一種冬凌草甲素的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物化學領域，特別涉及一種利用色譜法從冬凌草中提取純化冬凌草甲素的方法。
【背景技術】
[0002]冬凌草為唇形科植物碎米極[Rabdosiarubescens (Hamst) C.Y.ffu.et Hsuan]的干燥地上部分，主要分布于我國黃河流域及其以南各地區(qū)，主產(chǎn)于河南太行山南麓各地。冬凌草具清熱解表消炎止痛健胃活血等功效，在抗腫瘤方面有較強的活性。冬凌草甲素為冬凌草的有效活性成分，它對各種移植性腫瘤細胞具有較大的殺傷、抑制增殖能力，臨床上主要用來治療胃癌、食道癌等癥。冬凌草甲素目前主要從冬凌草植物中分離純化得到，提取方法主要為乙醚提取法、乙醇提取法及中壓柱色譜法等，但這些提取工藝操作周期長，條件不易控制，得到的冬凌草甲素的含量低。冬凌草甲素在癌癥治療中的作用已引起了人們的重視，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其對肺癌、前列腺癌、乳腺癌等多種細胞株均有抑制作用。冬凌草為唇形科香茶屬多年生草本或亞灌木。冬凌草具有清熱解毒、消炎止痛、健胃活血之效。
[0003]冬凌草甲素又叫冬凌草素、延命草寧，四環(huán)二萜類物質，分子式C20H2806，分子量364.43，熔點248°C _250°C，微溶于水，溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。
[0004]本發(fā)明采用乙醇加熱回流提取，柱色譜法分離純化了冬凌草甲素，分離工藝簡單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，為進一步工業(yè)化純化冬凌草甲素提供了基礎。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種從冬凌草中提取并用動態(tài)軸向壓縮柱分離純化冬凌草甲素的生產(chǎn)方法，屬于天然產(chǎn)物的提取分離純化領域，包括醇提取、動態(tài)軸向壓縮柱分離、濃縮以及成品的純度檢測。
[0006]本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的采用如下步驟:
a、冬凌草甲素粗品的制備:將冬凌草干草粉末加熱回流提取，80%乙醇為溶劑，回流30min，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成稠膏狀；
b、樣品的溶解:將冬凌草甲素粗品用低濃度的乙醇水溶液溶解，過濾，上大孔吸附樹脂梯度洗脫；
C、上柱洗脫:用乙醇水溶液梯度洗脫,收集60-80%乙醇水洗脫液；
d、濃縮:對收集到的目標組分進行濃縮處理；
e、將上述濃縮液與適量的硅膠拌樣，干法上樣，用石油醚、丙酮混合溶劑梯度洗脫。
【具體實施方式】
[0007]實施方案一
1、提取:將粉末過60目篩后稱取10g置于提取器中，用600mL80%乙醇提取，加熱回流30min，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成膏； 2、樣品的溶解:濃縮物用低濃度的乙醇液溶解分散，備用；
3、上柱洗脫:用乙醇水溶液梯度洗脫,收集60-80%乙醇水洗脫液；
4、濃縮:對收集到的目標組分進行濃縮處理；
5、將上述濃縮液與適量的硅膠拌樣，干法上樣，用石油醚、丙酮混合溶劑梯度洗脫，收集石油醚:丙酮=10:7部位；
6、濃縮:將收集到的目標組分進行濃縮處理，得到冬凌草甲素粗品，得冬凌草甲素
9.5g，重結晶，純度約95.2%。
[0008]實施方案二
1、提取:將粉末過60目篩后稱取10g置于提取器中，用600mL80%乙醇提取，加熱回流30min，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用低濃度的乙醇液溶解分散，備用；
3、上柱洗脫:用乙醇水溶液梯度洗脫,收集60-80%乙醇水洗脫液；
4、濃縮:對收集到的目標組分進行濃縮處理；
5、將上述濃縮液與適量的硅膠拌樣，干法上樣，用石油醚、丙酮混合溶劑梯度洗脫，收集石油醚:丙酮=10:5部位；
6、濃縮:將收集到的目標組分進行濃縮處理，得到冬凌草甲素粗品，重結晶，得冬凌草甲素6.5g，純度約94.2%。
[0009]實施方案三
1、提取:將粉末過60目篩后稱取10g置于提取器中，用600mL80%乙醇提取，加熱回流30min，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用低濃度的乙醇液溶解分散，備用；
3、上柱洗脫:用乙醇水溶液梯度洗脫,收集60-80%乙醇水洗脫液；
4、濃縮:對收集到的目標組分進行濃縮處理；
5、將上述濃縮液與適量的硅膠拌樣，干法上樣，用石油醚、丙酮混合溶劑梯度洗脫，收集石油醚:丙酮=10:8部位；
6、濃縮:將收集到的目標組分進行濃縮處理，得到冬凌草甲素粗品，重結晶，得冬凌草甲素4.5g，純度約91.2%。
【主權項】
1.一種制備冬凌草甲素的方法，包括: a、冬凌草甲素粗品的制備:將冬凌草干草粉末加熱回流提取，80%乙醇為溶劑，回流30min，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成稠膏狀； b、樣品的溶解:將冬凌草甲素粗品用低濃度的乙醇水溶液溶解，過濾，上大孔吸附樹脂梯度洗脫； C、上柱洗脫:用乙醇水溶液梯度洗脫,收集60-80%乙醇水洗脫液； d、濃縮:對收集到的目標組分進行濃縮處理； e、將上述濃縮液與適量的硅膠拌樣，干法上樣，用石油醚、丙酮混合溶劑梯度洗脫。2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是a步驟中每次回流所用80%乙醇的用量為冬凌草干草粉末的6~12倍量。3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟b的大孔吸附樹脂為D101、D201、AB-8、HP20、AB8型大孔吸附樹脂的一種。4.如權利要求1所述的從冬凌草中制備冬凌草甲素的方法，其特征在于步驟e所述的石油醚、丙酮混合溶液比例為10:7。5.如權利要求1所述的從冬凌草中制備冬凌草甲素的方法，其特征在于步驟e所述的硅膠為100-200目。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物的提純方法，具體來說，本發(fā)明涉及一種制備高純度冬凌草甲素的方法及其工藝。采用反相硅膠或大空吸附樹脂柱填料，分離工藝簡單，成本低，無污染，先進、安全、適用的特點，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，為進一步工業(yè)化分離純化冬凌草甲素提供了基礎。
【IPC分類】C07D493/08
【公開號】CN105713006
【申請?zhí)枴緾N201410730340
【發(fā)明人】米文珍, 鄭曄
【申請人】魯艷清