一種金針菇多糖的分離純化方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種金針菇多糖的分離純化方法，該方法采用DEAE Cellulose-52離子交換柱層析法對(duì)金針菇多糖進(jìn)行分離純化，主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟。經(jīng)過(guò)DEAE Cellulose-52分離得到的金針菇組分，通過(guò)葡聚糖凝膠Sephadex G-100進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化。主要包括：Sephadex G-100預(yù)處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級(jí)純化，本發(fā)明采用上述分離純化的方法，不但操作簡(jiǎn)單，成本低廉，通過(guò)分離速度快，純化的濃度高，適合批量化推廣。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種金針菇多糖的分離純化方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種金針菇多糖的分離純化方法，屬于醫(yī)藥生物檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]金針菇屬真菌門(mén)，是目前國(guó)內(nèi)消費(fèi)量最大的食用菌類(lèi)之一，其不僅含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而且還含有多種生物活性物質(zhì)，據(jù)報(bào)道，金針菇能夠增強(qiáng)兒童生長(zhǎng)和智力發(fā)育，是一種藥食兩用菌類(lèi)。其不僅營(yíng)養(yǎng)成分齊全，還含有豐富的粗蛋白、碳水化合物、粗脂肪、粗纖維、煙酸、礦質(zhì)元素如鐵、鈣、磷、鈉燈，還含有金針菇多糖、免疫調(diào)節(jié)蛋白、黃酮類(lèi)、萜類(lèi)等多種生物活性成分。
[0003]金針菇多糖(FVP)是一個(gè)以葡聚糖為主，由數(shù)個(gè)多糖組分構(gòu)成的混合多糖，采用不同的提取分離方法得到的金針菇多糖，其分子量、單糖組成等分子結(jié)構(gòu)特征有所不同，具有的生物功能活性也各有差異。
[0004]金針菇多糖提取后得到的提取液中含有蛋白類(lèi)、色素、小分子可溶性物質(zhì)等，因此需要進(jìn)一步純化處理，多糖的分離純化主要包括去蛋白、去色素等小分子物質(zhì)、以及不同特性多糖的進(jìn)一步分離。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是:提供一種金針菇多糖的分離純化方法，提純速度快，純化速度高，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案
一種金針菇多糖的分離純化方法，該方法采用采用DEAE Cellulose-52離子交換柱層析法對(duì)金針菇多糖進(jìn)行分離純化，主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟。經(jīng)過(guò)DEAE Cellulose-52分離得到的金針燕組分,通過(guò)葡聚糖凝膠SephadexG-100進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化。主要包括:S^hadex G-100預(yù)處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級(jí)純化。
[0007]前述的一種金針菇多糖的分離純化方法中，具體步驟如下:
步驟一、DEAE Cellulose-52 預(yù)處理
稱(chēng)取DEAE Cellulose-52離子交換填料100g，用蒸餾水并浸泡使其充分吸水溶脹，并除去上層漂浮的細(xì)小顆粒。將充分溶脹后的DEAE纖維素膠體用布氏漏斗抽干，然后用0.5moI/LNaOH溶液浸泡3小時(shí)，抽干，用去離子水漂洗至中性，再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小時(shí)，抽干，用去麗水漂洗至中性；
步驟二、裝柱
將上述處理過(guò)得DEAE-52填料用去離子水懸浮攪勻，超聲除去懸液中的氣泡，然后沿壁緩慢加入柱高30cm，內(nèi)徑2.6cm的玻璃柱內(nèi)，靜止使膠體沉淀，用3_5倍柱體積的去離子水洗滌，是層析柱達(dá)到離子平衡狀態(tài)；
步驟三、多糖的初步分離純化金針菇多糖溶于蒸餾水，沿壁加入DEAE Cellulose-52離子交換柱，然后依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脫，恒流泵控制流速為lmL/min,自動(dòng)分布收集器收集洗脫液，苯酚-硫酸法追蹤檢測(cè)收集液中多糖含量，繪制洗脫曲線。選擇最佳棘手風(fēng)分段收集樣品，合并收集液后減壓濃縮，透析，東漢后得到金針菇多糖的DEAECellulose-52分離組分；Sephadex G-lOO凝膠色譜分離純化步驟四、Sephadex G-100的預(yù)處理
稱(chēng)取一定量的葡聚糖凝膠Sephadex G-100約20倍凝膠量的蒸餾水，置室溫下12小時(shí)進(jìn)行溶脹，然后用傾斜發(fā)除去表面懸浮的小顆粒；
步驟五、裝柱和平衡；
步驟六、金針菇多糖分級(jí)純化
將經(jīng)過(guò)DEAE柱分離得到的多糖組分分別配制5mg/mL的水溶液1ml,加入SephadexG-100葡聚糖凝膠柱，去離子水洗脫，自動(dòng)收集儀收集，用苯酚硫酸法哎波長(zhǎng)為490nm檢測(cè)各管的吸光度值，繪制洗脫曲線，選擇最佳吸收峰分段收集樣品，減壓濃縮，透析，凍干。
[0008]通過(guò)采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用上述分離純化的方法，不但操作簡(jiǎn)單，成本低廉，通過(guò)分離速度快，純化的濃度高，適合批量化推廣。

【具體實(shí)施方式】
[0009]下面本發(fā)明進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0010]本發(fā)明的實(shí)施例:
一種金針菇多糖的分離純化方法，該方法采用采用DEAE Cellulose-52離子交換柱層析法對(duì)金針菇多糖進(jìn)行分離純化，主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟。經(jīng)過(guò)DEAE Cellulose-52分離得到的金針燕組分,通過(guò)葡聚糖凝膠SephadexG-100進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化。主要包括:S^hadex G-100預(yù)處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級(jí)純化。
[0011]具體步驟如下:
步驟一、DEAE Cellulose-52 預(yù)處理
稱(chēng)取DEAE Cellulose-52離子交換填料100g，用蒸餾水并浸泡使其充分吸水溶脹，并除去上層漂浮的細(xì)小顆粒。將充分溶脹后的DEAE纖維素膠體用布氏漏斗抽干，然后用0.5moI/LNaOH溶液浸泡3小時(shí)，抽干，用去離子水漂洗至中性，再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小時(shí)，抽干，用去麗水漂洗至中性；
步驟二、裝柱
將上述處理過(guò)得DEAE-52填料用去離子水懸浮攪勻，超聲除去懸液中的氣泡，然后沿壁緩慢加入柱高30cm，內(nèi)徑2.6cm的玻璃柱內(nèi)，靜止使膠體沉淀，用3_5倍柱體積的去離子水洗滌，是層析柱達(dá)到離子平衡狀態(tài)；
步驟三、多糖的初步分離純化
金針菇多糖溶于蒸餾水，沿壁加入DEAE Cellulose-52離子交換柱，然后依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脫，恒流泵控制流速為lmL/min,自動(dòng)分布收集器收集洗脫液，苯酚-硫酸法追蹤檢測(cè)收集液中多糖含量，繪制洗脫曲線。選擇最佳棘手風(fēng)分段收集樣品，合并收集液后減壓濃縮，透析，東漢后得到金針菇多糖的DEAECellulose-52分離組分；Sephadex G-lOO凝膠色譜分離純化步驟四、Sephadex G-100的預(yù)處理
稱(chēng)取一定量的葡聚糖凝膠Sephadex G-1OO約20倍凝膠量的蒸餾水，置室溫下12小時(shí)進(jìn)行溶脹，然后用傾斜發(fā)除去表面懸浮的小顆粒；
步驟五、裝柱和平衡；
步驟六、金針菇多糖分級(jí)純化
將經(jīng)過(guò)DEAE柱分離得到的多糖組分分別配制5mg/mL的水溶液1ml,加入SephadexG-100葡聚糖凝膠柱，去離子水洗脫，自動(dòng)收集儀收集，用苯酚硫酸法哎波長(zhǎng)為490nm檢測(cè)各管的吸光度值，繪制洗脫曲線，選擇最佳吸收峰分段收集樣品，減壓濃縮，透析，凍干。
【權(quán)利要求】
1.一種金針菇多糖的分離純化方法，其特征在于:該方法采用采用DEAECellulose-52離子交換柱層析法對(duì)金針菇多糖進(jìn)行分離純化，主要包括DEAE填充料處理、裝柱、上樣、洗滌、收集、透析凍干等步驟， 經(jīng)過(guò)DEAE Cellulose-52分離得到的金針燕組分,通過(guò)葡聚糖凝膠Sephadex G-1OO進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化， 主要包括:S印hadex G-100預(yù)處理、裝柱和平衡、金針菇多糖分級(jí)純化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金針菇多糖的分離純化方法，其特征在于:具體步驟如下: 步驟一、DEAE Cellulose-52 預(yù)處理 稱(chēng)取DEAE Cellulose-52離子交換填料100g，用蒸餾水并浸泡使其充分吸水溶脹，并除去上層漂浮的細(xì)小顆粒， 將充分溶脹后的DEAE纖維素膠體用布氏漏斗抽干，然后用0.5mol/LNaOH溶液浸泡3小時(shí)，抽干，用去離子水漂洗至中性，再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡3小時(shí)，抽干，用去麗水漂洗至中性； 步驟二、裝柱 將上述處理過(guò)得DEAE-52填料用去離子水懸浮攪勻，超聲除去懸液中的氣泡，然后沿壁緩慢加入柱高30cm，內(nèi)徑2.6cm的玻璃柱內(nèi)，靜止使膠體沉淀，用3_5倍柱體積的去離子水洗滌，是層析柱達(dá)到離子平衡狀態(tài)； 步驟三、多糖的初步分離純化 金針菇多糖溶于蒸餾水，沿壁加入DEAE Cellulose-52離子交換柱，然后依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCI水溶液洗脫，恒流泵控制流速為lmL/min,自動(dòng)分布收集器收集洗脫液，苯酚-硫酸法追蹤檢測(cè)收集液中多糖含量，繪制洗脫曲線， 選擇最佳棘手風(fēng)分段收集樣品，合并收集液后減壓濃縮，透析，東漢后得到金針菇多糖的DEAE Cellulose-52分離組分；Sephadex G-100凝膠色譜分離純化步驟四、Sephadex G-100的預(yù)處理 稱(chēng)取一定量的葡聚糖凝膠Sephadex G-100約20倍凝膠量的蒸餾水，置室溫下12小時(shí)進(jìn)行溶脹，然后用傾斜發(fā)除去表面懸浮的小顆粒； 步驟五、裝柱和平衡； 步驟六、金針菇多糖分級(jí)純化 將經(jīng)過(guò)DEAE柱分離得到的多糖組分分別配制5mg/mL的水溶液1ml,加入SephadexG-100葡聚糖凝膠柱，去離子水洗脫，自動(dòng)收集儀收集，用苯酚硫酸法哎波長(zhǎng)為490nm檢測(cè)各管的吸光度值，繪制洗脫曲線，選擇最佳吸收峰分段收集樣品，減壓濃縮，透析，凍干。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104497156SQ201410794357
【公開(kāi)日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月21日
【發(fā)明者】曾丹 申請(qǐng)人:曾丹