一種油腸中肝素鈉的提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及肝素鈉的提取方法，具體涉及一種油腸中肝素鈉的提取工藝。一種油腸中肝素鈉的提取工藝，將刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，對腸粘膜進(jìn)行水解后吸附，將吸附后的樹脂脫附，收集脫附液進(jìn)行醇沉、脫水后置于真空干燥箱中烘干即得純品肝素鈉。優(yōu)點(diǎn)是采用本發(fā)明工藝從油腸中制得的粗品肝素鈉與其他同類產(chǎn)品相比，具有效價高、雜質(zhì)少、安全性好等特點(diǎn)；所述的純品肝素鈉效價在100USPU/mg以上，提取效率可達(dá)1600-1700根小腸產(chǎn)1億效價；本工藝具有產(chǎn)率高、制備工藝簡單且對設(shè)備和材料損害污染小的特點(diǎn)，能夠滿足其在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中應(yīng)用的需求，具有重要的市場應(yīng)用前景。
【專利說明】一種油腸中肝素鈉的提取工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及肝素鈉的提取方法，具體涉及一種油腸中肝素鈉的提取工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉存在于動物的心、肝、脾、肺、胸腺、肌肉、血管等，但主要來源于動物富含肥大細(xì)胞的組織，如肝、肺、內(nèi)腸等，以O(shè)-連接形式與核心蛋白(core protein, CP)形成肝素蛋白聚糖(heparin proteoglycan, Hep-PG)。肝素可以和百余種蛋白如LDL、VLDL、LPL、S0D、AT m、IgG等相互作用，呈現(xiàn)出降血脂、抗動脈粥樣硬化、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、抗單純孢疹病毒、抗凝血等生物活性。肝素于1920年就開始其大規(guī)模制備研究，并于1935年應(yīng)用于臨床，是目前世界上產(chǎn)量和銷售量最大的來自天然的糖類藥物，目前還沒有任何一種藥物可以替代它，且尚不能人工合成。
[0003]我國是肝素鈉生產(chǎn)和腸衣加工大國，國內(nèi)致力于從腸粘膜中提取肝素的廠家主要用鹽解法和酶解法，隨著肝素廠家的規(guī)模不斷擴(kuò)大和生產(chǎn)效率的逐漸提高，國內(nèi)屠宰場的小腸顯示出供不應(yīng)求的趨勢，很多肝素鈉生產(chǎn)廠家需要進(jìn)口小腸原料，但是國內(nèi)屠宰場提供的小腸人工處理過，幾乎不含油脂，而從國外進(jìn)口的小腸，由于屠宰場沒有進(jìn)行有效處理，小腸外面含有大量的油脂，業(yè)界稱為“油腸”，這種油腸如果用相同的生產(chǎn)工藝，其產(chǎn)率只能達(dá)到國產(chǎn)小腸的80%，并且損害設(shè)備、污染樹脂。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述發(fā)明問題，本發(fā)明提出一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其產(chǎn)率高、效價高、成本低并且減少設(shè)備損害和樹脂污染。
[0005]為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明提出了以下技術(shù)方案:
一種油腸中肝素鈉的提取工藝，將刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，對腸粘膜進(jìn)行水解后吸附，將吸附后的樹脂脫附，收集脫附液進(jìn)行醇沉、脫水后置于真空干燥箱中烘干即得純品肝素鈉；具體工藝步驟如下:
(1)油腸粘膜的水解:將100份刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，加入帶有攪拌裝置、溫度和PH顯示、進(jìn)出料裝置以及觀察器的反應(yīng)釜中，加肝素鈉專用NaCL4-7份，調(diào)堿度至pH為8.0-9.0，加酶制劑0.001-0.005份，升溫至40-50 V，保溫1-2 h后調(diào)pH至9.5-10，升溫至55-65 V，保溫1_2 h，升溫至95 V，離心，將水解液泵入吸附罐中吸附；
(2)吸附:在帶有攪拌裝置、溫度顯示、進(jìn)出料裝置的反應(yīng)釜中加入100份由(I)得的水解液，加入羅門哈斯AMBERLITE FPA 98 CL樹脂2_4份，調(diào)至溫度65-70 °C，pH為
7.5-8.0，攪拌吸附7-10 h，將樹脂濾出，清水洗凈；
(3)脫附:將步驟(2)回收的樹脂，用60-65°C的清水沖洗1-2遍，然后用60-65 °C，pH為8.5-9.0的0.4-0.7 mol/L的NaCL水溶液浸泡0.5-1 h后，排凈浸泡液，加入質(zhì)量為
0.8-1.3倍樹脂質(zhì)量的2.5-4 mol/L的NaCL溶液，55- 60 °C攪拌2-4 h，過濾收集脫附液；再添加質(zhì)量為1.0-1.4倍樹脂質(zhì)量的2.5-4 mol/L的NaCL溶液，55-60 °C攪拌1_3 h，過濾收集脫附液；用質(zhì)量為1.1-1.4倍樹脂質(zhì)量的3.0-4.0 mol/L的NaCL溶液攪拌清洗后收集洗液，用于下批樹脂的脫附；
(4)醇沉:將步驟(3)中第一次和第二次的脫附液合并，加入酒精度在80-95°的乙醇攪拌，使洗脫液的乙醇終濃度到40-50°，攪拌30-70 min后，靜置8-10 h，將酒沉的上清液回收，并收集肝素鈉沉淀；用酒精度在90-95°的乙醇脫水2-3次，收集脫水后肝素鈉； (5)干燥:將步驟(4)中脫水后的肝素鈉置于真空干燥箱，60-701:下干燥，10-12 h，使含水量在5 %以下，得到純品肝素鈉。
[0006]對于步驟(1)中酶制劑為脂肪酶，溫度在40-50 °C，pH為8.0-9.0。
[0007]對于步驟(1)中分解保溫的pH調(diào)至9.5-10，溫度調(diào)至55-65 V。
[0008]對于步驟(2)中控制溫度在65-70 °C，pH在7.5-8.0之間，吸附7-10 h。
[0009]對于步驟(3)中首先用60-65 °C的清水和60-65 °C、pH為8.5-9.0的0.4-0.7mol/L的NaCL溶液沖洗浸泡。
[0010]對于步驟(3)中脫附液的溫度是55-60 °C，第一次脫附液的質(zhì)量為0.8-1.3倍樹脂質(zhì)量，第二次脫附液的質(zhì)量為1.0-1.4倍樹脂質(zhì)量，第三次脫附液的質(zhì)量為1.1-1.4倍樹
脂質(zhì)量。
[0011]本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)為:
I)本發(fā)明采取鹽解和酶解解結(jié)合的方法，先用脂肪酶將油腸中的油脂分解，鹽解部分采取高堿分解，強(qiáng)堿性條件下將脂肪酶沒有完全分解的油脂分解，利于肝素的釋放，而油脂的分解消耗了一部分堿，這樣就既保證了油脂分解利于肝素的釋放游離，又不會因著堿性過高而使肝素降解，提高了產(chǎn)量。
[0012]2)本發(fā)明在吸附工藝中采取弱堿性高溫吸附，油脂會包裹樹脂，在樹脂的表面形成一層油膜，使得樹脂的交換能力大大降低，而本發(fā)明的吸附方法在弱堿性溫度在65-70°〇下，樹脂表面不能形成油膜，樹脂的吸附能力得以恢復(fù)，而此堿性和溫度下對樹脂造不成傷害。
[0013]3)本發(fā)明在脫附工藝中首先采取鹽堿混合除去油及蛋白等雜質(zhì)之后再進(jìn)行脫附，這樣既提高了肝素的純度，又保護(hù)了樹脂不被污染。
[0014]本發(fā)明的有益效果為:
1)采用本發(fā)明工藝從油腸中制得的粗品肝素鈉與其他同類產(chǎn)品相比，具有效價高、雜質(zhì)少、安全性好等特點(diǎn)；
2)采用本發(fā)明工藝，所述的純品肝素鈉效價在100USPU/ mg以上，提取效率可達(dá)1600-1700根小腸產(chǎn)I億效價；
3)本發(fā)明從油腸中提取高純度高效價的肝素鈉的工藝方法具有產(chǎn)率高、制備工藝簡單且對設(shè)備和材料損害污染小的特點(diǎn)，能夠滿足其在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中應(yīng)用的需求，具有重要的市場應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件中所述的條件進(jìn)行。除非另行定義，所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中，所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0016]實(shí)施實(shí)例I
(I)將100份刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，加入帶有攪拌裝置、溫度和pH顯示、進(jìn)出料裝置以及觀察器的反應(yīng)釜中，加肝素鈉專用NaCL 7份，調(diào)堿度至pH為
8.5，加酶制劑0.004份，升溫至40 °C，保溫2 h后調(diào)pH至9.5，升溫至55 °C，保溫2 h，升溫至95 °C，離心，將水解液泵入吸附罐中吸附。
[0017](2)在帶有攪拌裝置、溫度顯示、進(jìn)出料裝置的反應(yīng)釜中加入100份由(I)得的水解液，加入羅門哈斯AMBERLITE FPA 98 CL樹脂4份，調(diào)至溫度為70 °C，pH為7.5-8.0，攪拌吸附7 h，將樹脂濾出，清水洗凈。
[0018](3)將步驟(2)回收的樹脂，用60 °C的清水沖洗2遍，然后用60 °C，pH為8.5的
0.4 mol/L的NaCL水溶液浸泡I h后，排凈浸泡液，加入質(zhì)量為1.3倍樹脂質(zhì)量的4 mol/L的NaCL溶液，60 °C攪拌4 h，過濾收集脫附液；再添加質(zhì)量為1.3倍樹脂質(zhì)量的4 mol/L的NaCL溶液，60 °C攪拌3 h，過濾收集脫附液；用質(zhì)量為1.4倍樹脂質(zhì)量的4.0 mol/L的NaCL溶液攪拌清洗后收集洗液，用于下批樹脂的脫附。
[0019](4)將步驟(3)中第一次和第二次的脫附液合并，加入酒精度在80°的乙醇攪拌，使洗脫液的乙醇終濃度到40°，攪拌30-70 min后，靜置8 h，將酒沉的上清液回收，并收集肝素鈉沉淀；用酒精度在95°的乙醇脫水3次，收集脫水后肝素鈉。
[0020](5)將步驟(4)中`脫水后的肝素鈉置于真空干燥箱，70 1:下干燥，10-12 h，使含水量在5 %以下，得到純品肝素鈉其效價為104 USPU/mg。
[0021]實(shí)施實(shí)例2
(I)將100份刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，加入帶有攪拌裝置、溫度和pH顯示、進(jìn)出料裝置以及觀察器的反應(yīng)釜中，加肝素鈉專用NaCL 7份，調(diào)堿度至pH為
8.5，加酶制劑0.004份，升溫至40 1:，保溫1.5 h后調(diào)pH至10，升溫至60 °C，保溫2 h，升溫至95 °C，離心，將水解液泵入吸附罐中吸附。
[0022](2)在帶有攪拌裝置、溫度顯示、進(jìn)出料裝置的反應(yīng)釜中加入100份由(I)得的水解液，加入羅門哈斯AMBERLITE FPA 98 CL樹脂3份，調(diào)至溫度70 °C，pH為8.0，攪拌吸附10 h，將樹脂濾出，清水洗凈。
[0023](3)將步驟(2)回收的樹脂，用65 °C的清水沖洗1-2遍，然后用65 °C，pH為9.0的0.7 mol/L的NaCL水溶液浸泡I h后，排凈浸泡液，加入質(zhì)量為0.8倍樹脂質(zhì)量的4 mol/L的NaCL溶液，55 °C攪拌4 h，過濾收集脫附液；再添加質(zhì)量為1.0倍樹脂質(zhì)量的4 mol/L的NaCL溶液，55 °C攪拌3 h，過濾收集脫附液；用質(zhì)量為1.1倍樹脂質(zhì)量的4.0 mol/L的NaCL溶液攪拌清洗后收集洗液，用于下批樹脂的脫附。
[0024](4)將步驟(3)中第一次和第二次的脫附液合并，加入酒精度在85°的乙醇攪拌，使洗脫液的乙醇終濃度到45°，攪拌30 min后，靜置10 h，將酒沉的上清液回收，并收集肝素鈉沉淀；用酒精度在95°的乙醇脫水2次，收集脫水后肝素鈉。
[0025](5)將步驟(4)中脫水后的肝素鈉置于真空干燥箱，65 1:下干燥，10 h，使含水量在5 %以下，得到純品肝素鈉其效價為114 USPU/mg。
【權(quán)利要求】
1.一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其特征在于將刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，對腸粘膜進(jìn)行水解后吸附，將吸附后的樹脂脫附，收集脫附液進(jìn)行醇沉、脫水后置于真空干燥箱中烘干即得純品肝素鈉；具體工藝步驟如下: (1)油腸粘膜的水解:將100份刮制的帶有腸皮和油脂的腸粘膜用勻漿機(jī)勻碎后，加入帶有攪拌裝置、溫度和PH顯示、進(jìn)出料裝置以及觀察器的反應(yīng)釜中，加肝素鈉專用NaCL4-7份，調(diào)堿度至pH為8.0-9.0，加酶制劑0.001-0.005份，升溫至40-50 V，保溫1-2 h后調(diào)pH至9.5-10，升溫至55-65 V，保溫1_2 h，升溫至95 V，離心，將水解液泵入吸附罐中吸附； (2)吸附:在帶有攪拌裝置、溫度顯示、進(jìn)出料裝置的反應(yīng)釜中加入100份由(I)得的水解液，加入羅門哈斯AMBERLITE FPA 98 CL樹脂2_4份，調(diào)至溫度65-70 °C，pH為7.5-8.0，攪拌吸附7-10 h，將樹脂濾出，清水洗凈； (3)脫附:將步驟(2)回收的樹脂，用60-65°C的清水沖洗1-2遍，然后用60-65 °C，pH為8.5-9.0的0.4-0.7 mo I/L的NaCL水溶液浸泡0.5-1 h后，排凈浸泡液，加入質(zhì)量為0.8-1.3倍樹脂質(zhì)量的2.5-4 mo I/L的NaCL溶液，55- 60 °C攪拌2-4 h，過濾收集脫附液；再添加質(zhì)量為1.0-1.4倍樹脂質(zhì)量的2.5-4 mol/L的NaCL溶液，55-60 °C攪拌1_3 h，過濾收集脫附液；用質(zhì)量為1.1-1.4倍樹脂質(zhì)量的3.0-4.0 mol/L的NaCL溶液攪拌清洗后收集洗液，用于下批樹脂的脫附； (4)醇沉:將步驟(3)中第一次和第二次的脫附液合并，加入酒精度在80-95°的乙醇攪拌，使洗脫液的乙醇終濃度到40-50°，攪拌30-70 min后，靜置8-10 h，將酒沉的上清液回收，并收集肝素鈉沉淀；用酒精度在90-95°的乙醇脫水2-3次，收集脫水后肝素鈉； (5)干燥:將步驟(4)中脫水后的肝素鈉置于真空干燥箱，60-701:下干燥，10-12 h，使含水量在5 %以下，得到純品肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其特征在于步驟(1)中酶制劑為脂肪酶，溫度在40-50 °C，pH為8.0-9.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其特征在于步驟(1)中分解保溫的pH調(diào)至9.5-10，溫度調(diào)至55-65 V。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其特征在于步驟(2)中控制溫度在65-70 °C，pH在7.5-8.0之間，吸附7-10 h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其特征在于步驟(3)中首先用60-65 0C的清水和60-65 °C、pH為8.5-9.0的0.4-0.7 mol/L的NaCL溶液沖洗浸泡。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種油腸中肝素鈉的提取工藝，其特征在于步驟(3)中脫附液的溫度是55-60 °C，第一次脫附液的質(zhì)量為0.8-1.3倍樹脂質(zhì)量，第二次脫附液的質(zhì)量為1.0-1.4倍樹脂質(zhì)量，第三次脫附液的質(zhì)量為1.1-1.4倍樹脂質(zhì)量。
【文檔編號】C08B37/10GK103554306SQ201310584405
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】孫學(xué)超, 許春龍, 劉亞男, 張玉根, 鮑程, 卞麗美, 韓國棟 申請人:南通天龍畜產(chǎn)品有限公司