1.一種制備用于細(xì)胞培養(yǎng)基中的泊洛沙姆的方法,包括步驟:
(a)將固體泊洛沙姆加熱到至少約60℃,形成液體泊洛沙姆;和
(b)將液體泊洛沙姆冷卻至低于約50℃的溫度,形成固體熱處理過的泊洛沙姆,其中冷卻不在造粒或研磨設(shè)備中進(jìn)行,并且其中泊洛沙姆包含環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的共聚物。
2.權(quán)利要求1的方法,其中與包含步驟(a)之前的泊洛沙姆的細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞生存力相比,包含熱處理過的泊洛沙姆的細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞生存力提高。
3.權(quán)利要求1或2的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約60℃至約185℃。
4.權(quán)利要求3的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約157℃至約185℃。
5.權(quán)利要求4的方法,其中加熱泊洛沙姆到約157℃至約185℃并且至少1分鐘。
6.權(quán)利要求5的方法,其中加熱泊洛沙姆到約157℃至約185℃并且1分鐘至約250分鐘。
7.權(quán)利要求3的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約134℃至約157℃。
8.權(quán)利要求7的方法,其中加熱泊洛沙姆到約134℃至約157℃并且至少1分鐘。
9.權(quán)利要求8的方法,其中加熱泊洛沙姆到約134℃至約157℃并且1分鐘至約250分鐘。
10.權(quán)利要求3的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約120℃至約134℃。
11.權(quán)利要求10的方法,其中加熱泊洛沙姆到約120℃至約134℃并且至少約62分鐘。
12.權(quán)利要求11的方法,其中加熱泊洛沙姆到約120℃至約134℃并且約62分鐘至約250分鐘。
13.權(quán)利要求3的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約100℃至約120℃。
14.權(quán)利要求13的方法,其中加熱泊洛沙姆到約100℃至約120℃并且至少約98分鐘。
15.權(quán)利要求14的方法,其中加熱泊洛沙姆到約100℃至約120℃并且約98分鐘至約250分鐘。
16.權(quán)利要求3的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約80℃至約100℃。
17.權(quán)利要求16的方法,其中加熱泊洛沙姆到約80℃至約100℃并且至少約122分鐘。
18.權(quán)利要求17的方法,其中加熱泊洛沙姆到約80℃至約100℃并且約122分鐘至約250分鐘。
19.權(quán)利要求3的方法,其中步驟(a)中加熱泊洛沙姆到約60℃至約80℃。
20.權(quán)利要求16的方法,其中加熱泊洛沙姆到約60℃至約80℃并且至少約143分鐘。
21.權(quán)利要求17的方法,其中加熱泊洛沙姆到約60℃至約80℃并且約143分鐘至約250分鐘。
22.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法,其中與包含步驟(a)之前的泊洛沙姆的細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞生存力相比,包含熱處理過的泊洛沙姆的細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞生存力提高至少10%。
23.權(quán)利要求22的方法,其中細(xì)胞生存力提高至少約20%。
24.權(quán)利要求22的方法,其中細(xì)胞生存力提高至少約30%。
25.權(quán)利要求1-24任一項(xiàng)的方法,其中包含步驟(a)之前的泊洛沙姆的細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)胞生存力在約3小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)后低于約80%。
26.權(quán)利要求1-25任一項(xiàng)的方法,其中步驟(b)中,在環(huán)境溫度、約2℃至約8℃、或低于0℃,冷卻液體泊洛沙姆。
27.權(quán)利要求1-26任一項(xiàng)的方法,其中在真空下加熱泊洛沙姆。
28.權(quán)利要求1-27任一項(xiàng)的方法,其中冷卻液體泊洛沙姆至少約20分鐘。
29.權(quán)利要求1-28任一項(xiàng)的方法,其中將步驟(b)中產(chǎn)生的熱處理過的泊洛沙姆加入細(xì)胞培養(yǎng)基中。
30.權(quán)利要求1-29任一項(xiàng)的方法,其中在將熱處理過的泊洛沙姆加入細(xì)胞培養(yǎng)基之前,將步驟(a)和(b)重復(fù)至少一次。
31.權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)的方法,其中在步驟(a)之前,泊洛沙姆已經(jīng)通過造粒工藝進(jìn)行過處理。
32.權(quán)利要求1-31任一項(xiàng)的方法,其中泊洛沙姆具有分子式HO(C2H4O)n(C3H6O)m(C2H4O)nH,其中n為約60至約150,且m為約25至約60。
33.權(quán)利要求1-32任一項(xiàng)的方法,其中泊洛沙姆具有約55℃的熔化溫度。
34.權(quán)利要求1-33任一項(xiàng)的方法,其中泊洛沙姆具有約6,000至約18,000道爾頓的平均分子量。
35.權(quán)利要求1-33任一項(xiàng)的方法,其中泊洛沙姆包含具有分子式HO(C2H4O)n(C3H6O)m(C2H4O)nH的共聚物,其中n具有約80的值,m具有約27的值,并且該泊洛沙姆具有約7680至約9510g/mol的平均分子量。
36.權(quán)利要求1-33任一項(xiàng)的方法,其中泊洛沙姆是泊洛沙姆188。
37.權(quán)利要求1-36任一項(xiàng)的方法,其中細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
38.權(quán)利要求37的方法,其中細(xì)胞是中國(guó)倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。
39.權(quán)利要求1-38任一項(xiàng)的方法,其中細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞。
40.權(quán)利要求1-39任一項(xiàng)的方法,其中細(xì)胞產(chǎn)生多肽。
41.通過權(quán)利要求1-40任一項(xiàng)的方法制備的泊洛沙姆。
42.包含權(quán)利要求41的泊洛沙姆的細(xì)胞培養(yǎng)基。
43.權(quán)利要求42的細(xì)胞培養(yǎng)基,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含約0.1g/L至約10g/L的熱處理過的泊洛沙姆。
44.權(quán)利要求43的細(xì)胞培養(yǎng)基,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含約0.1g/L至約3g/L的熱處理過的泊洛沙姆。
45.權(quán)利要求43的細(xì)胞培養(yǎng)基,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含約3g/L至約10g/L的熱處理過的泊洛沙姆。
46.一種在細(xì)胞培養(yǎng)中生產(chǎn)多肽的方法,包括步驟:在適于多肽產(chǎn)生的條件下在細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生多肽的細(xì)胞,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含權(quán)利要求41的泊洛沙姆。
47.權(quán)利要求46的方法,其中細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
48.權(quán)利要求46的方法,其中細(xì)胞是中國(guó)倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。
49.權(quán)利要求46的方法,其中細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞。
50.權(quán)利要求46-49任一項(xiàng)的方法,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含約0.1g/L至約10g/L的熱處理過的泊洛沙姆。
51.權(quán)利要求50的方法,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含約0.1g/L至約3g/L的熱處理過的泊洛沙姆。
52.權(quán)利要求50的方法,其中細(xì)胞培養(yǎng)基包含約3g/L至約10g/L的熱處理過的泊洛沙姆。
53.權(quán)利要求46-52任一項(xiàng)的方法,其中多肽是抗體或其抗原結(jié)合片段。
54.一種制備用于細(xì)胞培養(yǎng)基中的泊洛沙姆的方法,包括步驟:
(a)將泊洛沙姆加熱到約80℃至約100℃,形成液體泊洛沙姆;和
(b)將液體泊洛沙姆冷卻至低于約50℃的溫度,形成固體熱處理過的泊洛沙姆,其中冷卻不在造?;蜓心ピO(shè)備中進(jìn)行;
其中泊洛沙姆包含環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的共聚物。