1.一種B族鏈球菌熒光定量PCR檢測引物及對應(yīng)探針,其特征在于,所述引物及對應(yīng)探針包括用于擴增檢測B族鏈球菌的sip上下游引物、sip Taqman探針和用于擴增檢測人β-actin的人β-actin上下游引物、人β-actin Taqman探針,sip上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;sip下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;sip Taqman探針的核苷酸序列如:SEQ ID NO:3所示;人β-actin上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;人β-actin下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示;人β-actin Taqman探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物及對應(yīng)探針,其特征在于,所述sip Taqman探針5’端標記熒光報告基團,3’端標記熒光淬滅基團;所述人β-actin Taqman探針5’端標記熒光報告基團,3’端標記熒光淬滅基團。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物及對應(yīng)探針,其特征在于,所述sip Taqman探針5’端標記的熒光報告基團為FAM熒光基團,3’端標記的熒光淬滅基團為BHQ1;人β-actin Taqman探針5’端標記的熒光報告基團為HEX熒光基團,3’端標記的熒光淬滅基團為BHQ1。
4.如權(quán)利要求1~3任一權(quán)利要求所述的B族鏈球菌熒光定量PCR檢測引物、探針在制備B族鏈球菌檢測試劑中的用途。
5.一種B族鏈球菌熒光定量PCR檢測試劑盒,所述試劑盒包括PCR擴增反應(yīng)液,所述PCR擴增反應(yīng)液中含有如權(quán)利要求1~3任一權(quán)利要求所述的B族鏈球菌熒光定量PCR檢測引物、探針。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒,其特征在于,所述PCR擴增反應(yīng)液的組成中,sip上游引物的終濃度為0.2pmol/μL,sip下游引物的終濃度為0.2pmol/μL,sip Taqman探針的終濃度為0.4pmol/μL;人β-actin上游引物的終濃度為0.2pmol/μL,人β-actin下游引物的終濃度為0.2pmol/μL,人β-actin Taqman探針的終濃度為0.4pmol/μL。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒中還含有陽性對照,所述陽性對照為含有B族鏈球菌保守序列的質(zhì)?;驕缁畹腂族鏈球菌培養(yǎng)液。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒中還含有陰性對照,所述陰性對照為不含有B族鏈球菌的溶液、無菌水或生理鹽水。
9.如權(quán)利要求5~8任一權(quán)利要求所述試劑盒的使用方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)提取樣本DNA,即制備DNA模板;
2)加樣:將樣本DNA、陽性對照或陰性對照分別加入裝有PCR擴增反應(yīng)液的PCR管中,獲得對應(yīng)的樣本反應(yīng)管、陽性反應(yīng)管或陰性反應(yīng)管;
3)PCR擴增:反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,設(shè)置循環(huán)參數(shù),進行PCR擴增;
4)PCR反應(yīng)結(jié)束后,檢測PCR反應(yīng)體系的熒光信號值,熒光通道選用FAM、HEX。