一種用作抗肥胖劑的化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品化學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及用作抗肥胖的化合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 肥胖是現(xiàn)代社會(huì)中最嚴(yán)重的疾病之一，其主要原因是脂肪的過(guò)量攝取。此外已知， 脂肪的過(guò)量攝取不僅會(huì)產(chǎn)生肥胖癥狀，而且還會(huì)產(chǎn)生起因于肥胖的糖尿病、高血脂癥、高血 壓、動(dòng)脈硬化等癥狀。在內(nèi)臟脂肪型肥胖的基礎(chǔ)上再加上高血糖?高血壓?脂質(zhì)異常中的 任何2項(xiàng)以上的狀態(tài)，被稱為代謝綜合癥（內(nèi)臟脂肪綜合癥），由于產(chǎn)生心臟病、腦中風(fēng)癥 狀的危險(xiǎn)性很高，所以近年來(lái)被視為問題。作為針對(duì)肥胖的治療藥，例如羅氏鮮（Xenical) (注冊(cè)商標(biāo)）作為肥胖改善藥在市售，羅氏鮮（Xenical)是利用脂肪酶抑制活性而具有抑制 從腸道吸收脂肪的作用，但報(bào)道有脂肪便、排便次數(shù)增加、軟便、腹瀉、腹痛等副作用，難于 說(shuō)一定安全。
[0003] 為了預(yù)防肥胖，通過(guò)限制飲食來(lái)減少攝取熱量雖然是有效的手段，但必須接受嚴(yán) 格的營(yíng)養(yǎng)指導(dǎo)，在日常生活中在很多情況下難于實(shí)行。因此認(rèn)為，安全且健康地抑制來(lái)自飲 食的脂肪被體內(nèi)吸收，從治療肥胖及與此相關(guān)的疾病或者從增進(jìn)健康的目的來(lái)看，是實(shí)際 有用的策略。
[0004] 在這種背景下，證明安全且對(duì)人體有效的特定保健用食品的開發(fā)受到關(guān)注。到目 前為止，作為抑制餐后血清中性脂肪值升高的食品原料，已將通過(guò)胰脂肪酶抑制來(lái)抑制脂 肪吸收的球蛋白分解物、與三?；视途哂胁煌南仗匦缘亩；视汀⒂婶~油精 制而成的二十碳五烯 酸（EPA)、二十二碳六烯酸（DHA)等作為特定保健用食品而銷售。
[0005] 此外，來(lái)自植物的脂肪酶抑制活性物質(zhì)最近也日漸受到關(guān)注，特別是關(guān)于具有脂 肪酶抑制活性的多酚類，已報(bào)道了配合來(lái)自植物樹皮的單寧、豆科植物豆茶決明中含有的 單寧類、類黃酮類及其糖苷、綠茶中的主要成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯及表兒茶素沒 食子酸酯的脂質(zhì)吸收抑制食品，由菜椒、叢生口蘑、南瓜、舞茸、羊棲菜、綠茶、烏龍茶等的水 提取物組成的脂肪酶抑制劑，以黃酮及黃酮醇類、羥基苯甲酸類（沒食子酸）、三萜類化合 物及其衍生物、羅望子的原花青素為有效成分的抗肥胖劑等。并且已知葡萄種子提取物的 脂肪酶抑制作用、來(lái)自五層龍的多酚的脂肪酶抑制作用和對(duì)大鼠的抗肥胖作用、烏龍茶提 取物對(duì)小鼠的抗肥胖作用等。此外還有關(guān)于茶中含有大量?jī)翰杷仡?，其成分大多被分離?鑒 定、含有來(lái)自茶的成分的脂肪酶抑制劑的報(bào)道。其中，已知作為紅茶、烏龍茶的色素而已知 的茶黃素，與其分子內(nèi)沒食子酸酯基的數(shù)量成比例地顯示強(qiáng)的脂肪酶抑制活性。但是，這些 茶黃素類的含量、比率因茶的種類而不同。
[0006] 此外，a-葡萄糖苷酶抑制物質(zhì)，通過(guò)抑制在小腸上皮上存在的a-葡萄糖苷酶， 抑制?延緩糖質(zhì)的分解?吸收，具有血糖值升高抑制作用。因此，a-葡萄糖苷酶抑制物質(zhì) 對(duì)于由慢性高血糖癥引起的糖尿病、肥胖癥等各種疾病有用。
[0007] 自從1933年在麥芽成分中發(fā)現(xiàn)a _葡萄糖苷酶抑制活性以來(lái)，發(fā)現(xiàn)了大量來(lái)自小 麥、豆類等植物的Ct -葡萄糖苷酶抑制物質(zhì)。1966年從微生物代謝物中分離出了具有Ct -葡 萄糖苷酶抑制活性的野尻霉素，并確定了其結(jié)構(gòu)。已知作為其類似物的1-脫氧野尻霉素從 桑葉的提取物中得到，其具有a -葡萄糖苷酶抑制活性，公開了不使其活性降低的提取方 法。
[0008] 此外還報(bào)道，從網(wǎng)狀五層龍（Kothala Himbutu)的根的提取物中分離的具有亞砜 的帶有13員環(huán)環(huán)多醇結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，具有麥芽糖酶抑制活性。此外還報(bào)道，作為從牽牛花、紫 薯的根中分離出的花色素苷化合物，被二?；笊傻幕亍⑹杠嚲账?、芍藥素的3-槐 糖苷 -5_葡萄糖苷（3-sophoroside-5-glucoside)具有麥芽糖酶抑制活性。此外確認(rèn)，在茶 葉中含有的茶雙沒食子兒茶素ACTheasinensin A)、具有沒食子酰基的茶黃素衍生物、含有 表阿夫兒茶精沒食子酸酯作為結(jié)構(gòu)單元的原花色素等具有麥芽糖酶抑制活性。但是，具有 沒食子酰基的茶黃素衍生物雖然具有麥芽糖酶抑制活性，但茶葉中的含量為〇. 1~〇. 2%， 非常少。
[0009] 已報(bào)道紅茶的茶黃素及綠茶的兒茶素類具有a _葡萄糖苷酶抑制活性（非專利文 獻(xiàn)8)，并且確認(rèn)，在兒茶素類中3位上有沒食子?；谋頉]食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯 (以下稱為"EGCG"）、表兒茶素-3-0-沒食子酸酯具有活性，在茶黃素類中茶黃素-3-0-沒 食子酸酯、茶黃素-3, 3'-二-0-沒食子酸酯具有活性。關(guān)于紅茶的ct-葡萄糖苷酶抑制活 性，對(duì)其分離物進(jìn)行了分析，已知通過(guò)發(fā)酵而進(jìn)行聚合的高分子組分也有活性。
[0010] 另一方面，已知在制造紅茶、烏龍茶的發(fā)酵過(guò)程中，在茶葉的多酚氧化酶等酶的作 用下，兒茶素或沒食子酸等多酚類發(fā)生縮合，形成具有苯并環(huán)庚三烯酚酮環(huán)的化合物。
[0011] 報(bào)道茶中除茶黃素之外，還存在大量的含苯并環(huán)庚三烯酚酮環(huán)化合物。例如報(bào)道， 紅掊酚衍生物的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)、表茶黃掊靈類用于食品的制造方法、或者作為茶黃素的三 聚體的二苯駢卓酸酮4(!1163(1讓6112〇1：1'(^〇1〇116 4)的酶促制備法和在紅茶中的存在等。此 外還知道各種含苯并環(huán)庚三烯酚酮環(huán)化合物的抗炎癥作用。但是，對(duì)于茶黃素類、表茶黃 掊靈類之外的含苯并環(huán)庚三烯酚酮環(huán)化合物，尚不知道其與脂肪吸收相關(guān)的脂肪酶抑制作 用、與血糖值升高抑制作用相關(guān)的a-葡萄糖苷酶抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明目的在于提供一種可用于食品中的抑制肥胖的化合物，其以式I結(jié)構(gòu)所 示：

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[0013] 作為本發(fā)明的抗肥胖劑的抑制劑，通過(guò)含有來(lái)自茶葉的提取化合物，顯示優(yōu)異的 脂肪酶抑制活性。本發(fā)明的脂肪酶抑制劑可利用于包括不損壞香味、嗜好性高且以降低中 性脂肪、促進(jìn)健康為目的的飲食品在內(nèi)的各種用途。為了抑制飲食中的脂肪吸收，最好在 進(jìn)行用餐時(shí)同時(shí)攝取，將從茶中得到的有效成分強(qiáng)化后的飲料意義重大。特別是通過(guò)強(qiáng)化 這些成分，可提供以抗肥胖作用、促進(jìn)健康為目的的飲料。
[0014] 作為本發(fā)明的抗肥胖劑的抑制劑，與以往已知的來(lái)自天然物的a-葡萄糖苷酶相 t匕，使用少量即可抑制來(lái)自飲食的淀粉、多糖的糖分的分解，抑制吸收。而且因?yàn)槿我环N化 合物均是茶類中含有的兒茶素、多酚的氧化物，所以香味、安全性優(yōu)異，可長(zhǎng)期攝取。
[0015] 此外，本發(fā)明的抗肥胖劑，由于含有作為來(lái)自飲食經(jīng)驗(yàn)豐富的茶的成分的化合物， 所以可用于安全性高、副作用降低的醫(yī)藥組合物。 實(shí)施例
[0016] 下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實(shí)施例所述方 法僅僅是用于說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對(duì)本發(fā)明制備 方法的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例中用到的所有原料和溶劑均購(gòu)自 Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents公司；普海茶為普通商購(gòu)產(chǎn)品。
[0017] 實(shí)施例1 :式I化合的制備 (1)將普洱茶粉碎，溶解于適量氫氧化鈉水溶液中，充分?jǐn)嚢韬笕芙馔戤叺萌芤?。再?加乙酸至溶液pH值約為6-8 ;然后加入占粗品重量的10-40%的活性炭和20-40%的中性氧 化鋁，10-20°C攪拌脫色15-30min過(guò)濾，收集濾液； ⑵攪拌下向上述濾液中緩慢加入乙酸，控溫10-20°C攪拌至溶液pH值為6. 0±0. 2,攪 拌析出沉淀并養(yǎng)晶30分鐘；再繼續(xù)滴加乙酸，至溶液pH為5. 6~5. 8。緩慢降溫至5°C，用 時(shí)約30分鐘；在此溫度下攪拌結(jié)晶30分鐘；再繼續(xù)降溫至0~2°C，攪拌結(jié)晶1小時(shí)。過(guò) 濾收集沉淀；并用少量的丙酮對(duì)濾餅進(jìn)行淋洗。
[0018] (3)將濾餅取出后，在25~30°C，下真空干燥4h，得到黃色的式I化合物。
[0019] :H NMR(300MHz, CDC1 3) : 8 8. 66(s, 1H), 7. 39(s, 1H), 7. 33 -7. 28 (m, 2H), 7. 20 (s, 1H), 7. 08 - 7. 02 (m, 1H), 6. 83 (m, 2H), 4. 33 (t, J=6. 0Hz, 2H), 3. 78 (t, J =6. 3Hz, 2H), 3. 60 (s, 3H), 3. 08 (s, 1H), 2. 42 - 2. 32 (m, 2H). 實(shí)施例2 :生物活性測(cè)試 脂肪酶活性的測(cè)定，通過(guò)在底物中使用熒光性4-甲基傘形酮的油酸酯（4-MU0;Sigma 公司制），測(cè)定通過(guò)反應(yīng)生成的4-甲基傘形酮的熒光來(lái)實(shí)施。測(cè)定時(shí)緩沖液使用含有150mM NaCl、1. 36mM CaCl2& 13mM Tris-HCl (pH8. 0)。作為底物的 4-MU0,將形成 0? 1M 的 DMS0 溶 液后用上述緩沖液稀釋4000倍后供給酶測(cè)定，此外脂肪酶，同樣使用上述緩沖液將豬胰脂 肪酶（Sigma公司制）制成400U/ml溶液后供給酶測(cè)定。
[0020] 酶反應(yīng)是在25°C條件下，在96孔微孔板上添加并混合50 ill的4-MU0緩沖液溶 液、25 ii 1蒸饋水（或試樣水溶液）后，通過(guò)添加25 ii 1脂肪酶緩沖液溶液而開始。進(jìn)行30 分鐘反應(yīng)后，添加100 Pi的0. 1M檸檬酸緩沖液（pH4. 2)使反應(yīng)中止。用熒光微孔板檢測(cè) 儀（Labsystem公司制Fluoroskan Asent CF)測(cè)定通過(guò)反應(yīng)生成的4-甲基傘形酮的突光 (激發(fā)波長(zhǎng)355nm、突光波長(zhǎng)460nm)。
[0021] 被檢試樣的抑制活性，作為相對(duì)于對(duì)照（蒸餾水）的活性抑制50%所需的試樣量 IC5Q(y M)而求出。式I化合物的脂肪酶已知活性為0. 660。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用作抗肥胖劑的化合物，其特征在于以式I所示： 1〇2. -種抗肥胖的組合物，其特征在于含有式I化合物以及食物上可接受的助劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用作抗肥胖劑的化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示。I。
【IPC分類】C07D491/044, A61P3/04, A61K31/517, A23F3/16
【公開號(hào)】CN105713000
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410718567
【發(fā)明人】張華春
【申請(qǐng)人】重慶寧牧生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司