從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，該方法是將杜仲原料采用有機溶劑提取、濃縮，濃縮物依次經(jīng)過熱水溶解、冷沉、離心分離得到離心液，離心液再通過富集、洗脫、濃縮，得到杜仲提取物，杜仲提取物經(jīng)過分離、純化，分別得到松脂醇二葡萄糖苷、綠原酸和桃葉珊瑚苷；提取渣經(jīng)過水解和有機溶劑提取得到杜仲膠；該方法從杜仲中同時較高收率提取分離出高純度綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠，且該方法操作簡單，成本低，實現(xiàn)了自然資源的綜合利用，滿足工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從杜仲(Eucommia ulmodies Oliv.)中同時分離提純出綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法；屬于天然藥物提取領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]杜仲為杜仲科杜仲屬植物，我國特有的多年生落葉喬木，分布于陜西、甘肅、河南、湖北、四川、云南、貴州、湖南及浙江等省區(qū)，現(xiàn)各地廣泛栽種。在自然狀態(tài)下，生長于海拔300-500米的低山，谷地或低坡的疏林里，對土壤的選擇并不嚴格，在瘠薄的紅土，或巖石峭壁均能生長。樹皮藥用，作為強壯劑及降血壓，并能醫(yī)腰膝痛，風濕及習慣性流產(chǎn)等。杜仲中化學成分十分復(fù)雜，皮和葉中的綠原酸具有抗菌、消炎、解毒、利膽、降壓和升高白細胞及顯著增加胃腸蠕動和促進胃液分泌等，對大腸桿菌、金色葡萄球菌、肺炎球菌和病毒有較強的抑制作用；對急性咽喉炎癥和皮膚病有明顯療效，臨床上用于治療急性細菌性感染疾病及放化療時所致的白細胞減少癥，對月經(jīng)過多，子宮功能性出血有良好的止血效果綠原酸的主要藥理作用有:桃葉珊瑚苷是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有清濕熱、利小便、鎮(zhèn)痛、降壓、保肝護肝、抗腫瘤等作用。它能促進干細胞再生，明顯抑制乙型肝炎病毒DNA的復(fù)制，其苷元及有效多聚體是一種抗菌素。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲降壓的主要成分，作用于血管平滑肌，使外周血管擴張。杜仲膠是硬橡膠，供工業(yè)原料及絕緣材料，抗酸、堿及化學試劑的腐蝕的性能高，可制造耐酸、堿容量及管道的襯里及牙科材料等。
[0003]杜仲的成分復(fù)雜，活性成分分離困難，目前僅有少數(shù)企業(yè)對杜仲的某個單一的成分進行分離，且工藝復(fù)雜，操作繁瑣，收率低，成本高，其他成分作為廢棄物處理，并沒有得到很好的利用，造成資源的嚴重浪費，雖有專利CN200810031122.1對杜仲環(huán)烯醚萜類的分離報道，但多類成分(咖啡奎寧酸類、環(huán)烯醚萜類、木質(zhì)素類、異戊二烯高分子)綜合分離的大規(guī)模生產(chǎn)的未見報道，對于從杜仲各種不同原料中同時對多類成分提取、分離、純化的生產(chǎn)方法，也未見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)對杜仲中的藥物活性成分的分離存在不能同時獲得多類藥物成分，造成有效成分浪費，且工藝復(fù)雜，操作繁瑣，得到的藥物有效成分收率低，成本高等一系列的缺陷，本發(fā)明的目是在于提供一種從杜仲中同時較高收率提取分離高純度綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，該方法操作簡單，成本低，實現(xiàn)了自然資源的綜合利用，滿足工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明提供了一種從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，該方法包括以下步驟:
[0006]步驟一:提取
[0007]將杜仲原料干燥、粉碎后，采用有機溶劑提取，過濾，所得提取液濃縮至膏狀物，所得膏狀物用75?85°C熱水溶解，冷卻到O?30°C后，靜置0.5?24h，離心分離；
[0008]步驟二:富集
[0009]步驟一離心分離得到的離心液采用大孔吸附樹脂、氧化鋁或葡聚糖凝膠進行吸附富集，吸附完成后，依次采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%和65?75%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、干燥，得到粉狀混合物；
[0010]步驟三:分離
[0011]將步驟二所得粉狀混合物與硅膠、氧化鋁、十八碳烷基鍵合硅膠、MC1-GELCHP20/P120或葡聚糖凝膠混合裝柱，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進行梯度洗脫，采用TLC薄層色譜跟蹤檢測，分別分離出含綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷餾分；將各餾分分別濃縮、干燥和結(jié)晶，得到綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷晶體；
[0012]步驟四:提取杜仲膠
[0013]步驟一中過濾所得提取渣通過水解后，過濾，濾渣采用低極性有機溶劑回流提取，提取液經(jīng)冷卻結(jié)晶，得到杜仲膠。
[0014]本發(fā)明的從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法還包括以下優(yōu)選方案:
[0015]優(yōu)選的方案中杜仲原料為杜仲皮、葉或籽柏中的一種或幾種。其中，杜仲皮可以為新鮮桿或枝皮，杜仲葉可以為新鮮葉。
[0016]優(yōu)選的方案中步驟一中所述的提取為冷浸靜態(tài)提取、冷浸動態(tài)提取、熱回流提取、熱浸靜態(tài)提取、熱浸動態(tài)提取或逆流連續(xù)提取方式中的任意一種。最優(yōu)選為熱回流提取。
[0017]優(yōu)選的方案中步驟一中的有機溶劑為甲酸、乙酸、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙二醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚中的一種或幾種；最優(yōu)選的有機溶劑為甲醇或乙醇。
[0018]優(yōu)選的方案中采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%的乙醇水溶液進行洗脫獲得的洗脫液先進行濃縮得到稠狀物，所得稠狀物用無水乙醇溶解，同時加入甲酸調(diào)節(jié)溶液酸度，再通過酸性氧化鋁吸附后，以質(zhì)量百分比濃度為55?65%的乙醇溶液洗脫，洗脫液進行濃縮、干燥，得到粉狀混合物。
[0019]優(yōu)選的方案中采用質(zhì)量百分比濃度為65?75%的乙醇水溶液進行洗脫獲得的洗脫液直接進行濃縮、干燥，得到粉狀混合物。
[0020]優(yōu)選的方案中稠狀物用無水乙醇溶解使無水乙醇的質(zhì)量百分比濃度達到55?65%。
[0021]優(yōu)選的方案中以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進行梯度洗脫的過程是以氯仿:甲醇:水按體積比從100:0:0到50:50:10進行梯度洗脫O
[0022]優(yōu)選的方案中所述的低極性有機溶劑為正己烷、環(huán)己烷、石油醚、氯仿中一種或幾種。最優(yōu)選為石油醚。
[0023]優(yōu)選的方案中水解為無機酸水解、苛性堿水解或酶水解。最優(yōu)選為苛性堿水解。
[0024]優(yōu)選的方案中苛性堿水解是采用濃度為1.5?2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液煮沸并保溫8?12h。
[0025]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明以杜仲天然植物為原料通過簡單工藝同時高產(chǎn)率分離出高純度的綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠，其中，綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷純度(HPLC檢測)分別達到90%以上，杜仲膠的純度達到98%以上，綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷提取率都大于90%。本發(fā)明的技術(shù)方案真正實現(xiàn)了天然藥物資源杜仲的綜合利用，且該方法操作簡單，成本低，滿足工業(yè)大規(guī)模應(yīng)用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]【圖1】為實施例1制得的綠原酸的HPLC圖譜；
[0027]【圖2】為實施例1制得的松脂醇二葡萄糖苷的HPLC圖譜；
[0028]【圖3】為實施例1制得的桃葉珊瑚苷的HPLC圖譜；
[0029]【圖4】為本發(fā)明的工藝流程圖。

【具體實施方式】
[0030]以下實施例旨在進一步說明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，而不是限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護范圍。
[0031]實施例1
[0032]提取:稱取新鮮的杜仲皮50kg，用切藥機切成5?1cm段，再通過錘片式粉碎機粉碎成粗粉，投入多功能提取罐中，加80%甲醇攪拌回流提取2次，第一次加200L，提取2h，第二次加150L，提取lh，提取液通過罐底篩網(wǎng)放出，通過管道過濾器過濾，收集兩次提取液，合并。提取渣回收甲醇后，備用。將提取液減壓濃縮至25L，轉(zhuǎn)入醇沉罐中，加25L水，加熱至80°C，攪拌30min，冷卻至8?10°C，靜置12h，再通過三足離心機布袋離心，得到離心液。
[0033]富集:將離心液通過DlOl大孔樹脂吸附完全，水洗至無顏色，以40%乙醇水洗脫，收集40 %乙醇水洗脫液，再加70 %乙醇水洗脫，收集70%乙醇水洗脫液，40 %乙醇水洗脫液濃縮至稠膏，加95%乙醇調(diào)節(jié)醇質(zhì)量百分比濃度至60%，加甲酸50mL，通過酸性氧化鋁除雜，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到干粉324g。70%乙醇水洗脫部位直接濃縮，干燥，得到干粉775g。分離:將干粉300g加入450g200?300目硅膠拌樣，加入已裝2kg500?800目硅膠的色譜柱中，加入氯仿-甲醇-水(100:0:0?50:50:10)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分，合并單個相同成分餾分。
[0034]純化:分別濃縮綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分。綠原酸以水重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得42g(純度93% ;色譜圖如圖1所示)；桃葉珊瑚苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得26g (純度96 %，色譜分析如圖3所示)；松脂醇二葡萄糖苷以70 %甲醇重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得87g(純度90% ;色譜分析如圖2所示)；
[0035]提取杜仲膠:向提取罐中加入200L2mol/L氫氧化鈉水溶液，加熱煮沸，保溫1h,提取渣和提取液一起通過板框過濾器，濾餅加清水洗滌至基本無色，卸料，曬干，得渣
11.7kg，將水解干渣用濾袋裝好，投入提取罐中，加石油醚加熱回流提取2次，第一次90L提取3h，第二次75L提取2h，合并提取液，放入冷沉罐中，冷卻結(jié)晶12h，過濾，得濾餅，真空干燥，得白色杜仲膠1.51kg ;杜仲膠純度達到98%。
[0036]實施例2
[0037]提取:稱取市售杜仲皮藥材200kg，用切藥機切成5?1cm段，再通過錘片式粉碎機粉碎成粗粉，投入多功能提取罐中，加70%乙醇攪拌回流提取2次，第一次加1600L，提取2h，第二次加1200L，提取lh，提取液通過罐底篩網(wǎng)放出，通過管道過濾器過濾，收集兩次提取液，合并。提取渣回收乙醇，備用。將提取液減壓濃縮至200L，轉(zhuǎn)入醇沉罐中，加200L水，加熱至85°C，攪拌30min，冷卻至10?15°C，靜置24h，再通過三足離心機布袋離心，得到離心液。
[0038]富集:將離心液通過氧化鋁吸附完全，水洗至無顏色，以45%乙醇水洗脫，收集45 %乙醇水洗脫液，再加75 %乙醇水洗脫，收集75 %乙醇水洗脫液，45 %乙醇水洗脫液濃縮至稠膏，加95%乙醇調(diào)節(jié)醇質(zhì)量百分比濃度至55%，加甲酸500mL，通過酸性氧化鋁除雜，再以60 %乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到干粉2.8kg。70 %乙醇水部位直接濃縮，干燥，得到干粉6.5kg。
[0039]分離:將干粉3.0kg加入4.5kg200?300目硅膠拌樣，加入已裝20kg500?800目硅膠的色譜柱中，加入氯仿-甲醇-水(100:0:0?50:50:10)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分，合并單個相同成分餾分。
[0040]純化:分別濃縮綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分。綠原酸以水重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得79g (純度95% );桃葉珊瑚苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得43g(純度94% );松脂醇二葡萄糖苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得105g(純度93% )。
[0041]提取杜仲膠:向提取罐中加入2000L2mol/L氫氧化鈉水溶液，加熱煮沸，保溫1h,提取渣和提取液一起通過板框過濾器，濾餅加清水洗滌至基本無色，卸料，曬干，得渣102.6kg，將水解干渣用濾袋裝好，投入提取罐中，加石油醚加熱回流提取2次，第一次800L提取3h，第二次600L提取2h，合并提取液，放入冷沉罐中，冷卻結(jié)晶24h，過濾，得濾餅，真空干燥，得白色杜仲膠13.8kg ;杜仲膠純度達到98%。
[0042]實施例3
[0043]提取:稱取杜仲鮮干皮20kg，切片，于炒鍋中快速翻炒30min，再通過錘片式粉碎機粉碎成粗粉，投入多功能提取罐中，加丙酮攪拌回流提取2次，第一次加80L，提取2h，第二次加60L，提取lh，提取液通過罐底篩網(wǎng)放出，通過管道過濾器過濾，收集兩次提取液，合并。提取渣回收丙酮，備用。將提取液減壓濃縮至10L，轉(zhuǎn)入醇沉罐中，加1L水，加熱至80°C，攪拌30min，冷卻至8?10°C，靜置12h，再通過三足離心機布袋離心，得到離心液。
[0044]富集:將離心液通過DlOl大孔樹脂吸附完全，水洗至無顏色，以35%乙醇水洗脫，收集35 %乙醇水洗脫液，再加70 %乙醇水洗脫，收集70%乙醇水洗脫液，35 %乙醇水洗脫液濃縮至稠膏，加95%乙醇調(diào)節(jié)醇質(zhì)量百分比濃度至60%，加甲酸20mL，通過酸性氧化鋁除雜，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到干粉141g。70%乙醇水部位直接濃縮，干燥，得到干粉290g。
[0045]分離:將干粉140g加入210g200?300目硅膠拌樣，加入已裝1.0kg500?800目硅膠的色譜柱中，加入氯仿-甲醇-水(100:0:0?50:50:10)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分，合并單個相同成分餾分。
[0046]純化:分別濃縮綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分。綠原酸以水重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得33g(純度94% );桃葉珊瑚苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得6g(純度92% );松脂醇二葡萄糖苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過濾，干燥，得68g(純度 91% )。
[0047]提取杜仲膠:向提取罐中加入80L1.5mol/L氫氧化鉀水溶液，加熱煮沸，保溫1h,提取渣和提取液一起通過板框過濾器，濾餅加清水洗滌至基本無色，卸料，曬干，得渣5.1kg，將水解干渣用濾袋裝好，投入提取罐中，加石油醚加熱回流提取2次，第一次45L提取3h，第二次35L提取2h，合并提取液，放入冷沉罐中，冷卻結(jié)晶12h，過濾，得濾餅，真空干燥，得白色杜仲膠569g ;杜仲膠純度達到98%。
【權(quán)利要求】
1.從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一:提取 將杜仲原料干燥、粉碎后，采用有機溶劑提取，過濾，所得提取液濃縮至膏狀物，所得膏狀物用75?85°C熱水溶解，冷卻到0?30°C后，靜置0.5?24h，離心分離； 步驟二:富集 步驟一離心分離得到的離心液采用大孔吸附樹脂、氧化鋁或葡聚糖凝膠進行吸附富集，吸附完成后，依次采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%和65?75%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、干燥，得到粉狀混合物； 步驟三:分離 將步驟二所得粉狀混合物與硅膠、氧化鋁、十八碳烷基鍵合硅膠、MC1-GEL CHP20/P120或葡聚糖凝膠混合裝柱，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進行梯度洗脫，采用TLC薄層色譜跟蹤檢測，分別分離出含綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷餾分；將各餾分分別濃縮、干燥和結(jié)晶，得到綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷晶體； 步驟四:提取杜仲膠 步驟一中過濾所得提取渣通過水解后，過濾，濾渣采用低極性有機溶劑回流提取，提取液經(jīng)冷卻結(jié)晶，得到杜仲膠。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的杜仲原料為杜仲皮、葉或籽柏中的一種或幾種。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中所述的提取為冷浸靜態(tài)提取、冷浸動態(tài)提取、熱回流提取、熱浸靜態(tài)提取、熱浸動態(tài)提取或逆流連續(xù)提取方式中的任意一種。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%的乙醇水溶液進行洗脫獲得的洗脫液先進行濃縮得到稠狀物，所得稠狀物用無水乙醇溶解，同時加入甲酸調(diào)節(jié)溶液酸度，再通過酸性氧化鋁吸附后，以質(zhì)量百分比濃度為55?65%的乙醇溶液洗脫，洗脫液進行濃縮、干燥，得到粉狀混合物；采用質(zhì)量百分比濃度為65?75%的乙醇水溶液進行洗脫獲得的洗脫液直接進行濃縮、干燥，得到粉狀混合物。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所得稠狀物用無水乙醇溶解使無水乙醇的質(zhì)量百分比濃度達到55?65%。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進行梯度洗脫的過程是以氯仿:甲醇:水按體積比從100:0:0到50:50:10進行梯度洗脫。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的低極性有機溶劑為正己烷、環(huán)己烷、石油醚、氯仿中一種或幾種。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水解為無機酸水解、苛性堿水解或酶水解。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的苛性堿水解是采用濃度為1.5?2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液煮沸并保溫8?12h。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中的有機溶劑為甲酸、乙酸、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙二醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚中的一種或幾種。
【文檔編號】C08J3/00GK104496816SQ201410697587
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月26日
【發(fā)明者】歐陽勇, 曾建國 申請人:湖南美可達生物資源有限公司