提高硫酸軟骨素收率的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種提高硫酸軟骨素收率的制備方法，該產(chǎn)品主要經(jīng)過(guò)酶解，除蛋白、沉淀干燥等工序制得。該方法主要解決目前該類產(chǎn)品生產(chǎn)工藝流程復(fù)雜、堿酸或鹽用量較大、制備周期長(zhǎng)、收率低等問(wèn)題；該方法僅需一步酶解即可把硫酸軟骨素重軟骨中提取出來(lái)，不需要堿解或用鹽浸泡，制備后的產(chǎn)品色澤潔白、質(zhì)地疏松、收率可高達(dá)43％及以上，且純度較高，符合國(guó)內(nèi)外口服標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)工序簡(jiǎn)單，周期較短，反應(yīng)時(shí)間僅需3-8小時(shí)，堿用量比稀堿酶解法節(jié)約80％以上，同時(shí)減少了下游提純的難度，減輕對(duì)環(huán)境的污染，有利于環(huán)保。
【專利說(shuō)明】提高硫酸軟骨素收率的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生化制藥領(lǐng)域，特別是直接從動(dòng)物軟骨中提取的對(duì)心腦血管病等有良好的效果的硫酸軟骨素鈉的生產(chǎn)工藝的改進(jìn)。
【背景技術(shù)】
[0002]硫酸軟骨素鈉，英文名Chondroitin sulfate sodium,是動(dòng)物軟骨中提取的酸性粘多糖，多存在于動(dòng)物的軟骨、喉骨、鼻骨(41%)、牛、馬中膈和氣管中，其分子結(jié)構(gòu)為β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過(guò)β I — 3糖苷鍵形成的重復(fù)二糖單位所組成的多糖鏈。
[0003]硫酸軟骨素鈉主要用于治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕疾病的藥物，還具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治療頭痛、偏頭痛、冠心病、心絞痛等癥狀。在國(guó)外，對(duì)硫酸軟骨素鈉藥理的研究已經(jīng)達(dá)到分子水平。
[0004]目前國(guó)內(nèi)提取硫酸軟骨素鈉的方法主要有三種:鹽解法、堿解法和酶解法。主要采用的分離純化技術(shù)有:乙醇沉淀法、離子交換色譜法、纖維素分離法、季銨鹽配合法、吸附法、區(qū)帶電泳分離法等。在以上的集中提取方法中，收率雖然可以達(dá)到很高的水平，但生產(chǎn)方法都存在很大問(wèn)題，如鹽解法工藝中存在除酸性蛋白調(diào)節(jié)PH值1-2在產(chǎn)品量大時(shí)耗時(shí)很長(zhǎng)，硫酸軟骨素中的氨基易被解離下來(lái)，從而影響了硫酸軟骨素的收率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是:提供一種提高硫酸軟骨素收率的制備方法，此方法主要從節(jié)能、節(jié)約試劑、縮短生產(chǎn)時(shí)間、簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝等角度出發(fā)，提供一種提高硫酸軟骨素收率的制備方法，該方法利于工業(yè)化生產(chǎn)。`
[0006]由于硫酸軟骨素和軟骨中的蛋白質(zhì)是以糖肽共價(jià)鍵結(jié)合在一起的，在堿性條件下，以胰蛋白酶為催化劑，糖胺聚糖可以從軟骨組織中的膠原蛋白中分離出來(lái)。根據(jù)這個(gè)原理，本工藝直接白胰蛋白酶加入，調(diào)節(jié)反應(yīng)的ΡΗ，溫度條件，直接生產(chǎn)硫酸軟骨素。這樣以來(lái)，縮短了工藝流程，反應(yīng)時(shí)間只需要4-8小時(shí)，用堿量比稀堿酶解法節(jié)省80%以上，收率不但沒(méi)有下降，反而比原來(lái)要高3-5個(gè)百分點(diǎn)。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該制備方法包括下列步驟:
[0008]1、將潔白干凈的動(dòng)物軟骨放入反應(yīng)罐內(nèi)，加入適量的水浸泡，并加入軟骨重量的
0.1-1.6%的胰蛋白酶，調(diào)節(jié)PH在8.5-9.5之間，控制溫度在40_55°C之間，攪拌2_9小時(shí)；
[0009]2、當(dāng)動(dòng)物軟骨反應(yīng)完全后，用鹽酸調(diào)節(jié)酶解液使其PH在5.5-7.5之間，加熱至65-80°C，保溫 10-40 分鐘；
[0010]3、待酶解液冷卻后，過(guò)濾或離心除渣，過(guò)濾后得較清澈的濾液酶解液，加入酶解液重量0.2-2.0%的氯化鈉，使PH在3.5-5.5之間，攪拌20-50分鐘，過(guò)濾或離心除渣。
[0011]4、將上步所得酶解液加入其體積2-4倍的濃度為90%的乙醇，使乙醇濃度達(dá)到50-80%，沉淀；[0012]5、將上步沉淀物用濃度為95%的乙醇復(fù)沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸軟骨素成品。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為:本制備方法通過(guò)對(duì)目前工藝的改進(jìn)創(chuàng)新，采用進(jìn)一步酶解法生產(chǎn)硫酸軟骨素，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)，找到生產(chǎn)工藝的優(yōu)化生產(chǎn)工藝條件為:水解時(shí)間為6小時(shí)，水解溫度為48°C,胰蛋白酶用量為0.8%軟骨重，三種因素中對(duì)水解影響程度主要為水解溫度，其次為酶用量和水解時(shí)間。整個(gè)反應(yīng)過(guò)程PH值控制在8.5-9.5之間。此最佳組合可使硫酸軟骨素收率達(dá)到43%及以上。采用新工藝后，可簡(jiǎn)化生產(chǎn)流程，大大縮短生產(chǎn)時(shí)間，減少堿用量，同時(shí)減少下游提純的難度，減輕對(duì)環(huán)境的污染。
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1
[0015](I)將潔白干凈的動(dòng)物軟骨IOOkg放入反應(yīng)罐內(nèi)，加入適量的水浸泡，并加入軟骨重量的0.8kg的胰蛋白酶，調(diào)節(jié)PH在9.0時(shí)，控制溫度在48°C，攪拌6小時(shí)；
[0016](2)當(dāng)動(dòng)物軟骨反應(yīng)完全后，用鹽酸調(diào)節(jié)酶解液使其PH在6，加熱至75，保溫30分鐘；
[0017](3)待酶解液冷卻后，過(guò)濾或離心除渣，過(guò)濾后得較清澈的濾液酶解液，加入酶解液重量1.5kg的氯化鈉，使PH在4，攪拌40分鐘，過(guò)濾或離心除渣。
[0018](4)將上步所得酶解液加入濃度為90%的乙醇300L，使乙醇濃度達(dá)到65%，沉淀；
[0019](5)將上步沉淀物用`濃度為95%的乙醇復(fù)沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸軟骨素成品42.1kg,收率為42.1 %。
【權(quán)利要求】
1.一種提高硫酸軟骨素收率的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將潔白干凈的動(dòng)物軟骨放入反應(yīng)罐內(nèi)，加入適量的水浸泡，并加入軟骨重量的0.1% -1.6%的胰蛋白酶，調(diào)節(jié)PH在8.5-9.5之間，控制溫度在40_55°C之間，攪拌2_9小時(shí)； (2)當(dāng)動(dòng)物軟骨反應(yīng)完全后，用鹽酸調(diào)節(jié)酶解液使其PH在5.5-7.5之間，加熱至65-80°C，保溫 10-40 分鐘； (3)待酶解液冷卻后，過(guò)濾或離心除渣，過(guò)濾后得較清澈的濾液酶解液，加入酶解液重量0.2% -2.0%的氯化鈉，使PH在3.5-5.5之間，攪拌20-50分鐘，過(guò)濾或離心除渣。 (4)將上步所得酶解液加入其體積2-4倍的濃度為90%的乙醇，使乙醇濃度達(dá)到50% -80%，沉淀； (5)將上步沉淀物用濃度為95%的乙醇復(fù)沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸軟骨素成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:(3)步中加入的酶解液重0.2% -2.0%的氯化鈉鹽析，以增強(qiáng)硫酸軟骨素的沉淀效果。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:最佳水解溫度為48°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:最佳水解時(shí)間為6h，最佳胰酶用量為0.8%倍軟骨重。
【文檔編號(hào)】C08B37/08GK103804517SQ201310616479
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2013年11月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月22日
【發(fā)明者】劉乃山, 陸玉梅, 遲培升, 夏襯來(lái) 申請(qǐng)人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司