一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法，以肝素鈉為起始原料，加入亞硝酸鈉解聚肝素鈉，生成低分子量肝素鈉和一些雜質(zhì)。使用離子交換樹脂對游離硫酸根和一些雜質(zhì)進(jìn)行離子交換而去除掉，增加了低分子量肝素鈣的安全性。與現(xiàn)有技術(shù)不同，本發(fā)明的有益效果是改變了制備工藝，不但使工藝變得簡單易操作，而且得到的低分子量肝素鈉質(zhì)量好、雜質(zhì)含量低、澄清度好、收率更高。
【專利說明】一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]依諾肝素鈉是一種低分子肝素鈉鹽，主要用于預(yù)防靜脈血栓栓塞性疾病(預(yù)防靜脈內(nèi)血栓形成)，特別是預(yù)防與骨科或普外手術(shù)有關(guān)的血栓形成；《中華人民共和國藥典2010》中規(guī)定，肝素鈉(Heparin Sodium)是自豬或牛的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬黏多糖類物質(zhì)，具有延長血凝時間的作用。肝素鈉按干燥品計算，每Img的效價不得少于170單位。
[0003]低分子量肝素是一種低分子肝素鈉鹽或者鈣鹽，是一種新型的抗凝血酶III (AT III)依賴性抗血栓形成藥，其藥理作用與普通肝素鈉基本相似。
[0004]普通肝素可分離抗血栓活性和抗血凝活性，血漿中凝血酶(即因子II a)活性與血凝關(guān)系密切，因子Xa活性與血栓形成關(guān)系較密切。
[0005]由于低分子量肝素抗因子Xa活性與抗因子II a活性之比值為2.5?5.0，而普通肝素為1.0左右。因此，低分子量肝素對體內(nèi)、外血栓，動、靜脈血栓的形成有抑制作用，它能刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子凝血途徑抑制物和纖溶酶原活化物，而不被血小板第4因子中和，同時對血小板功能亦無明顯影響。
[0006]低分子量肝素對血栓溶解有間接協(xié)同作用，可用于治療已形成的深部靜脈血栓。預(yù)防性抗血栓治療只需每天皮下注射一次，一般不需實驗室監(jiān)測。由于低分子量肝素比普通肝素性能優(yōu)越，所以目前低分子量肝素的科學(xué)研究發(fā)展較快。
[0007]本發(fā)明的 申請人:棗莊賽諾康生化股份有限公司于2013年05月14日申請了申請?zhí)枮?01310175175.1的發(fā)明專利，公開了一種由肝素鈉粗品直接生產(chǎn)低分子量肝素鈉的方法；蘇州法思特生物制藥科技有限公司在2008年02月26日提交了申請?zhí)枮?00810020765.6的發(fā)明專利，其公開了一種超低分子肝素鈉(鈣)的生產(chǎn)工藝。這兩件發(fā)明專利的原理均是用利用陰離子樹脂吸附肝素鈉或者低分子量肝素和溶液中的雜質(zhì)，然后用低濃度的氯化鈉溶液洗滌離子交換柱，用以洗滌掉小分子的極性不太強(qiáng)的雜質(zhì)，而把肝素或者低分子量肝素留在交換柱內(nèi)；然后再用高濃度的氯化鈉(或鈣)溶液洗脫肝素或者低分子量肝素。
[0008]上述一種超低分子肝素鈉(鈣)的生產(chǎn)工藝在高濃度氯化鈉(鈣)洗脫離子交換樹脂時，低分子量肝素(鈉)鈣被洗脫下來的同時，硫酸根等極性較強(qiáng)的物質(zhì)也可能一同被洗脫下來，不能夠?qū)崿F(xiàn)低分子量肝素(鈉)鈣與游離硫酸根的分離。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)缺陷，而提供一種僅吸附去除游離硫酸根，保留低分子量肝素的超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法。
[0010]為實現(xiàn)本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是:一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0011](I)稱取10g的肝素鈉,用純化水溶解,制備成5%?15% (w/v)的肝素鈉溶液，并控制溶液溫度為30°C以下，攪拌；
[0012](2)用6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)步驟(I)制備溶液的pH值為2.3?3.0，攪拌；
[0013](3)將2.3?3.5g的亞硝酸鈉加入到步驟(2)的溶液中，攪拌并保持pH值穩(wěn)定，反應(yīng)時間為1.5小時；
[0014](4)反應(yīng)完成后迅速用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值為8.0?10.0 ;將事先稱量的肝素鈉重量I?3% (w/w)的硼氫化鈉加入，保持12小時，用6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.5?4.0，保持30分鐘后再用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為6.5 ;
[0015](5)在步驟(4)得到的溶液中加入2倍體積量的乙醇，靜置12小時，去除上清液得到沉淀A ；
[0016](6)用100ml純化水溶解步驟(5)得到的沉淀A制成溶液，然后將此溶液流過離子交換樹脂，得到流出液；
[0017](7)將步驟(6)得到的流出液中加入其體積1.5% (w/v)的氯化鈉，然后再加入乙醇，得到上清液和沉淀B，所述沉淀B經(jīng)過洗滌、脫水、干燥即得超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉。
[0018]所述步驟(6)中使用的離子交換樹脂采購自南開大學(xué)201X7陰離子交換樹脂、Amberlite IRA-400 或Dia1n SA-10A。
[0019]本發(fā)明的工作原理是以肝素鈉為起始原料，用水溶解，控制一定的pH，加入一定量的亞硝酸鈉解聚肝素鈉，生成低分子量肝素鈉和一些雜質(zhì)。其中，在肝素鈉用亞硝酸鈉解聚的過程中，肝素鈉有硫酸基團(tuán)游離出來。歐洲藥典對硫酸基團(tuán)是要進(jìn)行限量控制，必須要加以去除，才能符合肝素鈉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明使用離子交換樹脂對游離硫酸根和一些雜質(zhì)進(jìn)行離子交換而去除掉，使得低分子量肝素鈉中殘存的硫酸基較低，并且易于操作控制。本工藝不但操作簡單，也使得一些負(fù)離子如亞硝酸根、硼氫酸根等一同被吸附掉，增加了低分子量肝素鈣的安全性。現(xiàn)有技術(shù)則是采用陰離子樹脂吸附肝素鈉或者低分子量肝素和溶液中的雜質(zhì)，然后用低濃度的氯化鈉溶液洗滌離子交換柱，用以洗滌掉小分子的極性不太強(qiáng)的雜質(zhì)，而把肝素或者低分子量肝素留在交換柱內(nèi)；然后再用高濃度的氯化鈉(或鈣)溶液洗脫肝素或者低分子量肝素。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)不同，本發(fā)明的有益效果是改變了制備工藝，不但使工藝變得簡單易操作，而且得到的低分子量肝素鈉質(zhì)量好、雜質(zhì)含量低、澄清度好、收率更高。

【具體實施方式】
[0021]以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0022]本發(fā)明中涉及到的低分子量肝素是由普通肝素經(jīng)過化學(xué)法或者物理分級方法獲得的。本說明書所闡述的低分子量肝素鈣(鈉)是由普通肝素鈣(鈉)經(jīng)過亞硝酸鈉降解生成的低分子量肝素鈉鹽或者肝素鈣鹽，包括那曲肝素鈣、達(dá)肝素鈉以及廣義的亞硝酸鈉解聚的低分子量肝素鈉或低分子量肝素鈣。
[0023]實施例1:
[0024]一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法，包括如下操作步驟:
[0025](I)稱取10g的肝素鈉,用純化水溶解,制備成5%?15% (w/v)的肝素鈉溶液，并控制溶液溫度為30°C以下，攪拌；其中，肝素鈉采購自棗莊賽諾康生化股份有限公司銷售的豬黏膜肝素鈉成品。
[0026](2)用6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)步驟(I)制備溶液的pH值為2.3?3.0，攪拌；
[0027](3)將2.3?3.5g的亞硝酸鈉加入到步驟(2)的溶液中，攪拌并保持pH值穩(wěn)定，反應(yīng)時間為1.5小時；
[0028](4)反應(yīng)完成后迅速用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值為8.0?10.0 ;將事先稱量的肝素鈉重量I?3% (w/w)的硼氫化鈉加入，保持12小時，用6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.5?4.0，保持30分鐘后再用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為6.5 ;
[0029](5)在步驟(4)得到的溶液中加入2倍體積量的乙醇，靜置12小時，去除上清液得到沉淀A ；
[0030](6)用100ml純化水溶解步驟(5)得到的沉淀A制成溶液，然后將此溶液流過離子交換樹脂，得到流出液；
[0031](7)將步驟(6)得到的流出液中加入其體積1.5% (w/v)的氯化鈉，然后再加入乙醇，得到上清液和沉淀B，所述沉淀B經(jīng)過洗滌、脫水、干燥即得超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉。
[0032]除了上述7個步驟之外，再進(jìn)一步用氯化鈣進(jìn)行置換反應(yīng)，即得低分子量肝素鈣；如果按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分子量分級即得到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的那曲肝素鈣或達(dá)肝素鈉。
[0033]在步驟(6)中是使用南開大學(xué)供應(yīng)201 X 7陰離子交換樹脂，它對游離硫酸根和一些雜質(zhì)進(jìn)行選擇性吸附，而現(xiàn)有技術(shù)中是使用的大孔型的陰離子樹脂。
[0034]優(yōu)選201 X 7 陰離子交換樹脂、Amberlite IRA-400、Dia1n SA-1OAjjff^
[0035]實施例2:
[0036]和實施例1不同的是，步驟(6)更換了陰離子樹脂為Amberlite IRA-400。
[0037]實施例3:
[0038]和實施例1不同的是，步驟(6)更換了陰離子樹脂為Dia1n SA-10A。
[0039]經(jīng)過測試，實施例1-3雖然采用了不同的陰離子樹脂，但是其都能夠?qū)崿F(xiàn)對游離硫酸根和一些雜質(zhì)進(jìn)行選擇性吸附，最終結(jié)果基本無差異；改變了制備工藝，不但使工藝變得簡單易操作，而且得到的低分子量肝素鈉質(zhì)量好、雜質(zhì)含量低、澄清度好、收率更高。
[0040]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)稱取10g的肝素鈉,用純化水溶解,制備成5%?15%(w/v)的肝素鈉溶液,并控制溶液溫度為30°C以下，攪拌； (2)用6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)步驟⑴制備溶液的pH值為2.3?3.0，攪拌； (3)將2.3?3.5g的亞硝酸鈉加入到步驟(2)的溶液中，攪拌并保持pH值穩(wěn)定，反應(yīng)時間為1.5小時； (4)反應(yīng)完成后迅速用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值為8.0?10.0 ;將事先稱量的肝素鈉重量I?3% (w/w)的硼氫化鈉加入，保持12小時，用6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.5?4.0，保持30分鐘后再用lmol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為6.5 ; (5)在步驟(4)得到的溶液中加入2倍體積量的乙醇，靜置12小時，去除上清液得到沉淀A ； (6)用100ml純化水溶解步驟(5)得到的沉淀A制成溶液，然后將此溶液流過離子交換樹脂，得到流出液； (7)將步驟(6)得到的流出液中加入其體積1.5%(w/v)的氯化鈉，然后再加入乙醇，得到上清液和沉淀B，所述沉淀B經(jīng)過洗滌、脫水、干燥即得超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超低游離硫酸基的低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于所述步驟(6)中使用的離子交換樹脂為201X7陰離子交換樹脂、Amberlite IRA-400或 Dia1n SA-1OA0
【文檔編號】C08B37/10GK104262510SQ201410536067
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月11日
【發(fā)明者】鄭會武, 石濱, 叢義國, 劉清涼 申請人:棗莊賽諾康生化股份有限公司