療上有效的多核苷酸（例如，RNAi多核苷酸）、治療上有效的肽、治療上有效的多肽或一些其他治療上有效的生物分子。在特定的實施方案中，RNAi多核苷酸是可通過RNAi機(jī)制介導(dǎo)基因表達(dá)的抑制的多核苷酸，包括但不限于信使RNA(mRNA)、siRNA、microRNA(miRNA)、短發(fā)夾RNA(shRNA)、不對稱干擾RNA(aiRNA)、dicer底物和其前體。如本文中所使用的，“活性聚合”是指使用熟知的加成聚合（即，其中將單體一個一個地加至生長中的聚合物鏈上的活性部位的聚合但其中除了有意以外從不完全消除用于另一個單體的繼續(xù)加成的活性部位）的概念合成聚合物的方法。即，除非已給聚合物加帽（這可以是可逆的從而允許聚合繼續(xù)進(jìn)行，或可以被淬滅，這通常是永久性的），否則聚合物鏈實際上總是能夠通過向反應(yīng)混合物中加入更多單體來進(jìn)一步延長。雖然已知許多活性聚合種類，但目前主要類型是陰離子、陽離子和自由基活性聚合。此類聚合當(dāng)中，就本發(fā)明而言，目前自由基聚合是特別吸引人的。自由基聚合包括游離的自由基引發(fā)劑，其取走乙烯型單體的雙鍵中的一個π電子，從而在前述雙鍵中引發(fā)劑與其反應(yīng)的末端相對的另一末端碳原子上產(chǎn)生反應(yīng)性的未配對電子。然后該未配對電子與另一個單體的雙鍵反應(yīng)，從而產(chǎn)生穩(wěn)定的σ鍵和另一個自由基，然后依此類推。對于常規(guī)引發(fā)劑，最終通過終止反應(yīng)終止序列，所述終止反應(yīng)通常是其中兩個增長鏈的不成對電子組合以形成穩(wěn)定的σ鍵的組合反應(yīng)，或其中活性鏈上的自由基從另一個活性鏈或從反應(yīng)混合物中的雜質(zhì)奪走氫原子以產(chǎn)生穩(wěn)定的非反應(yīng)性分子和包含雙鍵的分子的歧化反應(yīng)。在活性聚合中，生長鏈進(jìn)入終止反應(yīng)的能力被消除，從而只通過存在的單體的量有效地限制聚合，即，聚合繼續(xù)進(jìn)行直至單體的供應(yīng)已耗盡。在這一點上，剩下的自由基種類由于用這樣的實體如（但不限于）硝酰基自由基、鹵素分子、氧種類例如過氧化物和金屬對自由基末端基團(tuán)加帽或僅通過與溶劑相互作用等而變得活性大大降低。然而，如果向溶液中加入更多單體，那么聚合反應(yīng)可重新開始，除了如上指出的外。合成可以以任何合適的方式制備本文中描述的聚合物。例如，在某些實施方案中，其中本發(fā)明的聚合物，雖然絕不限定于乙烯型種類，但對于此類聚合物，目前特別優(yōu)選的是通過“活性聚合”制備它們。通過使用活性聚合，可獲得在鏈長度上存在極低多分散性或差異的聚合物。多分散性通常通過將聚合物鏈的重均分子量除以它們的數(shù)均分子量來測量。數(shù)均分子量是單個鏈分子量的和除以鏈的數(shù)目。重均分子量與分子量的平方除以該分子量的分子數(shù)成正比。因為重均分子量總是大于數(shù)均分子量，因此多分散性總是大于或等1。當(dāng)數(shù)目越來越趨于相同，即，當(dāng)多發(fā)散性接近為1的值時，聚合物將越來越接近單分散性（monodisperse），即其中每一條鏈具有完全相同數(shù)目的結(jié)構(gòu)單元。接近1的多分散性值可使用自由基活性聚合來獲得。測定多分散性的方法例如但不限于大小排阻層析、動態(tài)光散射、基質(zhì)輔助激光解吸/電離色譜和電噴霧質(zhì)譜色譜在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的并且將不在本文中進(jìn)一步描述。可逆加成斷裂鏈轉(zhuǎn)移（Reversibleaddition-fragmentationchaintransfer）或RAFT是目前用于合成本發(fā)明的乙烯型主鏈聚合物的優(yōu)選活性聚合技術(shù)。RAFT對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的并且在本文中將只進(jìn)行簡要描述。RAFT包括自由基簡并性鏈轉(zhuǎn)移過程（freeradicaldegenerativechaintransferprocess）。大多數(shù)RAFT方法使用硫羰基硫基化合物，例如但不限于雙硫酯、二硫代甲氨酸酯、三硫代碳酸酯和黃原酸酯（xanthate）來通過可逆鏈轉(zhuǎn)移機(jī)制介導(dǎo)聚合。聚合物自由基與任何前述化合物的C=S基團(tuán)的反應(yīng)導(dǎo)致穩(wěn)定的自由基中間體形成。此類穩(wěn)定的自由基中間體不經(jīng)歷標(biāo)準(zhǔn)自由基聚合的典型的終止反應(yīng)，相反，其再引入能夠利用單體再次引發(fā)或增長的自由基，從而在該過程中形成C=S鍵。至C=S鍵的加成，然后隨后發(fā)生的自由基的斷裂的該循環(huán)繼續(xù)進(jìn)行直至所有單體都被消耗或反應(yīng)被淬滅。在任何特定時間上活性自由基的低濃度限制正常終止反應(yīng)。在其他實施方案中，通過黃原酸/酯的可逆加成斷裂鏈轉(zhuǎn)移(MADIX)(DirectSynthesisofDoubleHydrophilicStatisticalDi-andTriblockCopolymersComprisedofAcrylamideandAcrylicAcidUnitsviatheMADIXProcess"，DanielTaton，等人，MacromolecularRapidCommunications，22，No.18，1497-1503(2001).)通過大分子設(shè)計合成聚合物。聚合物:生物分子結(jié)構(gòu)在本文中的某些實施方案中提供了聚合物:多核苷酸構(gòu)建體或其他構(gòu)建體，包括例如，聚合物:肽構(gòu)建體、聚合物:多肽構(gòu)建體或其他類型的聚合物:生物分子構(gòu)建體。在某些實施方案中，將一個或多個多核苷酸(例如，siRNA)與本文中描述的任何聚合物締合。在不同實施方案中，以任何方式（例如，通過共價和/或非共價相互作用）將多核苷酸、肽、多肽或其他生物分子綴合至聚合物，并且此類綴合可在任何適當(dāng)?shù)奈恢茫ɡ缭诰酆衔锏摩聊┒?、聚合物的ω末端、聚合物的親水末端、聚合物的疏水末端或連接至聚合物的單體側(cè)鏈的側(cè)基。如本文中所使用的，多核苷酸是指由在鏈中共價連接的核苷酸單體的線性鏈組成的有機(jī)聚合物分子的成員，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。簡而言之，核苷酸包含連接至單個磷酸基團(tuán)的核苷（或，按照慣例，當(dāng)提及其整合至多核苷酸內(nèi)時，是作為實際上在聚合酶存在的情況下經(jīng)歷聚合的種類的核苷三磷酸的簡稱)。核苷相應(yīng)地包含連接至糖部分的堿基。對于天然發(fā)生的多核苷酸，即，由未修飾的活性實體產(chǎn)生的多核苷酸，糖部分是核糖（其產(chǎn)生核糖核酸或RNA）或脫氧核糖（其產(chǎn)生脫氧核糖核酸或DNA）。天然發(fā)生的堿基是腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)或其天然替代物肌苷(I)、胞嘧啶(C)或胸腺嘧啶(T)或其天然替代物尿嘧啶(U)。因此，多核苷酸包含通過一個核苷的糖部分的3'羥基與第二核苷的糖部分（其繼而通過其3'羥基與另一個核苷的5'羥基連接，然后依此類推）的5'羥基之間的磷酸二酯鍵連接的多個核苷。本發(fā)明的DNA或RNA可以是有義或反義的。DNA是雙鏈的，一條鏈?zhǔn)怯辛x鏈并且另一條鏈?zhǔn)瞧浠パa鏈或反義鏈。有義鏈的特征在于相同序列的RNA形式可被翻譯成蛋白質(zhì)。反義鏈不能參與相同序列。其后果是通過特定DNA或其信使RNA進(jìn)行的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生可通過在蛋白質(zhì)產(chǎn)生的適當(dāng)階段引入互補或反義多核苷酸來中斷。簡而言之，蛋白質(zhì)的產(chǎn)生在兩個階段（轉(zhuǎn)錄和翻譯）發(fā)生。在轉(zhuǎn)錄中，DNA用作模板產(chǎn)生信使RNA或mRNA。在翻譯階段，mRNA轉(zhuǎn)移至細(xì)胞的區(qū)域，在所述區(qū)域中其與DNA提供至核糖體的遺傳信息交流，所述核糖體是實際上組裝由DNA編碼的蛋白質(zhì)的細(xì)胞機(jī)器。包含與mRNA的序列互補的核酸序列的反義多核苷酸可結(jié)合mRNA或與之雜交，隨后雜交的mRNA通過一個或多個生物化學(xué)機(jī)制降解，從而阻止mRNA的指令到達(dá)核糖體。目前本發(fā)明的多核苷酸優(yōu)選是RNA。本發(fā)明的RNA可以是有義或反義mRNA、microRNA或miRNA或短干擾RNA、siRNA。上文中描述了mRNA。miRNA是長度為大約21至23個核苷酸的單鏈RNA分子。它們的功能是調(diào)控基因表達(dá)。miRNA由從DNA轉(zhuǎn)錄但不被翻譯成蛋白質(zhì)的基因編碼。相反地，它們是從稱為初級miRNA（pri-miRNA）的初級轉(zhuǎn)錄物加工成稱為miRNA前體（pre-miRNA）的短莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，最后加工成功能性miRNA。功能性miRNA與一個或多個mRNA部分互補。這樣，它們表現(xiàn)與上述反義多核苷酸相似的性能并且阻止mRNA指令到達(dá)核糖體。因此它們能夠下調(diào)基因表達(dá)。雖然miRNA本身從基因組轉(zhuǎn)錄，但siRNA、小干擾或短一干擾RNA并不從基因組轉(zhuǎn)錄。siRNA，自其在1999年被發(fā)現(xiàn)以來，已成為分子生物學(xué)家研究最多的多核苷酸之一，并且目前被認(rèn)為是下一代藥物的首要候選物，因為它們潛在地能夠沉默事實上任何基因的表達(dá)。為了本發(fā)明的目的，目前已知的或在將來可知的任何siRNA均可用于與本文中的二嵌段共聚物形成本發(fā)明的復(fù)合物，從而可被轉(zhuǎn)運入活細(xì)胞的內(nèi)部，以用于但不限于治療、預(yù)防或診斷目的。最初有人認(rèn)為外源加入的siRNA要象siRNA一樣有活性必須具有特定長度(21-23bp)并擁有非常特別的2堿基突出，但現(xiàn)在很清楚，在哺乳動物細(xì)胞中更長或更短的平端以及27+bpRNA在基因沉默上同樣有效。更短的siRNA可被直接載入RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)，而更長的雙鏈RNA可被細(xì)胞質(zhì)多結(jié)構(gòu)域內(nèi)切核酸酶Dicer在細(xì)胞質(zhì)中切成更短的siRNA。簡而言之，長的雙鏈RNA進(jìn)入細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。長的雙鏈RNA被稱為Dicer的RNA酶III樣酶加工成20至25個核苷酸的siRNA。然后siRNA組裝至稱為RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體或RISC的含有內(nèi)切核糖核酸酶的復(fù)合體。在整合入RISC后，雙鏈siRNA的有義鏈解開和/或被切割，留下siRNA反義鏈，其引導(dǎo)RISC至互補mRNA分子。然后siRNA與互補mRNA結(jié)合，并且一旦結(jié)合，RISC將切割靶mRNA，從而有效地沉默與該RNA結(jié)合的基因?？膳c本發(fā)明的二嵌段共聚物形成復(fù)合物從而被轉(zhuǎn)運入活細(xì)胞的多核苷酸的另一個亞類是所謂的“被鎖核酸”或LNA多核苷酸。被鎖核酸多核苷酸可通過許多機(jī)制（所述機(jī)制中的一個是核苷的糖部分中2'-氧至4'-碳亞甲基連接的形成）來制備;然而，任何被鎖核酸多核苷酸的用途在本發(fā)明的范圍內(nèi)。LNA的一個特征是，當(dāng)與互補DNA或RNA雜交時，與未修飾的DNA:DNA或DNA:RNA雙鏈體相比，它們具有增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性以及增強(qiáng)的核酸識別。這些性質(zhì)使LNA多核苷酸在眾多分子應(yīng)用中潛在有用。例如，LNA-DNA-LNA構(gòu)建體與siRNA、硫代磷酸酯和2'-O-甲基RNA-DNA構(gòu)建體在Cos-7細(xì)胞中抗辣椒素受體亞型I(VRl)的表達(dá)的比較顯示，雖然siRNA是最有效力的抗VRI表達(dá)的反義試劑，但LNA-DNA-LNA構(gòu)建體抑制VRl的效力是同序列的硫代磷酸酯和2'O-甲基寡核苷酸的175和550倍。Grunweller，A，等人，2003，NAR，312185-3193。本發(fā)明的一個方面是連接至文中描述的任何聚合物或與之締合（例如，以共價和/或非共價方式，包括離子相互作用、氫鍵相互作用和/或范德瓦爾斯相互作用）的多核苷酸或多個多核苷酸。在某些實施方案中，聚合物與多核苷酸之間的締合可通過共價鍵、非共價相互作用或其組合實現(xiàn)。在特定的實施方案中，使用聚合物(例如，其第一嵌段的)與多核苷酸的非共價締合。非共價相互作用包括但不限于離子相互作用、氫鍵和范德瓦爾斯力，但為了本發(fā)明的目的，非共價相互作用包括離子相互作用。離子相互作用在聚合物的陽離子結(jié)構(gòu)單元（例如，其第一嵌段的）與多核苷酸（由于磷酸二酯鍵的原因其天然帶負(fù)電荷）之間產(chǎn)生：非共價締合可通過幾個另外的方法來實現(xiàn)?？捎脤?dǎo)致它們具有對于彼此的親和力的化學(xué)部分(例如連接（linkage）、芳基硼酸-水楊羥肟酸、亮氨酸拉鏈或其他肽基序、聚合物與多核苷酸上的正電荷與負(fù)電荷之間的離子相互作用或其他類型的非共價化學(xué)親和連接)修飾多核苷酸和/或聚合物。此外，可通過與共價連接至聚合物的小溝結(jié)合試劑或嵌入試劑形成聚合物來將雙鏈多核苷酸復(fù)合本發(fā)明的聚合物。在一些實施方案中，可通過任何標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)綴合技術(shù)將多核苷酸化學(xué)綴合至聚合物。聚合物與多核苷酸之間的共價鍵可以是不可切割的，或可使用可切割的鍵。特別優(yōu)選的可切割鍵是在細(xì)胞質(zhì)的還原環(huán)境中離解的二硫鍵。共價結(jié)合通過化學(xué)綴合法來實現(xiàn)，包括但不限于胺-羧基連接體、胺-巰基連接體、胺-碳水化合物連接體、胺-羥基連接體、胺-胺連接體、羧基-巰基連接體、羧基-碳水化合物連接體、羧基-羥基連接體、羧基-羧基連接體、巰基-碳水化合物連接體、巰基-羥基連接體、巰基-巰基連接體、碳水化合物-羥基連接體、碳水化合物-碳水化合物連接體和羥基-羥基連接體?？墒褂胮H敏感型鍵和連接體（包括但不限于腙和乙縮醛鍵合）來進(jìn)行綴合。在本領(lǐng)域內(nèi)建立了眾多的綴合化學(xué)法(參見，例如，Bwconjugatwn，Aslam和Dent，Eds，Macmillan，1998和本文中的其他章節(jié))?？蓪⒍嗪塑账峋Y合至聚合物的α或ω末端，或綴合至聚合物單體上的側(cè)基團(tuán)。就大小和表面電荷表征一系列聚合物和它們各自的siRNA縮合顆粒（siRNA-condensedparticle），所得數(shù)據(jù)示于表2中。在某些情況下，聚合物在溶液中出現(xiàn)單一聚形式(<10nm)。以4:1的理論電荷比從聚合物和siRNA形成的復(fù)合物大小范圍在85至236nm內(nèi)。復(fù)合物的大小針對BMA含量似乎不存在確定的趨勢。然而，在內(nèi)體裂解性嵌段中具有48%的BMA含量的聚合物P7展示85nm±0.20的最小顆粒大小。其余顆粒具有144至236nm的大小，其中最大尺寸的顆粒由在內(nèi)體裂解性嵌段中具有27%的BMA含量的聚合物6形成。進(jìn)一步檢查具有范圍在1:1至8:1之間的電荷比的聚合物P7/siRNA顆粒大小，數(shù)據(jù)示于表3中。隨著電荷比增加，聚合物/siRNA顆粒大小急劇減小，從1:1時的643nm±0.09的值降至8:1時的54nm±0.27的值。表2:作為甲基丙烯酸丁酯含量函數(shù)的以4:1理論電荷比使用siRNA配制的顆粒的大小和ζ電位測量。表3：使用聚合物7（具有最大丁基含量的組成）和siRNA配制的顆粒的大小和ζ電位測量作為電荷比的函數(shù)。在某些情況下，基于ζ電位測量，發(fā)現(xiàn)siRNA/聚合物復(fù)合物的表面電荷對于所有聚合物都相似并且?guī)⑷跽?～0.5mV，范圍在0.13-1.1mV內(nèi))。此外，在一些情況下，使用聚合物7以1:1、2:1、4:1和8:1的+/-形成的復(fù)合物在表面電荷上未顯示差異，同樣具有微弱的正值(0.18-0.99mV)，針對電荷比沒有趨勢。在一些情況下，在1:1的電荷比下，預(yù)期顆粒具有非常少的表面電荷，因為第二嵌段中的PAA和DMAEMA電荷彼此抗衡。在不同情況下，隨著電荷比增加至2:1、4:1和8:1，可能會預(yù)期看到正表面電荷的增加，但有趣的是，這并未被觀察到。在一些情況下，隨著聚合物的量不斷增加，顆粒改變形狀，變得更致密。隨著電荷比不斷增加，可能由于DMAEMA正電荷的有效屏蔽而表面電荷不受影響，因為許多聚合物鏈和siRNA變得包埋在顆粒的核心中了。在某些實施方案中，顆粒大小和表面電荷的改變可能是關(guān)于細(xì)胞的復(fù)合物攝取的相關(guān)設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)。在一些情況下，具有正表面電荷的納米顆粒通過與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜的靜電相互作用促進(jìn)攝取。就它們在與內(nèi)體/溶酶體運輸途徑相關(guān)的pH值下誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶血的能力來評估聚合物和siRNA/聚合物復(fù)合物。對于聚合物1-3未發(fā)生顯著的溶血作用。然而，對于聚合物4，相關(guān)的pH依賴性溶血活性很明顯，并且發(fā)現(xiàn)隨著內(nèi)體裂解性嵌段的BMA含量增加而反應(yīng)性增強(qiáng)。聚合物7展示最大的pH依賴性溶血作用，在pH=7.4時基本上無活性，在pH=6.6時大約25%的溶血，而在pH=5.8時85%的溶血。隨后就溶血活性以它們的siRNA復(fù)合的形式評估聚合物5-7。發(fā)現(xiàn)與聚合物5-7形成的復(fù)合物在所測試的所有電荷比上以相關(guān)的pH依賴性方式溶血。此外，與游離聚合物比較而言，由復(fù)合物展示的溶血增加，并且相對于1:1而言，在4:1的電荷比下更大。聚合物7在4:1的電荷比下顯示最大的溶血活性，在pH=7.4時基本上無溶血作用，在pH=6.8時60%的溶血作用以及在pH5.8下100%的溶血作用。這些數(shù)據(jù)表明此類聚合物的pH響應(yīng)型溶血活性與疏水性增強(qiáng)部分甲基丙烯酸丁酯的引入有關(guān)聯(lián)。該發(fā)現(xiàn)確證了之前關(guān)于pH響應(yīng)型膜去穩(wěn)定化聚合物的報導(dǎo)，所述聚合物已整合疏水性部分例如烷基胺或芳香基團(tuán)以增強(qiáng)羧酸根官能化聚合物的pH依賴性疏水性轉(zhuǎn)換（hydrophobictransition）。膜的破裂和/或膜的去穩(wěn)定化在某些實施方案中，聚合物或聚合物:多核苷酸構(gòu)建體(例如，包括與一個或多個多核苷酸結(jié)合的本文中描述的任何聚合物)是細(xì)胞膜去穩(wěn)定化或破裂性的聚合物(即，使細(xì)胞膜失去穩(wěn)定或破裂細(xì)胞膜)。在某些實施方案中，細(xì)胞膜是但不限于例如細(xì)胞外膜、細(xì)胞內(nèi)膜、小泡、細(xì)胞器、內(nèi)體、脂質(zhì)體或紅細(xì)胞。在一些實施方案中，當(dāng)給細(xì)胞施用時，將膜破裂性聚合物或聚合物：多核苷酸遞送入細(xì)胞。在某些實施方案中，siRNA是待與本發(fā)明的聚合物締合并且隨后與聚合物一起被內(nèi)吞入活細(xì)胞的內(nèi)部的優(yōu)選多核苷酸。內(nèi)吞作用是物質(zhì)（例如，本發(fā)明的聚合物或核酸）顆粒籍以進(jìn)入細(xì)胞而不必穿過質(zhì)膜的過程。物質(zhì)被細(xì)胞膜的一部分包被，然后所述細(xì)胞膜的部分脫出（pinchedoff），從而形成細(xì)胞內(nèi)小泡。當(dāng)物質(zhì)已被內(nèi)吞并且內(nèi)體已酸化時，聚合物的化學(xué)組成被改變，因為聚合物的pKa經(jīng)選擇使得在成熟內(nèi)體中的pH（大約5至6.5）下，酸性單元即本發(fā)明聚合物的陰離子性結(jié)構(gòu)單元的未離子化與離子化形式之間的平衡移向未離子化形式。與聚合物的離子化形式（其相對親水）相反，未離子化形式基本上是疏水性的，并且能夠作用于（即破裂）內(nèi)體膜，這導(dǎo)致物質(zhì)至細(xì)胞溶膠內(nèi)的釋放。使用流式細(xì)胞術(shù)，基于它們的相關(guān)pH響應(yīng)型內(nèi)體裂解性特征就聚合物P4-P7研究電荷比為4:1的siRNA復(fù)合物的細(xì)胞內(nèi)化作用。在對25nM的聚合物復(fù)合的siRNA暴露4小時后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞攝取與第二嵌段的BMA含量正相關(guān)，聚合物P7在該時幀期間顯示最高水平的攝取(23%siRNA陽性細(xì)胞)。之前已證明帶正電荷的復(fù)合物影響陽離子聚合物/核酸復(fù)合物的內(nèi)化，其中帶正電荷的復(fù)合物達(dá)到更高的內(nèi)化速率和轉(zhuǎn)基因表達(dá)。這些結(jié)果不可能是表面電荷或大小的函數(shù)，因為所有顆粒都展示相同的微弱凈正電荷和大小(85-236nm)（均在非特異性內(nèi)吞作用的界限內(nèi)）(表2)。相反地，對攝取的影響可以是含有BMA的嵌段的內(nèi)體裂解效率的函數(shù)?；谌苎Y(jié)果，隨著BMA含量增加，內(nèi)體逃逸的程度增加，從而從細(xì)胞的再循環(huán)減少并且細(xì)胞內(nèi)siRNA的凈積累增加，與含有丙基丙烯酸的生物綴合物相似?；趕iRNA與細(xì)胞膜之間的靜電排斥，所有聚合物制劑都顯示比未與載體復(fù)合的siRNA（裸露的siRNA）大得多的細(xì)胞攝?。ㄟ_(dá)到25倍）。僅在4小時后達(dá)到23%的細(xì)胞對復(fù)合siRNA的內(nèi)化對于治療效果是極具前景的，因為累積的攝取可能在完全48小時的治療后要高得多。此外，siRNA活性被認(rèn)為是催化性的，其可在細(xì)胞質(zhì)中再循環(huán)以破壞多個mRNA轉(zhuǎn)錄物，從而具有長期多世代作用。通過在電荷比為4:1的復(fù)合物存在的情況下溫育HeLa細(xì)胞進(jìn)行24小時來檢查聚合物載體的非特異性細(xì)胞毒性。對于所有受試聚合物觀察到高的相對存活率（在24小時后>90%）?？蓪⒑铣删酆衔铮貏e是陽離子聚合物與可覺察的細(xì)胞毒性相關(guān)聯(lián)。例如，已顯示PEI在許多種細(xì)胞系中觸發(fā)細(xì)胞凋亡和/或壞死。該毒性可通過用親水區(qū)段修飾聚陽離子區(qū)段來降低，然而，在功效與毒性之間通常存在折衷。在該方法中，聚合物遞送載體的電荷中和的第二嵌段的使用很可能維持體外培養(yǎng)HeLa細(xì)胞的高存活性。使用從理論電荷比為4:1的所有聚合物形成的復(fù)合物，利用抗GAPDH的敲低實驗研究載體有效地遞送siRNA的能力。在用復(fù)合物處理后48小時估計GAPDH蛋白的水平。聚合物載體1至3在引發(fā)蛋白質(zhì)水平的降低中無效，這可能是由它們不能介導(dǎo)內(nèi)體逃逸造成的。然而，當(dāng)使用聚合物4作為siRNA載體時，GAPDH蛋白的減少變得明顯。當(dāng)載體的BMA含量增加至內(nèi)體裂解性嵌段的48%(聚合物P7)時，蛋白質(zhì)的敲低進(jìn)一步增加。聚合物P7顯示最大的介導(dǎo)蛋白質(zhì)的siRNA敲低的能力，其中GAPDH降至對照的32%。此外，對照siRNA顯示可忽略的GAPDH蛋白水平的下降。為了進(jìn)一步表征載體效能，就它們敲低GAPDHmRNA水平的能力分析聚合物。與蛋白質(zhì)測量相似，聚合物1-3引發(fā)極低的mRNA信號的減少，如通過RT-PCR估計的。再次地，隨著內(nèi)體裂解性嵌段的BMA含量增加，聚合物P4-P7顯示增加的GAPDH的敲低。具體地，對于聚合物P4、P5、P6和P7而言，電荷比為4:1時，GAPDH敲低分別下降至對照的39%、30%、31%和21%?？傮w上，這些結(jié)果與探索DNA的遞送策略的其他研究組的發(fā)現(xiàn)（已發(fā)現(xiàn)疏水結(jié)構(gòu)域，特別是N-油醇基（oleyl）部分、苯丙氨酸殘基和甲基丙烯酸丁酯（如此處所使用的）的加入會增強(qiáng)轉(zhuǎn)染）相符。就電荷比和siRNA劑量對P7（其包括表2的聚合物和相似結(jié)構(gòu)（包括P7的不同形式，例如在本文中可與PRx0729v6互換使用的P7v6））介導(dǎo)基因敲低的能力進(jìn)行進(jìn)一步調(diào)查。發(fā)現(xiàn)理論電荷的改變極大地影響基因敲低。對于1:1、2:1、4:1和8:1的電荷比，GAPDH分別降低至對照水平的51%、42%、21%和14%。特別是在4:1和8:1的電荷比下，基因敲低與可商購獲得的載體HiPerFect（其中GAPDH水平降低80%以上）相似。重要的是，對GAPDH水平的影響對于被遞送的siRNA是特異性的，因為當(dāng)以8:1的電荷比使用對照siRNA時，對GAPDH水平?jīng)]有顯著影響。改變電荷比可能會導(dǎo)致在納米顆粒內(nèi)siRNA凝縮的水平不同。DLS實驗顯示，增加復(fù)合物中共聚物的含量將導(dǎo)致更致密的顆粒(表3)，并且這些功能性研究表明更致密的顆粒可更有效地被內(nèi)化或具有增加的siRNA生物利用度。這些發(fā)現(xiàn)與之前的報導(dǎo)（表明更致密的DNA/聚乙烯亞胺和DNA/多聚賴氨酸復(fù)合物以更高的速率內(nèi)化并且獲得更高的轉(zhuǎn)染效率）相符。進(jìn)行使用電荷比為4:1的P7進(jìn)行的劑量反應(yīng)研究。雖然在1nM或5nMsiRNA上在GAPDH基因表達(dá)上幾乎無反應(yīng)，但當(dāng)使用聚合物7遞送10nM、25nM或50nM的siRNA時，表達(dá)降低至對照的77%、21%和12%。這一敲低水平接近使用50nMHiPerFect一種可商購獲得的陽性對照看到的水平。然而，所有聚合物（包括聚合物7）都顯示與HiPerFect相比較增強(qiáng)的生物相容性，如通過非特異性細(xì)胞毒性測量的。雖然利用更高劑量的siRNA(25-50nM)獲得顯著水平的基因敲低，但為了轉(zhuǎn)化成體內(nèi)應(yīng)用，可能更期望使用更低劑量的siRNA來獲得顯著的降低以避免靶外影響。在一些實施方案中，這通過聚合物/siRNA顆粒的更高效的攝?。赡茏詈玫赝ㄟ^靶向配體完成）來實現(xiàn)。用途在某些實施方案中，施用至受試者并且最終遞送入受試者細(xì)胞內(nèi)的本發(fā)明的多核苷酸優(yōu)選是DNA、RNA或其天然或合成類似物。關(guān)于能夠抑制靶基因表達(dá)的DNA/RNA和其類似物，它們包括這樣的種類，例如但不限于反義多核苷酸、miRNA和siRNA。任選地使用本發(fā)明的聚合物和/或聚合物：多核苷酸復(fù)合物治療的疾病包括，但不限于，病原性病癥、癌癥、炎性疾病、酶缺陷、先天性代謝紊亂、感染、自身免疫病、心血管疾病、神經(jīng)病（neurologicaldisease）、神經(jīng)變性疾病（neurodegenerativedisease）、神經(jīng)肌肉疾病、血液病（blooddisorder）和凝血功能障礙（clottingdisorder）。下列實施例用于舉例說明目的并且不被解釋為限定本發(fā)明。本文中引用的所有出版物就對其引用的信息通過引用合并入本文。實施例在整個本發(fā)明的說明書中，各種已知的首字母縮寫和縮寫用于描述單體或來源于此類單體的聚合的單體殘基。不受限制，除非另外指出，否則“BMA”(或字母“B”作為等同的速記符號)代表甲基丙烯酸丁酯或來源于其的單體殘基，“DMAEMA”(或字母“D”作為等同的速記符號)代表甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯或來源于其的單體殘基，“Gal”是指半乳糖或半乳糖殘基，任選地包括羥基保護(hù)性部分(例如，乙?；?或指其PEG化衍生物（如下所述），HPMA代表甲基丙烯酸2-羥丙酯或來源于其的單體殘基，“MAA”代表甲基丙烯酸或來源于其的單體殘基;“MAA(NHS)”代表甲基丙烯酸的N-羥基-琥珀酰亞胺酯或來源于其的單體殘基，“PAA”(或字母“P”作為等同的速記符號)代表2-丙基丙烯酸或來源于其的單體殘基，“PEGMA”是指PEG化的甲基丙烯酸單體，CH3O(CH2O)7-8OC(O)C(CH3)CH2或來源于其的單體殘基。在各情況下，任何此類名稱表示單體(包括其所有鹽或離子類似物)或來源于該單體的聚合的單體殘基（包括其所有鹽或離子型類似物），通過上下文明確指出的形式對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯然的。實施例1:二嵌段聚合物和共聚物的制備制備下列通式的二嵌段聚合物和共聚物：[A1x-/-A2y]n-[B1x-/-B2y-/-B3z]1-5n其中[A1-A2]是第一嵌段共聚物，由單體A1和A2的殘基組成，[B1-B2-B3]是第二嵌段共聚物，由單體B1、B2、B3的殘基組成，x、y、z是以摩爾%單體殘基表示的聚合物組成n是分子量示例性的二嵌段共聚物：[DMAEMA]-[B-/-P-/-D][PEGMAw]-[B-/-P-/-D][PEGMAW-DMAEMA]-[B-/-P-/-D][PEGMAW-MAA(NHS)]-[B-/-P-/-D][DMAEMA-/-MAA(NHS)]-[B-/-P-/-D][HPMA-/-PDSM]-[B-/-P-/-D]其中：B是甲基丙烯酸丁酯P是丙基丙烯酸D是DMAEMA，其為甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯PEGMA是甲基丙烯酸聚乙二醇酯，其中，例如，w=4至5個或7至8個環(huán)氧乙烷單元)MAA(NHS)是甲基丙烯酸-N-羥基琥珀酰亞胺HPMA是N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺PDSM是甲基丙烯酸吡啶基二硫化物此類聚合物代表其中改變或化學(xué)處理聚合物或共聚物的第一嵌段的組成以產(chǎn)生聚合物（其中第一嵌段是中性的(例如，PEGMA)、陽離子性的(DMAEMA)、陰離子性的(PEGMA-NHS，其中NHS被水解成酸)、兩性的(DMAEMA-NHS，其中NHS被水解成酸)或兩性離子性的(例如，聚[2-甲基丙烯酰氧基-2'三甲基銨甲基磷酸])）的結(jié)構(gòu)。此外，[PEGMA-PDSM]-[B-P-D]聚合物在第一嵌段中包含吡啶二硫基功能性，其可與硫醇化siRNA反應(yīng)以形成聚合物-siRNA綴合物。實施例1.1：通過RAFT制備嵌段共聚物的一般合成方法A.RAFT鏈轉(zhuǎn)移劑用于下列RAFT聚合的鏈轉(zhuǎn)移劑(CTA)：4-氰基-4-(乙基巰基硫代羰基)巰基戊酸(ECT)的合成采用Moad等人，Polymer，2005，46(19):8458-68的方法。簡而言之，在10分鐘內(nèi)將乙硫醇(4.72g，76mmol)在0℃下加至攪拌的氫化鈉(60%于油中)(3.15g，79mmol)的乙醚(150ml)懸浮液中。然后在加入二硫化碳(6.0g，79mmol)之前攪拌溶液進(jìn)行10分鐘。通過過濾收集粗制S-乙基三硫代碳酸鈉(7.85g，0.049mol)，重懸浮于乙醚(100mL)中，然后將其與碘(6.3g，0.025mol)反應(yīng)。在過濾溶液1小時后，用硫代硫酸鈉水溶液洗滌，然后在硫酸鈉上進(jìn)行干燥。然后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)分離粗制的雙(乙基巰基硫代羰基)二硫化物。在回流的情況下將雙(乙基巰基硫代羰基)二硫化物(1.37g，0.005mol)和4,4'-偶氮雙(4-氰基戊酸)(210g，0.0075mol)在乙酸乙酯(50mL)中的溶液加熱18小時。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑后，使用硅膠作為固定相和50:50乙酸乙酯己烷作為洗脫劑，通過柱層析分離粗制4-氰基-4(乙基巰基硫代羰基)巰基戊酸(ECT)。B.聚(甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯)大分子鏈轉(zhuǎn)移劑(聚DMAEMAmacroCTA)。使用ECT和2,2'-偶氮雙(4-甲氧基-2,4-二甲基戊腈)(V-70)(Wakochemicals)作為自由基引發(fā)劑，在氮氣氛下于30℃下在DMF中進(jìn)行DMAEMA的RAFT聚合，進(jìn)行18小時。初始單體對CTA的比率([CTA]0/[M]0)是使得在100%轉(zhuǎn)化率下理論Mn為10,000(g/mol)的值。初始CTA對引發(fā)劑的比率([CTA]0/[I]0)是10:1。通過沉淀入50:50v:v乙醚/戊烷中來分離所得的聚DMAEMA大分子鏈轉(zhuǎn)移劑。將所得的聚合物重新溶解在丙酮中，然后沉淀入戊烷(x3)，然后于真空中干燥過夜。C.通過聚(DMAMEA)macroCTA進(jìn)行的DMAEMA、PAA和BMA的嵌段共聚合將期望的化學(xué)計量量的DMAEMA、PAA和BMA加入至溶解于N,N-二甲基甲酰胺中的聚(DMAEMA)macroCTA(25wt%單體和macroCTA對溶劑)。對于所有聚合，[M]0/[CTA]0和[CTA]0/[I]0分別是250:1和10:1。在加入V70后，用氮清潔溶液進(jìn)行30分鐘，讓其在30℃下反應(yīng)18小時。通過沉淀入50:50v:v乙醚/戊烷中分離所得的二嵌段共聚物。然后將沉淀的聚合物重新溶解在丙酮中，然后沉淀入戊烷(x3)，然后于真空中干燥過夜。針對于聚甲基丙烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)(與ViscotekGPCmaxVE2001和折射計VE3580(Viscotek，Houston，TX)串連的SECTosohTSK-GELR-3000和R-4000柱(TosohBioscience，Montgomeryville，PA))，通過凝膠滲透色譜法(GPC)測定DMF中的聚(DMAEMA)macroCTA和二嵌段共聚物樣品的分子量和多分散性(PDI，Mw/Mn)。將含有1.0wt%LiBr的HPLC級DMF用作流動相。圖1A概述了一些RAFT合成聚合物(PRxO729v6在本申請中和在不同的優(yōu)先權(quán)申請中可與P7v6互換使用)的分子量和組成。圖1B概述了一些RAFT合成聚合物的分子量、粒度和組成。實施例1.2.通過聚(PEGMA)macroCTA進(jìn)行的DMAEMA、PAA和BMA的第二嵌段(B1-B2-B3)共聚合的制備。將期望的化學(xué)計量量的DMAEMA、PAA和BMA加至溶解在N,N-二甲基甲酰胺中的聚(PEGMA)macroCTA(25wt%單體和macroCTA對溶劑)中。對于所有聚合，[M]0/[CTA]0和[CTA]0/[I]0分別是250:1和10:1。在加入AIBN后，用氮氣洗滌溶液進(jìn)行30分鐘，然后讓其在68℃下反應(yīng)6至12小時(圖2)。通過沉淀入50:50v:v乙醚/戊烷中分離所得的二嵌段共聚物。然后將沉淀的聚合物重新溶解在丙酮中，然后沉淀入戊烷(x3)，然后于真空中干燥過夜。使用ViscotekGPCmaxVE2001和折射計VE3580(Viscotek，Houston，TX)，將凝膠滲透色譜法(GPC)用于測定DMF中的聚(DMAEMA)macroCTA和二嵌段共聚物樣品的分子量和多分散性(PDI，Mw/Mn)。將含有1.0wt%LiBr的HPLC級DMF用作流動相。將于CDCl3中進(jìn)行的NMR光譜分析用于確認(rèn)聚合物結(jié)構(gòu)和計算第二嵌段的組成。圖2概述了[PEGMAw]-[B-P-D]聚合物的合成，其中w=7至8。圖3A、3B和3C概述了[PEGMAw]-[B-P-D]聚合物的表征，其中w=7至8。實施例1.3.PEGMA-DMAEMA共聚物的制備和表征使用與實施例1.1和1.2中描述的方法相似的方法進(jìn)行聚合物合成。使用不同投料比的各單體改變第一嵌段中PEGM與DMAEMA的比率，由此產(chǎn)生圖4中描述的共聚物。實施例1.4.PEGMA-MAA(NHS)共聚物的制備和表征。使用獲得第一嵌段共聚物的期望組成的單體投料比，如實施例1.1和1.2中所述進(jìn)行聚合物合成(并且概述于圖5中)。圖6A、6B和6C概述了[PEGMAW-MAA(NHS)]-[B-P-D]聚合物的合成和表征，其中第一嵌段中單體的共聚物比率為70:30。將包含NHS的聚合物在室溫下于pH為7.4至8.5的緩沖水溶液（磷酸鹽或碳酸氫鹽）中溫育1至4小時，以產(chǎn)生水解的（酸性）形式。實施例1.5.DMAEMA-MAA(NHS)共聚物的制備和表征。使用獲得第一嵌段共聚物的期望組成的單體投料比，如實施例1.1和1.2中所述進(jìn)行聚合物合成。圖7A、7B和7C概述了[DMAEMA-MAA(NHS)]-[B-P-D]聚合物的合成和表征，其中第一嵌段中單體的共聚物比率為70:30。可以將包含NHS的聚合物在室溫或37℃下于pH為7.4至8.5的緩沖水溶液（磷酸鹽或碳酸氫鹽）中溫育1至4小時，以產(chǎn)生水解的（酸性）形式。實施例2.用于siRNA藥物遞送的HPMA-PDS(RNA)共聚物綴合物的制備和表征。A.吡啶基二硫基甲基丙烯酸酯單體(PDSMA)的合成。PDSMA的合成方案概述于圖8中。將Aldrithiol-2TM(5g，22.59mmol)溶解于40ml甲醇和1.8mlAcOH中。在30分鐘內(nèi)將溶液作為2-氨基乙硫醇鹽酸鹽(1.28g，11.30mmol)（于20ml甲醇中）的溶液加入。在N2下于室溫下攪拌反應(yīng)物，進(jìn)行48小時。在溶劑蒸發(fā)后，用40ml乙醚洗滌殘留的油2次。將粗制化合物溶解于10ml甲醇中，用50ml的乙醚沉淀產(chǎn)物2次以獲得期望的化合物1（作為淡黃色固體）。產(chǎn)率：95%。將吡啶二硫基乙胺(1，6.7g，30.07mmol)和三乙胺(4.23ml，30.37mmol)溶解于DMF(25ml)和吡啶(25ml)中，然后通過注射器在0℃下緩慢加入甲基丙烯酰氯(3.33ml，33.08mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物進(jìn)行2小時。在反應(yīng)后，利用飽和NaHCO3(350ml)淬滅反應(yīng)，然后利用乙酸乙酯（350ml)進(jìn)行萃取。用10%HCl(100ml，1次)和純水(100ml，2次)進(jìn)一步洗滌合并的有機(jī)層，然后利用MgSO4進(jìn)行干燥。通過柱層析(EA/Hex：1/10至2/1)將純產(chǎn)物純化，為黃色糖漿劑（syrup）。Rf=0.28(EA/Hex=1/1)。產(chǎn)率：55%。B．HPMA-PDSMA共聚物的合成使用2,2'-偶氮-雙-異丁腈(AIBN)作為自由基引發(fā)劑，在氮氣氛下于68℃下在DMF（50wt%單體：溶劑）中進(jìn)行N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)和吡啶二硫基甲基丙烯酸酯(通常以70:30的單體比)的RAFT聚合，進(jìn)行8小時（圖9）。CTA對AIBN的摩爾比是10:1并且單體對CTA的比率被設(shè)置成當(dāng)在100%轉(zhuǎn)化率下時可獲得25,000g/mol的分子量。通過重復(fù)沉淀入乙醚將聚(HPMA-PDS)macro-CTA與甲醇分離。在真空下干燥macro-CTA，進(jìn)行24小時，然后將其用于甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)、丙基丙烯酸(PAA)和甲基丙烯酸丁酯(BMA)的嵌段共聚合。將等摩爾量的DMAEMA、PAA和BMA([M]0/[CTA]0=250)加入至溶解于N,N-二甲基甲酰胺(25wt%單體和macroCTA對溶劑)中的HPMA-PDSmacroCTA。以10:1的CTA對引發(fā)劑比率加入自由基引發(fā)劑AIBN。讓聚合在氮氣氛下于68℃下進(jìn)行8小時。之后，通過4次沉淀入50:50乙醚/戊烷來分離所得的二嵌段聚合物，在沉淀之間將其重新溶解于乙醇。然后用二乙醚洗滌產(chǎn)物1次，在真空中干燥過夜。C．siRNA至HPMA-PDSMA共聚物的綴合硫醇化siRNA可作為具有二硫化物修飾的5'-有義鏈商購獲得(Agilent，Boulder，CO)。通過將冷凍干燥的化合物溶解在水中并且用二硫化物還原劑TCEP(固定在瓊脂糖凝膠中的)處理1小時來制備用于綴合的游離巰基形式。然后將還原的RNA(400μM)與吡啶基二硫化物官能化的聚合物在含有5mM乙二胺四乙酸（EDTA）的磷酸鹽緩沖液(pH7)中反應(yīng)24小時(EDTA)(圖9)。吡啶基二硫化物聚合物與RNA巰基的反應(yīng)產(chǎn)生2-吡啶硫醇，可通過分光光度法測量其來表征綴合效率。為了進(jìn)一步驗證二硫化物交換，將綴合物在SDS-PAGE16.5%的三(羥甲基)甲基甘氨酸凝膠上進(jìn)行電泳。平行地，在進(jìn)行SDS-PAGE之前，用固定的TCEP處理綴合反應(yīng)物的等分以驗證在還原性環(huán)境中RNA從聚合物釋放。以1、2和5的聚合物/RNA化學(xué)計量進(jìn)行綴合反應(yīng)。將針對2-吡啶硫醇釋放的343nm處的UV分光光度法吸光度測量值用于衡量綴合效率。實施例3:siRNA/聚合物復(fù)合物的表征在通過瓊脂糖凝膠阻滯驗證完全的血清穩(wěn)定的siRNA復(fù)合后，使用ZetaPALS檢測器(BrookhavenInstrumentsCorporation，Holtsville，NY，15mW激光，入射束=676nm)就大小和ζ電位表征siRNA/聚合物復(fù)合物。簡而言之，以0.1mg/ml的濃度在磷酸緩沖鹽溶液(PBS，Gibco)中配制聚合物，通過以指定的理論電荷比（基于帶正電荷的DMAEMA（其在pH=7.4時50%被質(zhì)子化)和帶負(fù)電荷的siRNA的）將聚合物加入至GAPDHsiRNA(Ambion)來形成復(fù)合物。在90°的散射角處收集相關(guān)函數(shù)，并且使用25℃下水的粘度系數(shù)和折射率來計算粒度。粒度表示為假定對數(shù)正態(tài)分布的有效直徑。使用ZetaPALSζ電位分析軟件在25℃下測量平均電泳遷移率，并且使用用于水混懸液的Smoluchowsky模型計算ζ電位。實施例4:HeLa細(xì)胞培養(yǎng)將HeLa細(xì)胞即人宮頸癌細(xì)胞(ATCCCCL-2)于37℃和5%CO2下維持在含有L谷氨酰胺(Gibco)、1%青霉素-鏈霉素(Gibco)和10%胎牛血清(FBS，Invitrogen)的極限必需培養(yǎng)基（minimumessentialmedia）(MEM)中。實施例5:載體和siRNA/聚合物復(fù)合物的pH依賴性膜破裂作用。使用溶血作用測定游離聚合物和siRNA/聚合物綴合物在模擬內(nèi)體運輸?shù)膒H值下(細(xì)胞外pH=7.4，早期內(nèi)體pH=6.6，和次級內(nèi)體pH=5.8)的潛在內(nèi)體裂解性活性。簡而言之，在含有EDTA的真空容器中收集人全血。將血液離心，吸出血漿，然后在150mMNaCl中洗滌3次以分離紅細(xì)胞(RBC)。然后將RBC重懸浮于pH7.4、pH6.6或pH5.8的磷酸鹽緩沖液(PB)中。然后在這3個pH值下于37℃下將聚合物(10μg/ml)或聚合物/siRNA復(fù)合物與RBC一起溫育1小時。然后離心完整的RBC，通過在541nm的吸光度測量釋放入上清液的血紅蛋白，作為pH依賴性RBC膜裂解的指標(biāo)。圖10A顯示濃度為10μg/ml的聚合物的溶血作用，圖10B顯示理論電荷比為1:1和4:1的的聚合物5-7的聚合物/siRNA復(fù)合物。將溶血活性針對陽性對照1%v/vTritonX-100進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，其為來自以一式三份重復(fù)進(jìn)行的單個實驗的代表性數(shù)據(jù)±標(biāo)準(zhǔn)差。實施例6:載體介導(dǎo)的siRNA攝取的測量使用流式細(xì)胞術(shù)(BectonDickinsonLSR臺式分析儀)測量siRNA/聚合物復(fù)合物的細(xì)胞內(nèi)攝取。以15,000個細(xì)胞/cm2的密度接種Hela并且讓其貼壁過夜。以4:1的理論電荷比將FAM(5-羧基熒光素)標(biāo)記的siRNA(Ambion)與聚合物在室溫下復(fù)合30分鐘，然后將其以25nM的終siRNA濃度加入至鋪板的HeLas細(xì)胞。在與復(fù)合物一起溫育4小時后，用胰蛋白酶處理細(xì)胞，然后將其重懸浮于具有0.5%BSA和0.01%臺盼藍(lán)的PBS中。如之前針對細(xì)胞外熒光的猝滅和已被細(xì)胞內(nèi)吞的復(fù)合物的辨別所描述的一樣利用臺盼藍(lán)。每樣品分析10,000個細(xì)胞，使用未接受處理的樣品和未用FAM標(biāo)記的siRNA復(fù)合的聚合物測定熒光門控。圖11顯示FAM標(biāo)記的siRNA和使用聚合物4-7形成的聚合物/siRNA復(fù)合物遞送4小時后的HeLa細(xì)胞內(nèi)化。數(shù)據(jù)來自以一式三份進(jìn)行的3個獨立實驗的數(shù)據(jù)，誤差棒表示平均值的標(biāo)準(zhǔn)差(SEM)。實施例7:siRNA/聚合物復(fù)合物的細(xì)胞毒性使用乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性檢測試劑盒(Roche)測定siRNA/聚合物復(fù)合物的細(xì)胞毒性。將HeLa細(xì)胞以每孔12,000個細(xì)胞的密度接種在96孔板中，讓其貼壁過夜。通過向以4：1的理論電荷比向GAPDHsiRNA中加入聚合物(0.1mg/ml原液)并且獲得25nMsiRNA/孔的濃度來形成復(fù)合物。以一式三份向孔中加入復(fù)合物(電荷比=4:1)。在已將細(xì)胞與聚合物復(fù)合物溫育24小時后，除去培養(yǎng)基，然后用PBS洗滌細(xì)胞2次。然后用裂解緩沖液(100μL/孔，20mMTris-HCl，pH7.5，150mMNaCl，1mMNa2EDTA，1mMEGTA，1%Triton，25mM焦磷酸鈉，1mMβ-甘油磷酸酯，1mM原釩酸鈉)在4℃下裂解細(xì)胞，進(jìn)行1小時。在通過移液器抽吸混合后，將20uL的細(xì)胞裂解物1:5稀釋于PBS中，然后通過與100μLLDH底物溶液混合就乳酸脫氫酶（LDH）對其進(jìn)行定量。在溫育10至20分鐘以進(jìn)行顏色形成之后，測量490nm處的吸光度，參照設(shè)置在650nm。圖12A顯示非特異性HeLa細(xì)胞毒性，圖12B顯示作為siRNA聚合物載體的函數(shù)的GAPDH敲低效果。使用以4:1的理論電荷比配制的聚合物/siRNA復(fù)合物用濃度為25nM的抗GAPDH的siRNA轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞。（A）24小時后，收集細(xì)胞裂解物，就乳酸脫氫酶（細(xì)胞活力的量度）對其進(jìn)行測定，數(shù)據(jù)表示為相對于未處理細(xì)胞的水平。(B)48小時后，分別使用GAPDH酶活性測定和RT-PCR檢查蛋白質(zhì)（黑色）和mRNA水平（白色），并且顯示相對于未接受處理的細(xì)胞的數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)來自以一式三份進(jìn)行的3個獨立實驗，誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)差。實施例8:由siRNA/聚合物復(fù)合物導(dǎo)致的GAPDH蛋白和基因敲低的評估使用GAPDH活性測定(Ambion)篩查一系列聚合物用于siRNA遞送的效力。將HeLa(12,000個細(xì)胞/cm2)鋪板在96孔板中。24小時后，在10%血清存在的情況下，以25nM的終siRNA濃度將復(fù)合物（電荷比=4:1）加至細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后48小時估量siRNA-介導(dǎo)的GAPDH蛋白減少的程度。作為陽性對照，按照制造商的條件使用HiPerFect(Qiagen)進(jìn)行平行敲低實驗。按照制造商所描述的，使用動力學(xué)熒光增敏法（kineticfluorescenceincreasemethod）在5分鐘內(nèi)測量剩余的GAPDH活性，按照下列公式計算所述活性：剩余表達(dá)百分比=熒光GAPDH/熒光未處理的，其中熒光=熒光5分鐘-熒光1分鐘。當(dāng)使用siRNA的非靶向序列時，轉(zhuǎn)染方法對GAPDH表達(dá)沒有顯著作用。圖13A顯示在用復(fù)合物處理后48小時通過實時RT-PCR測量的HeLa中的GAPDH敲低（作為電荷比（1:1-8:1）的函數(shù)），圖13B顯示在用復(fù)合物處理后48小時通過實時RT-PCR測量的HeLa中的GAPDH敲低（作為使用聚合物7作為載體的siRNA劑量(1-50nM)的函數(shù)）。將陰性對照siRNA#1(Ambion)和可商購獲得的轉(zhuǎn)染劑HiPerFect(Qiagen)分別用作陰性和陽性對照。在初步篩查以鑒定產(chǎn)生最強(qiáng)的siRNA介導(dǎo)的GAPDH敲低的載體后，使用實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)直接估計siRNA的遞送。在與如上形成的復(fù)合物一起溫育48小時后，用PBS漂洗細(xì)胞。使用Qiagen'sQiashredder和RNeasymini試劑盒分離總RNA。消化(RNase-FreeDNaseSet，Qiagen)樣品中的任何殘留基因組DNA，然后基于制造商的說明書使用RiboGreen測定(MolecularProbes)定量RNA。使用OmniscriptRT試劑盒(Qiagen)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。將25ng總RNA樣品用于cDNA合成，使用針對GAPDH和β肌動蛋白（作為持家基因）的預(yù)先設(shè)計的引物和探針組(AssaysonDemand，AppliedBiosystems)，利用ABISequenceDetectionSystem7000進(jìn)行PCR。反應(yīng)物(總共20μl)由10μL的2XTaqmanUniversalPCRMastermix、1μL引物/探針和2μLcDNA（使用不含核酸酶的水(Ambion)調(diào)整至20μL）組成。使用下列PCR參數(shù)：95℃進(jìn)行90秒，然后進(jìn)行45個循環(huán)：在95℃下進(jìn)行30秒和在55℃下進(jìn)行60秒。將閾值循環(huán)(CT)分析用于定量GAPDH，將其針對β肌動蛋白和相對于未處理HeLa的表達(dá)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。實施例9.聚[HPMA]-b-[(PAA)(BMA)(DMAEMA)]的功能設(shè)計。圖14顯示聚[HPMA]-b-[(PAA)(BMA)(DMAEMA)]的聚合物設(shè)計。通過RAFT聚合物合成策略，使用吡啶基二硫化物末端官能化的CTA形成經(jīng)設(shè)計具有水溶性和pH依賴性膜去穩(wěn)定化性質(zhì)的二嵌段結(jié)構(gòu)來整合多功能性質(zhì)。選擇圖14中突顯的單體化學(xué)功能性以為各聚合物嵌段產(chǎn)生期望的性質(zhì)。重要的是，模塊（module）3被設(shè)計為在生理pH下接近電中性(預(yù)計大約50%的DMAEMA質(zhì)子化和50%的PAA去質(zhì)子化)并且在更低的pH環(huán)境下經(jīng)歷向更具有疏水性和帶正電荷的狀態(tài)的轉(zhuǎn)換。實施例10.吡啶二硫化物-CTA的合成。如圖15中所示合成4-氰基-4-(乙基巰基硫代羰基)巰基戊酸(ECT)前體。通過首先將ECT轉(zhuǎn)變成NHS酯，然后與吡啶二硫基-乙胺反應(yīng)來合成吡啶基二硫化物官能化的RAFT鏈轉(zhuǎn)移劑(CTA)。將ECT(1.05g，4mmol)和N-羥基琥珀酰亞胺(0.460g，4mmol)溶解于100mL的氯仿中。然后將混合物冷卻至0℃，此時加入N,N'二環(huán)己基碳二亞胺(0.865mg，4.2mmol)。將溶液在0℃下保持1小時，然后讓其在室溫下反應(yīng)22小時。然后過濾溶液以除去二環(huán)己基尿素，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮溶液。然后在真空下干燥所得的固體，并且在不進(jìn)行任何進(jìn)一步純化的情況下使用其。然后分開地將NHSECT(1.80g，5.0mmol)和吡啶二硫基-乙胺(0.90g，5.0mmoL)分別溶解于200和300mL氯仿中。然后以3個級分（相隔20分鐘）逐滴加入吡啶二硫基-乙胺的溶液。然后讓混合物在室溫下反應(yīng)2小時。在除去溶劑后，進(jìn)行2個連續(xù)的柱層析(Silicagel60，Merk)(乙酸乙酯:己烷50:50;乙酸乙酯:己烷70:30v/v)，產(chǎn)生粘稠的橙色固體。1HNMR200MHz(CDC13，RT，ppm)1.29-1.41[t，CH3CH2S:3H]，1.85-1.93[s，(CH3)C(CN):3H]，2.33-2.59[m，C(CH3)(CN)(CH2CH2):4H]，2.86-2.97[t，CH2SS:2H]，3.50-3.61[t，NHCH2:2H]，7.11-7.22[m，ArParaCH:IH]，7.46-7.52[m，ArCHOrtho:1H]，7.53-7.62[br，NH:1H]，7.53-7.68[m，ArmetaCH:1H]，8.47-8.60[m，metaCHN1，1H].[00164]硫醇反應(yīng)性聚合物的制備：吡啶二硫化物官能化的聚[HPMA]-b-[(PAA)(BMA)(DMAEMA)]的RAFT聚合。在70℃下在氮氣氛下使用2,2'-偶氮-雙-異丁腈(AIBN)作為自由基引發(fā)劑，在甲醇(50wt%單體:溶劑)中進(jìn)行N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)的RAFT聚合。CTA對AIBN的摩爾比為10:1，并且將單體對CTA的比率設(shè)置成在100%轉(zhuǎn)化率下將獲得25,000g/mol的分子量。通過重復(fù)沉淀入乙醚來將聚(HPMA)macro-CTA與甲醇分離。[00165]在真空下干燥macro-CTA進(jìn)行24小時，然后將其用于甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)、丙基丙烯酸(PAA)和甲基丙烯酸丁酯(BMA)的嵌段共聚合。將等摩爾量的DMAEMA、PAA和BMA（[M]0/[CTA]0=250）加入至溶解于N,N-二甲基甲酰胺中的HPMAmacroCTA(25wt%單體和macroCTA對溶劑)。以10:1的CTA對引發(fā)劑比率加入自由基引發(fā)劑V70。讓聚合在30℃下于氮氣氛中進(jìn)行18小時。之后，通過至50:50v:v乙醚/戊烷中沉淀4次分離所得的二嵌段共聚物，在沉淀之間將其重新溶解于乙醇中。然后用乙醚洗滌產(chǎn)物一次，在真空中干燥過夜。將凝膠滲透色譜法(GPC)用于測定DMF中聚(HPMA)macroCTA和二嵌段共聚物的分子量和多分散性(Mw/Mn，PDI)。分子量計算基于相對于聚甲基丙烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)（在60℃下使用含有0.1wt%LiBr的HPLC-級DMF作為流動相）的柱洗脫時間。將Tris(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)用于還原聚合物末端吡啶基二硫化物，從而釋放2-吡啶硫醇?；趯嶒灉y定的聚合物分子量和2-吡啶硫醇在343nm處于水性溶劑中的摩爾消光系數(shù)(8080M-1cm-1)，就聚(HPMA)macroCTA和二嵌段共聚物測定末端基團(tuán)保護(hù)百分比。實施例11.聚合物-肽綴合物。將與肽轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域肽轉(zhuǎn)運子（transportin）(也稱為觸角足肽（Antennapediapeptide，Antp))序列的融合體用于合成含有羧基末端半胱氨酸殘基的Bak-BH3肽(Antp-BH3)(NH2-RQIKIWFQNRRMKWKKMGQVGRQLAIIGDDINRRYDSC-COOH)的細(xì)胞內(nèi)化形式。為了確保用于綴合的游離巰基，在水中重建肽，然后用固定在瓊脂糖凝膠內(nèi)的二硫化物還原劑TCEP處理1小時。然后將還原的肽(400μM)與吡啶基二硫化物末端官能化的聚合物在含有5mM乙二胺四乙酸(EDTA)的磷酸鹽緩沖液(pH7)中反應(yīng)24小時。如圖16中所顯示的，吡啶基二硫化物聚合物末端基團(tuán)與肽半胱氨酸的反應(yīng)產(chǎn)生2-吡啶硫醇，可通過分光光度計測量其來表征綴合效率。為了進(jìn)一步驗證二硫化物交換，將綴合物在SDS-PAGE16.5%三(羥甲基)甲基甘氨酸凝膠上進(jìn)行電泳。平行地，在進(jìn)行SDS-PAGE之前用固定的TCEP處理綴合反應(yīng)物的等分以驗證在還原環(huán)境中肽從聚合物的釋放。以聚合物/肽化學(xué)計量比1、2和5進(jìn)行綴合反應(yīng)。關(guān)于2-吡啶硫醇釋放的在343nm處的UV分光光度計測量的吸光度測量值分別顯示40%、75%和80%的綴合效率(2-吡啶硫醇摩爾數(shù)/肽摩爾數(shù))。利用SDSPAGE凝膠進(jìn)一步表征肽-聚合物綴合物(圖17)。在聚合物/肽摩爾比為1時，可檢測量的肽通過二硫橋接（通過末端半胱氨酸）形成二聚體。然而，至吡啶基二硫化物的硫醇反應(yīng)是有利的，在聚合物/肽比率等于或大于2時不再看到游離肽條帶(圖17A)。通過用還原劑TCEP處理綴合物，有可能切割聚合物-肽二硫鍵，如由此類樣品中肽條帶的出現(xiàn)所表明的(圖17B)。實施例12.聚[HPMA]-B-[(PAA)(BMA)(DMAEMA)]的pH依賴性膜去穩(wěn)定化性質(zhì)。為了估量聚合物的內(nèi)體裂解性活性的潛能，將膜破裂性測定用于測量聚合物觸發(fā)脂雙層膜的pH依賴性破裂的能力（如圖18中顯示的）。抽取人全血，然后離心以除去血漿。用150mMNaCl洗滌剩下的紅細(xì)胞3次，然后重懸浮于相應(yīng)于生理(pH7.4)、初級內(nèi)體(pH6.6)和次級內(nèi)體(pH5.8)環(huán)境的磷酸鹽緩沖液中。向紅細(xì)胞懸浮液中加入聚合物(1-40μg/mL)或1%TritonX-100并且于37℃下溫育1小時。通過離心沉淀完整的紅細(xì)胞，通過541nm處的吸光度測量上清液中的血紅蛋白含量。測定相對于TritonX-100的百分比溶血作用。相對于1%v/vTritonX-100，聚合物的溶血作用經(jīng)定量在1至40μg/mL的濃度范圍內(nèi)。以一式三份完成該實驗2次，產(chǎn)生相似的結(jié)果。顯示的數(shù)據(jù)代表以一式三份進(jìn)行的單個實驗±標(biāo)準(zhǔn)差。紅細(xì)胞溶血作用衡影在模擬生理(7.4)、初級內(nèi)體(6.6)和次級內(nèi)體(5.8)環(huán)境的pH值下二嵌段共聚物的pH依賴性膜破裂性質(zhì)。在生理pH下，在甚至高達(dá)40μg/mL的聚合物濃度下未觀察到顯著的紅細(xì)胞膜破裂(圖18)。然而，當(dāng)pH下降至內(nèi)體值時，檢測到溶血作用的顯著增加，與pH6.6相比較而言，在pH5.8下膜破裂更大。聚合物的溶血行為與聚合物濃度相關(guān)，于pH5.8的緩沖液中在40μg/mL的聚合物下發(fā)生將近70%的紅細(xì)胞裂解。在內(nèi)體pH下向膜去穩(wěn)定化構(gòu)象的這種急劇“轉(zhuǎn)換”與在生理pH范圍內(nèi)可忽略的膜活性一起表明，該聚合物具有作為無毒細(xì)胞內(nèi)遞送載體的潛能。實施例13.HELA細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)遞送的表征將HeLa，一種人宮頸癌細(xì)胞(ATCCCCL-2)，維持在含有L谷氨酰胺(Gibco)、1%青霉素-鏈霉素(Gibco)和10%胎牛血清的極限必需培養(yǎng)基(MEM)中。在實驗之前，讓HeLa在8孔培養(yǎng)腔室玻片(20,000個細(xì)胞/孔)（用于顯微觀察）或96孔板(10,000個細(xì)胞/孔)（用于其他測定）中貼壁過夜。將聚合物-肽綴合物和對照加入含有1%FBS的MEM中。在向Bak-BH3肽（與Antp(轉(zhuǎn)運子)細(xì)胞穿膜肽融合的）的生物綴合后評估聚合物細(xì)胞內(nèi)遞送潛能。BH3與Antp的融合物已經(jīng)作為細(xì)胞轉(zhuǎn)運結(jié)構(gòu)域（celltranslocationdomain）得到詳盡地研究并且之前已發(fā)現(xiàn)其觸發(fā)細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(Li等人Neoplasia(NewYork，N.Y.2007;9(10):801-811)。然而，據(jù)信通過肽轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域遞送的治療劑可由于在細(xì)胞內(nèi)小泡內(nèi)的隔離（sequestration）而效力遭受阻礙(Sugita等人.BritishJournalofPharmacology.2008，153(6)：1143-1152)。下列體內(nèi)研究證明與二嵌段聚合物的綴合可增強(qiáng)組合的Antp-BH3肽細(xì)胞質(zhì)遞送和促細(xì)胞凋亡功能性。綴合物內(nèi)體逃逸的顯微鏡分析。將胺反應(yīng)性Alexa-488琥珀酰亞胺酯以1:1的摩爾比與Antp-BH3肽在無水二甲基甲酰胺(DMF)中混合。使用PDlO脫鹽柱除去未反應(yīng)的熒光基團(tuán)和有機(jī)溶劑，然后冷凍干燥熒光標(biāo)記的肽。如上所述將Alexa-488標(biāo)記的Antp-BH3綴合至聚合物。將游離肽或聚合物-肽綴合物以25μMAntp-BH3的濃度用于培養(yǎng)在分室的顯微鏡載玻片上的HeLa。處理細(xì)胞15分鐘，用PBS洗滌2次，然后在新鮮培養(yǎng)基中溫育另外30分鐘。再次洗滌樣品，然后在37℃下用4%多聚甲醛固定10分鐘。用含有DAPI的ProLongGoldAntifade試劑封片，使用熒光顯微鏡成像。為了研究聚合物綴合對肽內(nèi)體逃逸的作用，利用熒光顯微鏡分析Alexa-488標(biāo)記的肽。單獨地或作為聚合物生物綴合物遞送熒光標(biāo)記的肽。顯微鏡分析顯示在聚合物綴合后肽的細(xì)胞內(nèi)定位表現(xiàn)顯著差異(圖19)。單獨的肽展示小斑點染色，表明內(nèi)體的區(qū)室化。以聚合物-肽綴合物遞送的樣品展示彌散的熒光模式，與肽擴(kuò)散至整個細(xì)胞質(zhì)相符。代表性圖像舉例說明了(圖19A)以單獨的肽遞送的樣品的小斑點肽染色(綠色)和(圖19B)在肽-聚合物綴合物遞送后細(xì)胞溶膠內(nèi)的彌散性肽熒光。用25μM肽處理樣品15分鐘，在DAPI細(xì)胞核染色（藍(lán)色）后制備用于顯微鏡檢查。綴合物細(xì)胞毒性的測量。使用乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性測定法測定生物綴合物觸發(fā)腫瘤細(xì)胞死亡的效能。在各時間點結(jié)束時，用PBS洗滌細(xì)胞2次，然后用細(xì)胞裂解緩沖液(100μL/孔，20mMTris-HCl，pH75，150mMNaCl，1mMNa2EDTA，1mMEGTA，1%Triton，2.5mM焦磷酸鈉，1mMβ-甘油磷酸，1mM原釩酸鈉)在4℃下裂解細(xì)胞，進(jìn)行1小時。將各樣品的20μl裂解物稀釋入80μlPBS中，通過與100μLLDH底物溶液混合來定量LDH。在10分鐘的溫育后，通過測量490nm處的吸光度來測定LDH。相對于未接受處理的樣品來表示百分比活力。為了估量聚合物-肽綴合物的生物活性，在HeLa宮頸癌細(xì)胞中進(jìn)行細(xì)胞毒性研究。發(fā)現(xiàn)Antp-BH3聚合物綴合物以劑量依賴性方式有效地觸發(fā)HeLa細(xì)胞死亡。在用10μM肽綴合物處理6小時后檢測到低于50%的HeLa活力(圖20A)，并且接受25μM肽綴合物的樣品(圖20B)在少至4小時的暴露后顯示極少的（如果有的話）活細(xì)胞。單獨地接受肽或聚合物的對照樣品展示可忽略的處理效果，并且在對照處理組之間不存在差異。重要的是，缺乏pH反應(yīng)型嵌段的Antp-BH3聚(HPMA)綴合物與兩個對照組相似并且不導(dǎo)致顯著的細(xì)胞毒性，這進(jìn)一步驗證了內(nèi)體裂解性嵌段的功能性(圖20)。線料體膜電位的流式細(xì)胞術(shù)估計。使用JC-1染料估量線粒體膜電位的消失（已知的細(xì)胞凋亡的指標(biāo)）。當(dāng)在細(xì)胞溶膠中擴(kuò)散時JC-1展示綠色熒光，并且在健康細(xì)胞中，其在線粒體膜上形成紅色熒光聚集體(Cossarizza等人.Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications.1993;197(1):40-45)。將HeLa與10μM肽或等量的綴合物或單獨的聚合物一起溫育2小時。以5μg/mL的終濃度加入JC-1，并且溫育15分鐘。用PBS洗滌細(xì)胞2次，用胰蛋白酶進(jìn)行處理，然后重懸浮于0.5%BSA中以用于流式細(xì)胞術(shù)分析?；趯τ诩t色熒光是陰性的綠色熒光細(xì)胞的數(shù)目定量展示線粒體去極化的細(xì)胞的百分比。此處，在用Antp-BH3肽和聚合物肽綴合物處理后，檢測到紅色熒光JC-1聚焦體的顯著消失，從而檢測到線粒體極化的消失(圖21A)。聚合物對照與未接受處理的細(xì)胞相似，然而單獨的和在聚合物綴合物中的Antp-BH3分別導(dǎo)致展示線粒體極性消失的細(xì)胞的百分比有大約4倍和10倍的增加。Caspase3/7活性測定。使用可商購獲得的測定試劑盒測量Caspase3/7的激活。該測定使用促熒光caspase3/7底物，該底物一旦被酶促切割將產(chǎn)生熒光，從而允許使用熒光酶標(biāo)儀（fluorescentplatereader）測定相對酶活性。此處，除了等于綴合物樣品的量的單獨聚合物外，將HeLa與25μM肽(單獨的或作為聚合物綴合物)一起溫育30分鐘。之后，將caspase3/7熒光發(fā)生指示劑（fluorigenicindicator）直接加入各樣品的培養(yǎng)基。將板搖動1小時，然后使用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行測定。數(shù)據(jù)表示為相對于未接受處理的樣品的caspase活性百分比。指示促細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的caspases3和7的激活可使用特異于此類蛋白酶的促熒光底物來測量。圖21B顯示含有單獨的聚合物的對照相對于未接受處理的陰性對照展示相當(dāng)量的caspase活性。然而，在用Antp-BH3肽本身或以聚合物綴合物形式處理后檢測到快速的caspase激活(大約2.5倍)。Antp-BH3單獨地或作為聚合物綴合物的相似作用可能表明caspase信號轉(zhuǎn)導(dǎo)被使用單獨的肽的處理飽和，或存在用于放大caspase激活狀態(tài)中的擾動的其他正反饋機(jī)制。在最低限度上，這些結(jié)果表明不存在因綴合至聚合物而導(dǎo)致的位阻或肽誘導(dǎo)的caspase活性的其他降低。本發(fā)明涉及以下實施方式：實施方式1.一種共聚物，其包含：(a)第一嵌段，其包含在正常生理pH下為親水性的第一結(jié)構(gòu)單元;(b)第二嵌段，其包含：(i)在正常生理pH下為陽離子性的并且可以與第一結(jié)構(gòu)單元相同或不同的第二結(jié)構(gòu)單元;(ii)在正常生理pH下為陰離子性的第三結(jié)構(gòu)單元;(iii)疏水性增強(qiáng)部分，其中：該疏水性增強(qiáng)部分共價連接第二結(jié)構(gòu)單元;該疏水性增強(qiáng)部分共價連接第三結(jié)構(gòu)單元;該疏水性增強(qiáng)部分包含在第二嵌段的第四結(jié)構(gòu)單元中;或其任何組合。實施方式2.實施方式1的共聚物，其中第二嵌段在總電荷上基本為中性的。實施方式3.實施方式1至2中任一項的共聚物，其中共聚物是二嵌段共聚物。實施方式4.實施方式1至3中任一項的共聚物，其中第一結(jié)構(gòu)單元是陽離子性的、陰離子性的、中性的或兩性離子的。實施方式5.實施方式4的共聚物，其中第一結(jié)構(gòu)單元是陽離子性的。實施方式6.實施方式1至5中任一項的共聚物，其中第一嵌段包含多個第一結(jié)構(gòu)單元。實施方式7.實施方式1至6中任一項的共聚物，其中第二嵌段包含多個第二結(jié)構(gòu)單元、多個第三結(jié)構(gòu)單元和多個疏水性增強(qiáng)部分。實施方式8.實施方式1至7中任一項的共聚物，其中所述正常生理pH是大約7.2至大約7.4。實施方式9.一種共聚物，其包含：(a)第一嵌段，其包含在正常生理pH下為陽離子性的第一結(jié)構(gòu)單元;(b)第二嵌段，其包含：(i)在正常生理pH下為陽離子性的并且可以與第一結(jié)構(gòu)單元相同或不同的第二結(jié)構(gòu)單元;(ii)在正常生理pH下為陰離子性的第三結(jié)構(gòu)單元;(iii)疏水性增強(qiáng)部分，其中：該疏水性增強(qiáng)部分共價連接第二結(jié)構(gòu)單元;或該疏水性增強(qiáng)部分共價連接至第三結(jié)構(gòu)單元;或該疏水性增強(qiáng)部分包含在第二嵌段的第四結(jié)構(gòu)單元中;或其任何組合;和第二嵌段在總電荷上基本上是中性。實施方式10.一種內(nèi)體裂解性共聚物，其包含：(a)第一嵌段，該第一嵌段為親水性嵌段；和第二嵌段，該第二嵌段為膜去穩(wěn)定化疏水性嵌段，其包含：(i)在大約中性pH下為陰離子性的第一可帶電荷種類(ii)在大約中性pH下為陽離子性的第二可帶電荷種類。實施方式11.一種內(nèi)體裂解性共聚物，其包含：(a)第一嵌段，該第一嵌段是包含在大約中性pH下為陽離子性的第一可帶電荷種類的親水性嵌段;(b)第二嵌段，該第二嵌段為膜去穩(wěn)定化的疏水性嵌段，其包含：(i)在大約中性pH下為陰離子性的第二可帶電荷種類;和(ii)在大約中性pH下為陽離子性的第三可帶電荷種類;和(c)與第一嵌段締合的寡核苷酸。實施方式12.一種內(nèi)體裂解性共聚物，其包含：(a)第一嵌段，該第一嵌段為親水性嵌段，(b)第二嵌段，該第二嵌段是包含丙烯酸殘基或烷基丙烯酸殘基的膜去穩(wěn)定化疏水性嵌段。實施方式13.實施方式1至12的任一項的聚合物，其中第一聚合物嵌段為大約10,000道爾頓。實施方式14.實施方式1至12的任一項的聚合物，其中第一聚合物嵌段為大約2,000道爾頓至大約30,000道爾頓。實施方式15.實施方式1至12的任一項的聚合物，其中第一聚合物嵌段為大約8,500道爾頓至大約13,000道爾頓。實施方式16.實施方式1至15的任一項的聚合物，其中第二聚合物嵌段的分子量是第一聚合物嵌段的分子量的大約1至3倍。實施方式17.實施方式1、9、10、11或12至16中任一項的共聚物，其包含化學(xué)式I：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；Y4選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y0，Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q0是選自在生理pH下為親水性的殘基、可綴合或可官能化殘基的殘基或氫;Q1是在正常生理pH下為親水性的殘基;Q2是在正常生理pH下帶正電荷的殘基;Q3是在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基;m是約0至小于1.0(例如，0至大約0.49);n大于0至約1.0（例如，大約0.51至大約1.0);其中m+n=1p是大約0.2至大約0.5;q是大約0.2至大約0.5;其中p大體上與q相同；r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約5至大約25kDa;以及，w是大約5至大約50kDa。實施方式18.實施方式13的共聚物，其中Q1是在正常生理pH下帶正電荷的殘基;在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基;在正常生理pH下為中性的殘基;或在正常生理pH下為兩性離子性的殘基。19.實施方式1、9、10、11或12中任一項的共聚物，其包括化學(xué)式II：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-;其中，a是1-4;b是2-4;Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代;Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R51和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；各R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q1和Q2是在正常生理pH下帶正電荷的殘基；Q3是在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基；m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相同；r是0至大約0.6；其中p+q+r＝1v是大約5至大約25kDa；以及w是大約5至大約50kDa。實施方式20.實施方式1、9、10、11或12中任一項的共聚物，其包括化學(xué)式I：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-、(4C-10C)雜芳基和(6C-10C)芳基；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R7-R11和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q1和Q2是在正常生理pH下帶正電荷的殘基，包括但不限于氨基、烷基氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基和吡啶基；Q3是在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基，包括但不限于羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根和磷酸根；m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相同；r是0至大約0.6；其中p+q+r＝1v是大約5至大約25kDa；以及w是大約5至大約50kDa。實施方式21.實施方式1、9、10、11或12中任一項的共聚物，其包括化學(xué)式II：A0、A1、A2、A3和A4獨立地選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11獨立地選自氫、(1C-5C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基和苯基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基和苯基，其任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-5C)烷基和苯基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；Z是生理上可接受的抗衡離子，m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n=1p是大約0.2至大約0.5;q是大約0.2至大約0.5;其中:p大體上與q相同;r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約5至大約25kDa;以及w是大約5至大約50kDa。實施方式22.包含化學(xué)式I的共聚物：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-;其中，a是1-4;b是2-4;Y4選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)和芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟基團(tuán)取代;Y0、Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-0(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-;Y3選自共價鍵、-(1C-10C)烷基-、和-(6C-10C)芳基-，其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A1-A4四價碳原子;R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代;Q0是選自在生理pH下為親水性的殘基、可綴合或可官能化殘基的殘基或氫;Q1是在正常生理pH下為親水性的殘基;Q2是在正常生理pH下帶正電荷的殘基;Q3在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基;m是0至小于1.0(例如0至大約0.49);n大于0至大約1.0（例如大約0.51至大約1.0);其中m+n=1p是大約0.2至大約0.5;q是大約0.2至大約0.5;其中p大體上與q相同;r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約5至大約25kDa;以及w是大約5至大約50kDa。實施方式23.實施方式18的共聚物，其中Q1是在正常生理pH下帶正電荷的殘基;在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基;在正常生理pH下為中性的殘基;或在正常生理pH下為兩性離子性的殘基。實施方式24.包括化學(xué)式II的共聚物：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-，其中：a是1-4，b是2-4，Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、C(O)NR6(1C-10C)和芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R51和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；各R1、R2、R3、R4、R5和R6獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q1和Q2是在正常生理pH下帶正電荷的殘基；Q3是在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基；m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相等；r是0至大約0.6；其中p+q+r＝1v是大約5至大約25kDa；以及，w是大約5至大約50kDa。實施方式25.包括化學(xué)式II的共聚物：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基、-C(O)NR6(1C-10C)和芳基，其任何一個任選地可用一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-、-C(O)NR6(2C-10C)烷基；Y3選自共價鍵、(1C-10C)烷基和(6C-10C)芳基；其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R7-R11和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7.R8、R9、R10和R11獨立地選自氫、-CN、烷基、炔基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Q1和Q2是在正常生理pH下帶正電荷的殘基，包括但不限于氨基、烷基氨基、銨、烷基銨、胍、咪唑基和吡啶基；Q3是在正常生理pH下帶負(fù)電荷但在更低的pH下經(jīng)歷質(zhì)子化的殘基，包括但不限于羧基、磺酰胺、硼酸根、膦酸根和磷酸根；m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相同;r是0至大約0.6;其中p+q+r=1v是大約5至大約25kDa;以及，w是大約5至大約50kDa。實施方式26.實施方式17至19或21至24中任一項的共聚物，其中R2-A1-Y1-Q1是甲基丙烯酸C1-6二烷基氨基(C1-6)烷基酯，甲基丙烯酸C1-6烷基氨基C1-6烷基酯，丙烯酸氨基C1-6烷基酯、乙基丙烯酸[ethacrylate]C1-6二烷基氨基(C1-6)烷基酯、乙基丙烯酸C1-6烷基氨基C1-6烷基酯、乙基丙烯酸氨基C1-6烷基酯、丙烯酸C1-6二烷基氨基(C1-6)烷基酯、丙烯酸C1-6烷基氨基(C1-6)烷基酯或丙烯酸氨基(C1-6)烷基酯的殘基。實施方式27.實施方式17至19、21至24或26中任一項的共聚物，其中R3-A2-Y2-Q2是甲基丙烯酸C1-6二烷基氨基(C1-6)烷基酯、甲基丙烯酸C1-6烷基氨基(C1-6)烷基酯、丙烯酸氨基(C1-6)烷基酯、乙基丙烯酸C1-6二烷基氨基（C1-6）烷基酯、乙基丙烯酸C1-6烷基氨基（C1-6）烷基酯、乙基丙烯酸氨基（C1-6）烷基酯、丙烯酸C1-6二烷基氨基（C1-6)烷基酯、丙烯酸C1-6烷基氨基(C1-6)烷基酯或丙烯酸氨基（C1-6)烷基酯的殘基。實施方式28.實施方式17至19、21至24或26至27中任一項的共聚物，其中R4-A3-Y3-Q3是C1-6烷基丙烯酸的殘基。實施方式29.實施方式17至19、21至24或26至28中任一項的共聚物，其中R5-A4-Y4-Q4是丙烯酸C1-6烷基酯、甲基丙烯酸C1-C6烷基酯或乙基丙烯酸C1-C6烷基酯的殘基。實施方式30.包括化學(xué)式III的共聚物：A0、A1、A2、A3和A4選自-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-和-O(C)bO-；其中，a是1-4；b是2-4；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7.R8、R9、R10和R11獨立地選自氫、(1C-5C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基和苯基，其中任意個可任選地被一個或多個氟原子取代；Y0和Y4獨立地選自氫、(1C-10C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、O-(1C-10C)烷基、-C(O)O(1C-10C)烷基和苯基，其中任意個任選地被一個或多個氟基取代；Y1和Y2獨立地選自共價鍵、(1C-10C)烷基-、-C(O)O(2C-10C)烷基-、-OC(O)(1C-10C)烷基-、-O(2C-10C)烷基-和-S(2C-10C)烷基-；Y3選自共價鍵、(1C-5C)烷基和苯基；其中其中用適當(dāng)數(shù)目的氫原子完成未完全被R1-R5和Y0-Y4取代的A0-A4四價碳原子；Z是生理上可接受的抗衡離子，m是0至大約0.49；n是大約0.51至大約1.0；其中m+n＝1p是大約0.2至大約0.5；q是大約0.2至大約0.5；其中:p大體上與q相同；r是0至大約0.6；其中p+q+r＝1v是大約5至大約25kDa；以及w是大約5至大約50kDa。實施方式31.實施方式17至30中任一項的共聚物，其中v:w的比率為大約1:1至大約1:3。實施方式32.實施方式1至31中任一項的共聚物，其中還包含治療劑。實施方式33.實施方式32的共聚物，其中所述治療劑與所述共聚物締合。實施方式34.實施方式33的共聚物，其中所述治療劑是siRNA。實施方式35.實施方式33的共聚物，其中所述治療劑是多肽。實施方式36.實施方式34或35中任一項的共聚物，其中所述治療劑共價地連接至所述共聚物。實施方式37.實施方式34或35中任一項的共聚物，其中所述治療劑通過離子相互作用與所述共聚物締合。實施方式38.包含多種實施方式1至37中任一項的共聚物的組合物。實施方式39.實施方式38的組合物，其中所述多種共聚物具有大約1.2的多分散性指數(shù)（PDI）。