一種云芝中多糖的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種云芝中多糖的提取方法。所述的方法包括以下步驟：取云芝適量冷凍干燥至恒重，粉碎過篩；取過篩后的樣品粉末置入斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；將活化后的菌株置入發(fā)酵瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，得菌株發(fā)酵液；將菌株發(fā)酵液加等量的蒸餾水溶解稀釋，進(jìn)行微波提取多次，離心，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，加入無水乙醇，超聲混勻，置于4℃冰箱過液，離心，棄上清，取沉淀干燥至恒重即為云芝多糖。本發(fā)明中采用的微波提取法，提取條件進(jìn)行了嚴(yán)格的優(yōu)化，提取時(shí)間為20-30S，提取功率為260-265W，提取溫度為55-60℃，提取3-5次，提取溫度為55-60℃，可保證云芝中多糖提取充分，提取率最高，同時(shí)也避免了云芝多糖被破壞，與傳統(tǒng)方法相比，操作更為簡(jiǎn)單，操作時(shí)間短。
【專利說明】一種云芝中多糖的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種云芝中多糖的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]云芝(Cor1lusversicolor)又稱為采絨革蓋菌、千層蘑、彩云革蓋菌等，隸屬真菌門、擔(dān)子菌亞門、多孔菌科、革蓋菌屬，是一種分布廣泛的大型木腐真菌，云芝味甘、淡，性微寒，有健脾利濕，止咳平喘，清熱解毒，抗腫瘤的功效，是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴藥材。云芝多糖是云芝的主要有效成分，能激活免設(shè)細(xì)胞、提高機(jī)體免疫功能，抗腫瘤、降血脂及抗菌，此外，云芝多糖對(duì)慢性應(yīng)激引起的學(xué)習(xí)和記憶障礙等均有顯著的改善效果，因此，云芝多糖可作為一種安全有效的活性物質(zhì)，應(yīng)用于保健食品中
微波提取技術(shù)是利用不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)在微波場(chǎng)中吸收微波能力的差異使物質(zhì)中的某些區(qū)域或提取體系中的某些組分被選擇性加熱，從而使這些組分從物質(zhì)或體系中分離進(jìn)入介電常數(shù)較小微波吸收能力相對(duì)差的提取劑中，具有提取速度快、溶劑用量少、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。目前，微波提取技術(shù)已被廣泛用于天然產(chǎn)物中多種活性成分的提取。云芝胞內(nèi)糖肽(多糖)的傳統(tǒng)提取方法為超聲法及高壓均質(zhì)法，但上述方法存在操作繁瑣或多糖提取率低等缺點(diǎn)。為此，本發(fā)明將微波提取技術(shù)用于云芝多糖的提取，以便提高云芝多糖的產(chǎn)率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷提供一種云芝中多糖的微波提取方法。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種云芝中多糖的提取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預(yù)處理:取云芝3-5g冷凍干燥至恒重，粉碎過篩，取篩下樣品粉末備用；
(2)菌種培養(yǎng)活化:取步驟(I)中制得的樣品粉末置入斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得到活化的菌株；
(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng):取步驟(2)中活化的菌株置入發(fā)酵瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，得菌株發(fā)酵液；
(4)多糖提取:將步驟(3)中制得的菌株發(fā)酵液加等量的蒸餾水進(jìn)一步溶解稀釋，置入微波爐中提取，反復(fù)提取多次，提取結(jié)束后，離心，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原上清液體積的1/4，加入無水乙醇，超聲混勻，置于4°C冰箱過液，離心，棄上清，取沉淀干燥至恒重即為云芝多糖。
[0005]優(yōu)選的，步驟(I)中所述的粉碎過篩為過40-80目篩。
[0006]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯15-25%，葡萄糖1_3%，磷酸二氫鉀0.1-0.5%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%，瓊脂1-3%。
[0007]優(yōu)選的，步驟(3)中所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖1-3%,硫酸鎂水合物0.1-0.3%，硫酸鈉0.03-0.08%，磷酸二氫鉀0.1-0.5%。
[0008]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基及步驟(3)中所述的搖瓶種子培養(yǎng)基均為在121°C條件下濕熱滅菌30-40min的培養(yǎng)基。
[0009]優(yōu)選的，步驟(2)中所述的培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度25_28°C，培養(yǎng)時(shí)間3_5d。
[0010]優(yōu)選的，步驟(3)中所述的培養(yǎng)條件為:搖床速度200-220r/min，培養(yǎng)溫度25-28°C，培養(yǎng)時(shí)間 3-5d。
[0011]優(yōu)選的，步驟(4)中所述的微波提取的條件為:提取時(shí)間20-30S，提取功率為260-265W，提取溫度為55-60°C ;所述的微波提取采用間歇提取，反復(fù)提取次數(shù)為3_5次。
[0012]優(yōu)選的，步驟(4)中所述的離心的速度為13000-150000r/min，離心時(shí)間為5_10mino
[0013]優(yōu)選的，步驟(4)中所述的超聲混勻時(shí)間為15_30min。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果:
1.本發(fā)明中采用的微波提取法是一種新型的提取方法，微波提取法與熱水浸提法在提取真菌胞內(nèi)糖肽時(shí)，多糖提取率相似，均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的含量要求，但微波提取法與熱水浸提法相比，具有操作更為簡(jiǎn)單，操作時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。
[0015]2.本發(fā)明中參考國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)，將微波提取的條件進(jìn)行優(yōu)化，如將微波提取的時(shí)間控制在20-30S，采用間歇提取方法，總共提取次數(shù)為3-5次，提取功率為260-265W，提取溫度為55-60°C，可保證云芝中多糖提取充分，提取率最高，同時(shí)也避免了云芝多糖被破壞。
[0016]3.本發(fā)明在對(duì)云芝中多糖進(jìn)行提取時(shí)，先后對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理、斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)及搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，保證了多糖提取更加充分。

【具體實(shí)施方式】
[0017]本發(fā)明通過以下具體實(shí)施例更詳細(xì)的說明本發(fā)明，可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面的了解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0018]實(shí)施例1
一種云芝中多糖的提取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預(yù)處理:取云芝3g冷凍干燥至恒重，粉碎過40目篩，取篩下樣品粉末備用；
(2)菌種培養(yǎng)活化:取步驟(I)中制得的樣品粉末置入斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C，培養(yǎng)時(shí)間3d，得到活化的菌株；
(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng):取步驟(2)中活化的菌株置入發(fā)酵瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，搖床速度200r/min，培養(yǎng)溫度25°C，培養(yǎng)時(shí)間3d，得菌株發(fā)酵液；
(4)多糖提取:將步驟(3)中制得的菌株發(fā)酵液加等量的蒸餾水進(jìn)一步溶解稀釋，置入微波爐中提取，反復(fù)提取多次，提取結(jié)束后，以13000r/min速度離心5min，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原上清液體積的1/4，加入無水乙醇，超聲混勻15min，置于4°C冰箱過液，以13000r/min速度離心5min,棄上清,取沉淀干燥至恒重即為云芝多糖。
[0019]步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯15%，葡萄糖1%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂水合物0.1%，瓊脂1%。
[0020]步驟(3)中所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯汁30%，葡萄糖1%，硫酸鎂水合物0.1%，硫酸鈉0.03%，磷酸二氫鉀0.1%。
[0021]步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基及步驟(3)中所述的搖瓶種子培養(yǎng)基均為在121°C條件下濕熱滅菌30min的培養(yǎng)基。
[0022]步驟(4)中所述的微波提取的條件為:提取時(shí)間20s，提取功率為260W，提取溫度為55°C ;所述的微波提取采用間歇提取，反復(fù)提取次數(shù)為3次。
[0023]實(shí)施例2
一種云芝中多糖的提取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預(yù)處理:取云芝5g冷凍干燥至恒重，粉碎過80目篩，取篩下樣品粉末備用；
(2)菌種培養(yǎng)活化:取步驟(I)中制得的樣品粉末置入斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28°C，培養(yǎng)時(shí)間5d，得到活化的菌株；
(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng):取步驟(2)中活化的菌株置入發(fā)酵瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，搖床速度220r/min，培養(yǎng)溫度28°C，培養(yǎng)時(shí)間5d，得菌株發(fā)酵液；
(4)多糖提取:將步驟(3)中制得的菌株發(fā)酵液加等量的蒸餾水進(jìn)一步溶解稀釋，置入微波爐中提取，反復(fù)提取多次，提取結(jié)束后，以150000r/min速度離心lOmin，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原上清液體積的1/4，加入無水乙醇，超聲混勻30min，置于4°C冰箱過液，以150000r/min速度離心1min,棄上清,取沉淀干燥至恒重即為云芝多糖。
[0024]步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯25%，葡萄糖3%，磷酸二氫鉀0.5%，硫酸鎂水合物0.3%，瓊脂3%。
[0025]步驟(3)中所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯汁50%，葡萄糖3%，硫酸鎂水合物0.3%，硫酸鈉0.08%，磷酸二氫鉀0.5%。
[0026]步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基及步驟(3)中所述的搖瓶種子培養(yǎng)基均為在121°C條件下濕熱滅菌40min的培養(yǎng)基。
[0027]步驟(4)中所述的微波提取的條件為:提取時(shí)間20-30s，提取功率為265W，提取溫度為60°C ;所述的微波提取采用間歇提取，反復(fù)提取次數(shù)為5次。
[0028]實(shí)施例3
一種云芝中多糖的提取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預(yù)處理:取云芝4g冷凍干燥至恒重，粉碎過60目篩，取篩下樣品粉末備用；
(2)菌種培養(yǎng)活化:取步驟(I)中制得的樣品粉末置入斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26°C，培養(yǎng)時(shí)間4d，得到活化的菌株；
(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng):取步驟(2)中活化的菌株置入發(fā)酵瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，搖床速度210r/min，培養(yǎng)溫度26°C，培養(yǎng)時(shí)間4d，得菌株發(fā)酵液；
(4)多糖提取:將步驟(3)中制得的菌株發(fā)酵液加等量的蒸餾水進(jìn)一步溶解稀釋，置入微波爐中提取，反復(fù)提取多次，提取結(jié)束后，以140000r/min速度離心8min，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原上清液體積的1/4，加入無水乙醇，超聲混勻20min，置于4°C冰箱過液，以140000r/min速度離心8min,棄上清,取沉淀干燥至恒重即為云芝多糖。
[0029]步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，磷酸二氫鉀0.3%，硫酸鎂水合物0.2%，瓊脂2%。
[0030]步驟(3)中所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖2%，硫酸鎂水合物0.2%，硫酸鈉0.05%，磷酸二氫鉀0.3%。
[0031]步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基及步驟(3)中所述的搖瓶種子培養(yǎng)基均為在121°C條件下濕熱滅菌35min的培養(yǎng)基。
[0032]步驟(4)中所述的微波提取的條件為:提取時(shí)間25s，提取功率為263W，提取溫度為58°C ;所述的微波提取采用間歇提取，反復(fù)提取次數(shù)為4次。
[0033]以上所述實(shí)施例只是本發(fā)明的較佳實(shí)例，并非來限制本發(fā)明實(shí)施范圍，故凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所述的構(gòu)造、特征及原理所做的等效變化或修飾，均應(yīng)包括本發(fā)明專利申請(qǐng)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，包括以下步驟: (1)樣品預(yù)處理:取云芝3-5g冷凍干燥至恒重，粉碎過篩，取篩下樣品粉末備用； (2)菌種培養(yǎng)活化:取步驟(I)中制得的樣品粉末置入斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得到活化的菌株； (3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng):取步驟(2)中活化的菌株置入發(fā)酵瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，得菌株發(fā)酵液； (4)多糖提取:將步驟(3)中制得的菌株發(fā)酵液加等量的蒸餾水進(jìn)一步溶解稀釋，置入微波爐中提取，反復(fù)提取多次，提取結(jié)束后，離心，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原上清液體積的1/4，加入無水乙醇，超聲混勻，置于4°C冰箱過液，離心，棄上清，取沉淀干燥至恒重即為云芝多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(I)中所述的粉碎過篩為過40-80目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯15-25%，葡萄糖1-3%，磷酸二氫鉀0.1-0.5%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%,瓊脂 1-3%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(3)中所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為:馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖1-3%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%，硫酸鈉0.03-0.08%,磷酸二氫鉀 0.1-0.5%ο
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(2)中所述的斜面培養(yǎng)基及步驟(3)中所述的搖瓶種子培養(yǎng)基均為在121°C條件下濕熱滅菌30-40min的培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(2)中所述的培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度25-28°C，培養(yǎng)時(shí)間3-5d。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(3)中所述的培養(yǎng)條件為:搖床速度200-220r/min，培養(yǎng)溫度25_28°C，培養(yǎng)時(shí)間3_5d。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征在于，步驟(4)中所述的微波提取的條件為:提取時(shí)間20-30s，提取功率為260-265W，提取溫度為55_60°C ;所述的微波提取采用間歇提取，反復(fù)提取次數(shù)為3-5次。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(4)中所述的離心的速度為13000-150000r/min,離心時(shí)間為5-10min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種云芝中多糖的提取方法，其特征于，步驟(4)中所述的超聲混勻時(shí)間為15-30min。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104231104SQ201410480711
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月19日
【發(fā)明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請(qǐng)人:中山安蕎生物科技有限公司