一種用作皮膚填充材料的水凝膠及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用作皮膚填充材料的水凝膠及其制備方法。白蠟、硅樹脂、鹽水袋、硅凝膠等皮膚填充材料均存在對(duì)組織產(chǎn)生慢性炎癥、腫塊以及損傷組織的缺陷，生物相容性差，無法滿足修復(fù)要求。本發(fā)明向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，攪拌反應(yīng)，加入透明質(zhì)酸溶液，攪拌反應(yīng)，加入交聯(lián)劑溶液，攪拌反應(yīng)；恒溫水浴加熱制得水凝膠；類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白。本發(fā)明的水凝膠，采用自組裝和物理/化學(xué)交聯(lián)兩種方法制成，具有穩(wěn)定性良好、生物學(xué)效價(jià)高、可避免外科手術(shù)的創(chuàng)傷和減少病人的疼痛的優(yōu)點(diǎn)，從而真正實(shí)現(xiàn)皮膚填充的優(yōu)勢(shì)。
【專利說明】一種用作皮膚填充材料的水凝膠及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種水凝膠，具體涉及一種用作皮膚填充材料的水凝膠及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]水凝膠是一種高分子網(wǎng)絡(luò)體系，性質(zhì)柔軟，能保持一定的形狀，能吸收大量的水。人體面部美容整形主要有修正皺紋、改善面部輪廓、填平凹陷瘢痕或唇部、修復(fù)受傷的組織等，適合人體組織結(jié)構(gòu)，其要求水凝膠不吸收、不脫落、不碎裂，在彌散的環(huán)境下能很好地保持水分，有較好的粘度、彈性和柔軟度。當(dāng)水凝膠被移植到生物體后，由于組織損傷程度不同，很難滿足修復(fù)的效果；當(dāng)水凝膠注射到生物體后，如果水凝膠是環(huán)境敏感型的，比如溫度敏感型，在室溫下呈溶膠狀，當(dāng)溫度達(dá)到人體溫度后，水凝膠能形成凝膠，能維持形態(tài)且具有良好的生物相容性。因此，可注射式水凝膠作為組織填充材料，其研究、發(fā)展和應(yīng)用具有不可估量的市場(chǎng)前景。制備水凝膠常用的方法有化學(xué)交聯(lián)和物理交聯(lián)兩種。自組裝技術(shù)在生物材料領(lǐng)域逐漸成為研究的熱點(diǎn)，可以通過生物分子之間的特異性生物作用力，疏水之間的相互作用，氫鍵相互作用以及靜電相互作用由簡(jiǎn)單到復(fù)雜，無序到有序的自發(fā)過程。因此，采用類人膠原蛋白、殼聚糖和透明質(zhì)酸為原料，應(yīng)用自組裝和化學(xué)/物理交聯(lián)技術(shù)來制備水凝膠，成功應(yīng)用于組織修復(fù)材料。
[0003]水凝膠的發(fā)展歷經(jīng)了以下三個(gè)發(fā)展階段:第一代產(chǎn)品以白蠟注射、脂肪移植、硅樹月旨、塑料海綿等；第二代產(chǎn)品以凝膠植進(jìn)體為主，如鹽水袋、硅凝膠、假體等。以上兩類產(chǎn)品均存在對(duì)組織產(chǎn)生慢性炎癥、腫塊以及損傷組織的缺陷，而且凝膠與組織沒有良好的生物相容性，因此不能充分滿足 機(jī)體的要求。第三代產(chǎn)品可注射水凝膠作為一種優(yōu)良的填充材料也得到了一定程度的發(fā)展，雖然克服了組織損傷的缺點(diǎn)，但其亦不能做到完全滿足修復(fù)的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種用作皮膚填充材料的水凝膠及其制備方法，結(jié)合自組裝和物理/化學(xué)交聯(lián)兩種方法制備更具生物相容性、安全性更高的皮膚填充材料。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法，其特征在于:
由以下步驟實(shí)現(xiàn):
步驟一:稱取類人膠原蛋白溶于雙蒸水中，然后向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，令類人膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為(I~6):5，反應(yīng)溫度控制為-4~0°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5~Ih ;
步驟二:加入透明質(zhì)酸溶液，透明質(zhì)酸與殼聚糖的質(zhì)量比為(0.1~0.4):1，反應(yīng)溫度控制為20~30°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.2~0.5h ;
步驟三:加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與殼聚糖的質(zhì)量比是(6~8):1，反應(yīng)溫度控制為-4~O °C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5~Ih;
步驟四:將反應(yīng)液放于37°C恒溫水浴鍋中l(wèi)h，制得水凝膠。
[0006]步驟一中，類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白。
[0007]步驟一中，殼聚糖為脫乙酰度為90%以上的殼聚糖，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40mg/mL。
[0008]步驟二中，透明質(zhì)酸為醫(yī)用級(jí)別的透明質(zhì)酸，分子量為lOOOOOODa，透明質(zhì)酸溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%。
[0009]步驟三中，交聯(lián)劑為甘油磷酸納、α-甘油磷酸鈉或α，β-甘油磷酸納，交聯(lián)劑溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%。
[0010]所述的一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法制備的水凝膠。
[0011]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明所涉及的一種用作皮膚填充材料的水凝膠，是將殼聚糖、透明質(zhì)酸和類人膠原蛋白結(jié)合起來制成的皮膚填充材料，以基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白、殼聚糖和透明質(zhì)酸為原料，采用自組裝和物理/化學(xué)交聯(lián)兩種方法制成，具有穩(wěn)定性良好、生物學(xué)效價(jià)高、可避免外科手術(shù)的創(chuàng)傷和減少病人的疼痛的優(yōu)點(diǎn)，從而真正實(shí)現(xiàn)皮膚填充的優(yōu)勢(shì)，而且水凝膠隨溫度變化實(shí)現(xiàn)溶膠-凝膠的轉(zhuǎn)變過程，最終達(dá)到增強(qiáng)皮膚彈性和美容的目的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1為水凝膠的紅外光譜圖。
[0013]圖中，橫軸為波數(shù)(cnT1)，縱軸為透過率(％)，1號(hào)線為β_甘油磷酸納曲線，2號(hào)線為透明質(zhì)酸曲線，3號(hào)線為水凝膠曲線，4號(hào)線為類人膠原蛋白曲線，5號(hào)線為殼聚糖曲線。
[0014]圖2為水凝膠的X射線光電子能譜圖。
[0015]圖中，橫軸為結(jié)合能(eV)，縱軸為計(jì)數(shù)(s)，l號(hào)線為甘油磷酸納曲線，2號(hào)線為水凝膠曲線，3號(hào)線為透明質(zhì)酸曲線，4號(hào)線為殼聚糖曲線，5號(hào)線為類人膠原蛋白曲線。
[0016]圖3為水凝膠的樣品圖。
[0017]圖中，A、B、C為自組裝纖維的照片圖，D為水凝膠的溶膠圖，E為水凝膠的呈膠圖，F(xiàn)為水凝膠的照片圖。
[0018]圖4為自組裝纖維和水凝膠的掃描電鏡圖。
[0019]圖中，I號(hào)為水凝膠的掃描電鏡圖(放大250倍)，2號(hào)為水凝膠的掃描電鏡圖(放大100倍)，3號(hào)為混合纖維的掃描電鏡圖(放大250倍)，4號(hào)為混合纖維的掃描電鏡圖(放大100 倍)。
[0020]圖5為水凝膠注射于小鼠皮下圖。
[0021]圖中，A為注射于小鼠皮下一周后的圖，B為注射于小鼠皮下2周后的圖，C為注射于小鼠皮下6周后的圖，D為注射于小鼠皮下10分鐘后的圖，E為注射于小鼠皮下10分鐘后取出的水凝膠的圖，F(xiàn)為水凝膠從離心管中取出的圖，G為水凝膠在離心管中成膠的圖。
[0022]圖6為水凝膠注射于小鼠皮下后的透射電鏡圖。
[0023]圖中，A (第一周)、B (第二周)、C (第六周)為對(duì)照組(注射生理鹽水)的透射電鏡圖，實(shí)施例1 (D、G、J、M)，實(shí)施例2 (E、H、K、N)，實(shí)施例3 (F、1、L、0)為水凝膠的透射電鏡圖。注射于小鼠皮下后分別在第1、2、6、12周取樣，D、E、F為第一周，G、H、I為第二周，J、K、L為第三周，Μ、Ν、0為第四周。圖中I代表膠原纖維，2代表巨噬細(xì)胞，3代表中性粒細(xì)胞，4代表成纖維細(xì)胞，5代表纖維細(xì)胞，6代表脂滴，7代表細(xì)胞體，8代表炎癥細(xì)胞。
[0024]圖7為水凝膠注射于小鼠皮下后的免疫組化圖。
[0025]圖中，A (第一周)、B (第二周)、C (第六周)、D (第十二周)為對(duì)照組(沒有加⑶68單克隆抗體染色)的免疫組化圖，實(shí)施例1 (E、F、G、H)、實(shí)施例2 (1、J、Q、L)、實(shí)施例3 (M、Ν、0、Ρ)為水凝膠(加CD68單克隆抗體染色)的免疫組化圖。注射于小鼠皮下后分別在第1、
2、6、12周取樣，E、1、M為第一周，F(xiàn)、J、N為第二周，G、Q、0為第六周，H、L、P為第十二周。T代表組織，G代表水凝膠，g-t代表組織與水凝膠界面，F(xiàn)C代表脂肪細(xì)胞，PC代表色素細(xì)胞。
[0026]圖8為水凝膠注射于小鼠皮下后的H&E染色圖。
[0027]圖中，實(shí)施例1 (A、E、1、J)、實(shí)施例2 (B、F、G、K)、實(shí)施例3 (C、D、H、L)為水凝膠的H&E染色圖。注射于小鼠皮下后分別在第1、2、6、12周取樣，A、B、C為第一周，E、F、D為第二周，1、G、H為第六周，J、K、L為第十二周。
[0028]圖9為本發(fā)明反應(yīng)原理過程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0030]本發(fā)明所涉及的一種用作皮膚填充材料的水凝膠，以基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白、殼聚糖和透明質(zhì)酸為原料，采用自組裝技術(shù)形成自組裝纖維，然后通過交聯(lián)劑進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)，再在-4°C攪拌下進(jìn)行物理交聯(lián)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液放入37°C下靜態(tài)放置10-30分鐘， 制備得到水凝膠。
[0031]原料中的類人膠原蛋白采用的是由基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白，與來自動(dòng)物源提取的膠原蛋白相比，其具有水溶性好、低排異反應(yīng)、無病毒隱患，結(jié)構(gòu)與人體自身膠原蛋白極其接近的顯著優(yōu)點(diǎn)。另外，動(dòng)物源膠原蛋白也可作為原料制造水凝膠。殼聚糖本身具有良好的生物相容性和可降解性，可應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域。透明質(zhì)酸可直接通過交聯(lián)劑制備水凝膠用于注射填充，其具有良好的生物相容性，但是其降解比較快。
[0032]并且，類人膠原蛋白、殼聚糖和透明質(zhì)酸本身具有良好的生物相容性和可降解性，其本身沒有溫度敏感的性質(zhì)，通過自組裝技術(shù)和化學(xué)/物理交聯(lián)制備得到的水凝膠具有溫度敏感性，在室溫下呈溶膠狀，即可以注射到要填充部位，當(dāng)水凝膠在人體溫度環(huán)境下自發(fā)形成凝膠，其穩(wěn)定性高，不吸收，不脫落，不碎裂，有較好的粘度，彈性和柔軟度，且有良好的生物相容性，適合用于組織填充。
[0033]具體制備方法如下:
步驟一:稱取類人膠原蛋白溶于雙蒸水中，然后向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，令類人膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為(I~6):5，反應(yīng)溫度控制為-4~0°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5~lh。
[0034]其中，類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白；殼聚糖為脫乙酰度為90%以上的殼聚糖，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40mg/mL。
[0035]步驟二:加入透明質(zhì)酸溶液，透明質(zhì)酸與殼聚糖的質(zhì)量比為(0.1~0.4):1，反應(yīng)溫度控制為20~30°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.2~0.5h。
[0036]其中，透明質(zhì)酸為醫(yī)用級(jí)別的透明質(zhì)酸，分子量為lOOOOOODa，透明質(zhì)酸溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%。
[0037]上述類人膠原蛋白、殼聚糖和透明質(zhì)酸三種聚合物混合后，其水體系在溶液中能夠自發(fā)的通過自組裝形成混合纖維，其驅(qū)動(dòng)力是多聚陽離子和多聚陰離子通過靜電吸附相互作用、氫鍵相互作用以及疏水相互作用，各共聚物的水體系單獨(dú)不具有熱敏凝膠化的性質(zhì)，同時(shí)本身在1_50°C范圍內(nèi)只能溶解于水中。
[0038]步驟三:加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與殼聚糖的質(zhì)量比是(6~8):1，反應(yīng)溫度控制為-4~O °C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5~Ih。
[0039]其中，交聯(lián)劑為甘油磷酸納、α-甘油磷酸鈉或α，甘油磷酸納，交聯(lián)劑溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%。
[0040]加入交聯(lián)劑進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)，在-4~O°C條件下攪拌進(jìn)行物理交聯(lián)(冰凍-解凍過程實(shí)現(xiàn))，即采用物理/化學(xué)結(jié)合交聯(lián)的方法進(jìn)行聯(lián)合反應(yīng)。反應(yīng)后的水體系具有溫度相應(yīng)性，即在體溫下可自發(fā)形成水凝膠。
[0041]步驟四:將反應(yīng)液放于37°C恒溫水浴鍋中l(wèi)h，制得水凝膠。
[0042]實(shí)施例1:
步驟一:稱取類人膠原蛋白溶于雙蒸水中，然后向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，令類人膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為1:5， 反應(yīng)溫度控制為-4°C，在攪拌條件下反應(yīng)
0.5h0
[0043]其中，類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白；殼聚糖為脫乙酰度為90%以上的殼聚糖，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40mg/mL。
[0044]步驟二:加入透明質(zhì)酸溶液，透明質(zhì)酸與殼聚糖的質(zhì)量比為0.1:1，反應(yīng)溫度控制為20°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.2h。
[0045]其中，透明質(zhì)酸為醫(yī)用級(jí)別的透明質(zhì)酸，分子量為lOOOOOODa，透明質(zhì)酸溶液的質(zhì)
量分?jǐn)?shù)為2%。
[0046]步驟三:加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與殼聚糖的質(zhì)量比是6:1，反應(yīng)溫度控制為_40°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5h。
[0047]其中，交聯(lián)劑為β -甘油磷酸納，交聯(lián)劑溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%。
[0048]步驟四:將反應(yīng)液放于37°C恒溫水浴鍋中l(wèi)h，制得水凝膠。
[0049]實(shí)施例2:
步驟一:稱取類人膠原蛋白溶于雙蒸水中，然后向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，令類人膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為3:5，反應(yīng)溫度控制為-2°C，在攪拌條件下反應(yīng)
0.5h0
[0050]其中，類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白；殼聚糖為脫乙酰度為90%以上的殼聚糖，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40mg/mL。
[0051]步驟二:加入透明質(zhì)酸溶液，透明質(zhì)酸與殼聚糖的質(zhì)量比為0.2:1，反應(yīng)溫度控制為25 °C，在攪拌條件下反應(yīng)0.3h。
[0052]其中，透明質(zhì)酸為醫(yī)用級(jí)別的透明質(zhì)酸，分子量為lOOOOOODa，透明質(zhì)酸溶液的質(zhì)
量分?jǐn)?shù)為2%。
[0053]步驟三:加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與殼聚糖的質(zhì)量比是7:1，反應(yīng)溫度控制為-2 °C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5h。[0054]其中，交聯(lián)劑為α -甘油磷酸鈉，交聯(lián)劑溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%。
[0055]步驟四:將反應(yīng)液放于37°C恒溫水浴鍋中l(wèi)h，制得水凝膠。
[0056]實(shí)施例三:
步驟一:稱取類人膠原蛋白溶于雙蒸水中，然后向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，令類人膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為6:5，反應(yīng)溫度控制為0°C，在攪拌條件下反應(yīng)lh。
[0057]其中，類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白；殼聚糖為脫乙酰度為90%以上的殼聚糖，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40mg/mL。
[0058]步驟二:加入透明質(zhì)酸溶液，透明質(zhì)酸與殼聚糖的質(zhì)量比為0.4:1，反應(yīng)溫度控制為30°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5h。
[0059]其中，透明質(zhì)酸為醫(yī)用級(jí)別的透明質(zhì)酸，分子量為lOOOOOODa，透明質(zhì)酸溶液的質(zhì)
量分?jǐn)?shù)為2%。
[0060]步驟三:加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與殼聚糖的質(zhì)量比是8:1，反應(yīng)溫度控制為0°C，在攪拌條件下反應(yīng)lh。
[0061]其中，交聯(lián)劑為α，β -甘油磷酸納，交聯(lián)劑溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%。
[0062]步驟四:將反應(yīng)液放于37°C恒溫水浴鍋中l(wèi)h，制得水凝膠。
``[0063]對(duì)以上實(shí)施例的產(chǎn)物進(jìn)行紅外光譜分析、X射線光電子能譜、掃描電鏡分析、樣品觀察、透射電鏡分析、免疫組化分析和H&E染色分析，其分析結(jié)果如下:
1、水凝膠填充材料的紅外光譜分析如圖1所示，與純的類人膠原蛋白、殼聚糖、透明質(zhì)酸的C=O吸收峰(1644 cm-1,1644 cm-1,1646 cnT1)相比，水凝膠的C=O (1619CHT1)吸收峰發(fā)生藍(lán)移，且在1413 cnT1處有新的吸收峰，是酰胺鍵(-RC0NHR’ )的C-N伸縮振動(dòng)的吸收峰。在水凝膠光譜圖中，1619 cnT1和2625 cnT1處吸收峰是新生成的銨鹽(-RNH2+)的吸收峰。
[0064]2、水凝膠填充材料的X射線光電子能譜分析如圖2所示，在N譜中，399.31eV處有新的N結(jié)合能生成。在C譜中，在287.85eV處C結(jié)合能與純殼聚糖相比減小，與純透明質(zhì)酸相比增加；在286.2eV處C結(jié)合能與純殼聚糖和透明質(zhì)酸相比均減小。從而證明有新的酰胺鍵(-RC0NHR’ )和銨鹽(-RNH2+)生成。
[0065]3、水凝膠填充材料的樣品如圖3所示，自組裝纖維呈有規(guī)則的排布。水凝膠在室溫條件下呈溶膠，在體溫條件下形成凝膠，而且呈類似于果凍狀的乳白色凝膠。
[0066]4、水凝膠填充材料的掃描電鏡分析如圖4所示，自組裝纖維呈有規(guī)則的排布。水凝膠呈三維網(wǎng)絡(luò)狀的多孔結(jié)構(gòu)，排布比較規(guī)整。
[0067]5、水凝膠填充材料注射于小鼠皮下分析如圖5所示，在第一周水凝膠存在于小鼠皮下；第二周水凝膠存在于小鼠皮下，略微有些降解；第六周水凝膠殘留小部分，大部分已經(jīng)降解完。水凝膠填充材料注射于小鼠皮下10分鐘取出后與從試管中取出后相比，都成乳白色的類似于果凍狀的水凝膠。
[0068]6、水凝膠填充材料注射于小鼠皮下后的透射電鏡分析如圖6所示，實(shí)施例一、二和三制備出的水凝膠有膠原纖維和細(xì)胞體，與空白對(duì)照組(A、B、C)的分析結(jié)果一樣，組織相容性良好。
[0069]7、水凝膠填充材料的注射于小鼠皮下后的免疫組化分析如圖7所示，實(shí)施例一、二和三制備出的水凝膠，炎癥反應(yīng)最小。
[0070]8、水凝膠填充材料的注射于小鼠皮下后的H&E染色分析如圖8所示，實(shí)施例一、二和三制備出的水凝膠，可降解且速率比較慢。
[0071]本發(fā)明制得的水凝膠填充材料用于成年雌性ICR小鼠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明:用自組裝和物理/化學(xué)交聯(lián)法制備出的水凝膠，具有較好的生物相容性和組織相容性，且降解慢，適合用于組織填充。
[0072]本發(fā)明的內(nèi)容不限于實(shí)施例所列舉，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過閱讀本發(fā)明說明書而對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案采取的任何等效``的變換，均為本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【權(quán)利要求】
1.一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法，其特征在于: 由以下步驟實(shí)現(xiàn): 步驟一:稱取類人膠原蛋白溶于雙蒸水中，然后向類人膠原蛋白溶液中加入殼聚糖溶液，令類人膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為(I~6):5，反應(yīng)溫度控制為-4~0°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5~Ih ; 步驟二:加入透明質(zhì)酸溶液，透明質(zhì)酸與殼聚糖的質(zhì)量比為(0.1~0.4):1，反應(yīng)溫度控制為20~30°C，在攪拌條件下反應(yīng)0.2~0.5h ; 步驟三:加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與殼聚糖的質(zhì)量比是(6~8):1，反應(yīng)溫度控制為-4~O °C，在攪拌條件下反應(yīng)0.5~Ih; 步驟四:將反應(yīng)液放于37°C恒溫水浴鍋中l(wèi)h，制得水凝膠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法，其特征在于: 步驟一中，類人膠原蛋白為基因工程菌BL21高密度發(fā)酵生產(chǎn)的類人膠原蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法，其特征在于: 步驟一中，殼聚糖為脫乙酰度為90%以上的殼聚糖，質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40mg/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法，其特征在于: 步驟二中，透明質(zhì)酸為醫(yī)用級(jí)別的透明質(zhì)酸，分子量為lOOOOOODa，透明質(zhì)酸溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法，其特征在于: 步驟三中，交聯(lián)劑為甘油磷酸納、α-甘油磷酸鈉或α，甘油磷酸納，交聯(lián)劑溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%。
6.如權(quán)利要求5所述的一種用作皮膚填充材料的水凝膠的制備方法制備的水凝膠。
【文檔編號(hào)】C08L89/00GK103755981SQ201410015731
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月14日
【發(fā)明者】李賢 , 范代娣, 馬曉軒 申請(qǐng)人:西北大學(xué)