本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種二苯乙烯和二苯乙烷類化合物的磷酰氨基酸及其衍生物的制備及用途。

背景技術(shù)：

二苯乙烯和二苯乙烷類化合物廣泛存在于自然界中，具有多種生物活性。二苯乙烯分為順式二苯乙烯與反式二苯乙烯，兩種構(gòu)型在自然界都有存在。反式構(gòu)型常以苷元或苷存在于天然植物中比較多，白藜蘆醇和紫檀芪是該類化合物的代表。白藜蘆醇(化學(xué)名：(e)-3，4′，5-三羥基二苯乙烯)又稱為芪三酚，主要來源于花生、葡萄(紅葡萄酒)、虎杖、桑椹等植物，是一種生物性很強的天然多酚類物質(zhì)，是腫瘤的化學(xué)預(yù)防劑，也是對降低血小板聚集，預(yù)防和治療動脈粥樣硬化、心腦血管疾病的化學(xué)預(yù)防劑。而紫檀芪(pterostilbene，pte，化學(xué)名：(e)-3，5-二甲氧基-4′-羥基苯乙烯)，作為白藜蘆醇的一種天熱的甲基化產(chǎn)物衍生物，最初是在紫檀中提取發(fā)現(xiàn)的，隨后在藍莓、葡萄和花櫚木等植物和蜂膠中發(fā)現(xiàn)過它的身影。有報道稱，紫檀芪具有抗癌、抗炎、抗氧化和鎮(zhèn)痛劑的作用[remsbergcm，yanezja，ohgamiy，etal.pharmacometricsofpterostilbene：preclinicalpharmacokineticsandmetabolism，anticancer，anti-inflammatory，antioxidantandanalgesicactivity[j].phytotherres，2008，22(2)：169-179.]。而作為抗癌藥物，紫檀芪也表現(xiàn)出對hepg2細胞[劉盛楠，邵淑麗，張偉偉等.紫檀芪對人肝癌hepg2細胞增殖及凋亡的影響[j].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué).2015，34(8)：1617-1624.]，mda-mb-231細胞[黃海進，焦峰，何秀芝.紫檀芪對人乳腺癌mda-mb-231細胞系增殖及凋亡的影響[j].山東醫(yī)藥.2012，52(44)：53-55.]等較好的活性。

有關(guān)順式二苯乙烯類天然產(chǎn)物的報道主要來自于從南非的一種灌木(combretumcaffrum)中分離出來一系列具有二苯乙烯類結(jié)構(gòu)的活性組分，藥理研究表明，該類化合物顯示出特異性靶向和破壞已生成的腫瘤血管，因此能強效攻擊活體腫瘤，導(dǎo)致腫瘤從內(nèi)到外徹底死亡，其中以combretastatina-4(化學(xué)名：(z)-3，4，5-三甲氧基-3’-羥基-4’-甲氧基二苯乙烯，以下簡稱：ca4)的活性最好(srivastava，v.，etal.bioorg.med.chem.2005，13，5892-5908；dzierzbicka，k.，etal.polishj.chem.，2004，78，323-341.)。有關(guān)ca4的進一步的研究表明，此類化合物不僅能夠阻斷腫瘤血供對腫瘤細胞有抑制作用而且也能抑制微管蛋白的聚合這極大的引起了科學(xué)工作者的興趣，隨后對ca-4展開了一系列的合成修飾等研究。歷經(jīng)多年的發(fā)展，很多ca4衍生物被合成出來，而且已經(jīng)有制藥公司將ca-4做成前藥用于臨床，例如它的磷酸酯二鈉鹽前藥(化學(xué)名：(z)-3，4，5-三甲氧基-4’-甲氧基二苯乙烯-3’-o-磷酸二鈉鹽，以下簡稱ca4p)在1/10mtd時就能顯著地降低腫瘤血管的血流量，最終導(dǎo)致腫瘤壞死。ca4p是全球第一個進入臨床研究的腫瘤血管破壞藥物，目前已進入了iii期臨床研究。

ca4具有與其它抑制微管聚合的抗癌藥物相同的結(jié)構(gòu)特征——二苯乙烯，其中有三個甲氧基的環(huán)為a環(huán)，另一個為b環(huán)(medarde，m.，etal.bioorg.med.chem.lett.1999，9，2303-2308)。hamel等的假設(shè)模型認為ca4的a，b兩環(huán)分別與微管蛋白的α和β鏈上兩個相離的位點作用，從而引起腫瘤血管內(nèi)皮細胞的凋亡，這導(dǎo)致很多研究者把研究的重點放在兩環(huán)之間的烯鍵。而分子結(jié)構(gòu)中烯鍵的存在就必然有順反異構(gòu)的問題，因此研究者對其比較了順式和反式。經(jīng)研究表明順式比反式明顯有較高的活性(cushman，m.，etal.j.med.chem.，1991，34，2579-2588.nam，n.h.，etal.bioorg.med.chem.lett.，2002，12，1955-1958.)。其次，把烯鍵改成碳的數(shù)目為0～4的飽和碳鏈，活性實驗結(jié)果顯示除了碳數(shù)目為2的化合物保留有活性外，其余的化合物都沒有活性(getahun，z.，etal.j.med.chem.，1992，35，1058-1067.)。在烯鍵上引入取代基的報道也有較多(hadfield，j.a.，etal.eur.j.med.chem.，2005，40，529-541.pinney，k.g.，etal.bioorg.med.chem.2000，8，2417-2425.borrel，c.etal.bioorg.med.chem.2005，13，3853-3864.)，但是所合成的衍生物活性并不高。另外，國外也有對ca-4進行拼接嵌合的報道。coggiola等(coggiola，b.，pagliai，f.，allegrone，g.etal..bioorg.med.chem.lett.2005，15，3551-3554.)把氮芥類藥物結(jié)構(gòu)中的有效部分帶到ca4中，合成了化合物通過實驗發(fā)現(xiàn)其對微管蛋白聚合有很好的抑制作用。toki等(pettit，g.r.，toki，b.，herald，d.l.etal.j.med.chem.1998，41，1688-1695.)通過研究與腫瘤迅速增殖相關(guān)的酶的作用，設(shè)計并合成出了新的ca4前藥可在某種酶的作用下分解成為ca4。這種設(shè)計思路，為ca4前藥的研究開辟了新的方向和研究領(lǐng)域，但是到目前為止尚未發(fā)現(xiàn)具有更高活性的化合物。

毛蘭素(化學(xué)名：3，4，5-三甲氧基-3’-羥基-4’-甲氧基二苯乙烷，代號：mls)是一種天然的二苯乙烷類化合物，在結(jié)構(gòu)上與ca4類似，是乙烯基橋被氫化了的ca4，同樣是一種具有抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物，是從我國名貴中藥材石斛中提取出來的。石斛除了具有滋陰養(yǎng)胃，清熱生津，潤肺止咳，明目強身的傳統(tǒng)功效外，現(xiàn)代藥理學(xué)研究還發(fā)現(xiàn)其有抗腫瘤、抗衰老、增強體質(zhì)和免疫力、擴張血管、減輕肝損傷的作用。

我們通過研究發(fā)現(xiàn)將二苯乙烯類化合物的雙鍵氫化后形成的二苯乙烷類衍生物3，4，5-三甲氧基-3’-羥基-4’-乙氧基二苯乙烷(ebt)的4’-位-乙氧基和3’-位羥基同樣具有協(xié)同作用，且與ca4相比其抗腫瘤效果有顯著提高(吳范宏等，一種乙氧基二苯乙烷衍生物及其制備方法和用途，國際公布號us2012/0046492a1；一種3，4，5-三甲氧基-3’-羥基-4’-烷氧基二苯乙烷的制備方法cn103539642)。將雙鍵改造成飽和鍵后，由于不存在順反式異構(gòu)體的變化，相關(guān)理化性質(zhì)比ca4更穩(wěn)定，化合物的制備工藝更加簡便，合成收率顯著提高，而原料損耗和單位合成成本大大降低。在此工作基礎(chǔ)上，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)將二苯乙烯和二苯乙烷類化合物與氨基酸片段通過磷酸酯和磷酸酰胺鍵起來，形成新穎結(jié)構(gòu)的抗腫瘤藥物分子。在同等條件下比較，顯示出優(yōu)于ca4和ca4p的抗腫瘤活性，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

1、本發(fā)明提供一種二苯乙烯和二苯乙烷類化合物的磷酰氨基酸及其衍生物及其制備方法與用途，其結(jié)構(gòu)如通式(i)：

其中：

1)r1、r2、r3為羥基、烷基、氟取代的烷基、烷氧基、氟取代的烷氧基等，優(yōu)選甲氧基和氟取代的甲氧基。

2)r4為羥基、烷基、氟取代的烷基、烷氧基和氟取代的烷氧基，優(yōu)選甲氧基和乙氧基等。

3)r5為氫、烷基或芳基，優(yōu)選苯基。

4)r6為氫、烷基、取代的烷基。

5)r7為烷基、烷氧基、羥基、氨基、取代的胺基、氨基酸及其衍生物等，優(yōu)選烷氧基。

6)“---”為鍵或不存在。

2、本發(fā)明提供了一種通式(i)化合物中二苯乙烯類化合物磷酰氨基酸及其衍生物的制備方法，由二苯乙烯片段(ii)、氨基酸衍生物片段(iii)和二氯磷酸酯(iv)合成得到。

具體操作包括：

1)將所用的胺(iii)溶于二氯甲烷中，在低溫下滴加三乙胺；

2)向上述所述的反應(yīng)液中滴加二氯磷酸酯(iv)的二氯甲烷溶液；

3)再向以上的反應(yīng)液中滴加二苯乙烯中間體(ii)與三乙胺的混合溶液，反應(yīng)完畢經(jīng)后處理得到產(chǎn)物通式(i)所述產(chǎn)物。

3、提供了一種通式(i)上化合物在制備治療微管蛋白聚集抑制劑中的應(yīng)用。

4、上述通式(i)上化合物在制備作為抗腫瘤血管破壞劑，對各種腫瘤具有血管靶向作用的藥物中的應(yīng)用。所述各種腫瘤主要包括有：肺癌、非小細胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睪丸癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、膀朧癌、子宮頸癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓狀癌、支氣管癌、骨細胞癌、上皮癌、膽管癌、絨毛膜癌、胚癌、精原細胞癌、維爾姆斯癌、膠質(zhì)細胞癌、星形細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血細胞瘤、聲帶神經(jīng)瘤、腦膜瘤、成神經(jīng)細胞瘤、成視神經(jīng)細胞瘤、成視網(wǎng)膜細胞瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維肉瘤、成纖維細胞瘤、纖維瘤、纖維腺瘤、纖維軟骨瘤、纖維囊瘤、纖維粘液瘤、纖維骨瘤、纖維粘液肉瘤、纖維乳頭狀瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液軟骨瘤、粘液軟骨肉瘤、粘液軟骨纖維肉瘤、粘液腺瘤、成粘液細胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂細胞瘤、脂肪軟骨瘤、脂肪纖維瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、軟骨肉瘤、軟骨瘤、軟骨肌瘤、脊索瘤、絨毛膜腺瘤、絨毛上皮瘤、成絨毛膜細胞瘤、骨肉瘤、成骨細胞瘤、骨軟骨纖維瘤、骨軟骨肉瘤、骨軟骨瘤、骨囊瘤、骨牙質(zhì)瘤、骨纖維瘤、骨纖維肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管軟骨瘤、成血管細胞瘤、血管角質(zhì)瘤、血管神經(jīng)膠質(zhì)瘤、血管內(nèi)皮瘤、血管纖維瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神經(jīng)瘤、血管粘液瘤、血管網(wǎng)狀內(nèi)皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纖維瘤、淋巴細胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴細胞瘤、內(nèi)皮瘤、成內(nèi)皮細胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、間皮瘤、結(jié)締組織瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纖維瘤、橫紋肌瘤、橫紋肌肉瘤、橫紋肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病細胞、紅細胞增多癥、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤。

5、上述所述通式(i)上化合物在制備治療非正常新生血管引起的疾病的藥物中的應(yīng)用，所述的疾病主要包括有：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病視網(wǎng)膜病、早熟視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜靜脈閉塞、牛皮癬、紅斑痤瘡、卡波濟肉瘤、特異性反應(yīng)性角膜炎、流行性角膜結(jié)膜炎、新生血管性青光眼、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、單純性疤疹感染、帶狀疤疹感染、原生動物感染、分支桿菌感染、多動脈炎、肉樣瘤、鞏膜炎、潮紅、口干眼燥關(guān)節(jié)炎綜合癥、全身性紅斑狼瘡、艾滋病綜合癥、梅毒。

6、上述通式(i)上化合物在制備作為抗腫瘤藥物，測試對各種腫瘤具有抗腫瘤作用的藥物中的應(yīng)用。所測試腫瘤種類有：宮頸癌細胞hela、胃癌細胞mkn45、乳腺癌細胞mcf-7、結(jié)腸癌細胞hct-116、人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mda-mb-231、人甲狀腺癌細胞sw579等。

7、上述所述通式(i)上化合物藥效、安全評價結(jié)果綜述如下：

1)通過細胞毒性實驗(mtt)檢測的化合物抗腫瘤活性的評價。所測試腫瘤種類有：宮頸癌細胞hela、胃癌細胞mkn45、乳腺癌細胞mcf-7、結(jié)腸癌細胞hct-116、肺癌細胞a549。結(jié)果表明：所測試化合物中，化合物sit-108所顯示活性稍次于其他化合物，但也優(yōu)于ca4p?；衔飐it-116的化合物對多種腫瘤具有抗腫瘤活性，顯示出廣譜抗腫瘤活性，且其活性測試ic50值均較ca4p的為低，表明sit-116的抗腫瘤活性要優(yōu)于ca4p。對于胃癌細胞mkn45，只有化合物sit-116表現(xiàn)出抗腫瘤活性。對于宮頸癌細胞hela，化合物sit-116表現(xiàn)出最優(yōu)抗腫瘤活性；對于其余癌細胞，化合物sit-116基本上表現(xiàn)出最差抗腫瘤活性。這說明化合物sit-116抗腫瘤譜較廣，活性優(yōu)于ca4p，但次于所測的其他化合物。

2)通過采用cck-8法測試化合物對多種耐藥型腫瘤細胞株，如人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mda-mb-231、人甲狀腺癌細胞sw579等細胞的體外細胞毒活性及強度，結(jié)果表明：化合物對人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人乳腺癌細胞mda-mb-231、人甲狀腺癌細胞sw579等細胞具有不同程度的抑制細胞增殖的活性。

3)化合物sit-108、sit-109、sit-111、sit-115、sit-116、sit-117等對人胃癌細胞mgc-803具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下?；衔飐it-108、sit-109、sit-111、sit-116、sit-117等對人肝癌細胞hepg2具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下，化合物sit-115對人肝癌細胞hepg2亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-40μm之間?；衔飐it-108、sit-109、sit-111、sit-116等對人肺癌細胞a549具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下，化合物sit-115、sit-117對人肺癌細胞a549亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-40μm之間。化合物sit-108、sit-111、sit-116、sit-117等對人甲狀腺癌細胞sw579具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下，sit-115對人甲狀腺癌細胞sw579亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-50μm之間?；衔飐it-108、sit-109、sit-116、sit-117等對人乳腺癌細胞mda-mb-231具有顯著的細胞毒活性，其ic50值在10μm以下；化合物sit-111、sit-115對人乳腺癌細胞mda-mb-231亦具有明顯的細胞毒活性，其ic50值在10μm-50μm之間。

8、本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)ca4類似物經(jīng)磷酸酯拼接多種氨基酸衍生物所得化合物確實對多種腫瘤細胞具有明顯細胞毒活性，在相同條件下比較，確實顯示出優(yōu)于ca4和ca4p的抗腫瘤活性。這也說明此類將ca4及類似物進行某些藥效基團或小分子拼接的設(shè)計確實有助于藥效的提高。而且本發(fā)明的實驗方法路線簡單，操作簡便，合成周期短。

具體實施方式

為了能夠更清楚地理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，現(xiàn)結(jié)合實施例進一步說明如下：

實施例1[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-亮氨酸甲酯(代號：sit-109)的制備

向三口瓶中加入l-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(1.82g，10mmol)和二氯甲烷(30ml)，攪拌溶解，冰浴冷卻，加入三乙胺(2.81ml，20mmol)，攪拌30min后，向該反應(yīng)液中緩慢滴加入ca4(3.16g，10mmol)和三乙胺(1.40ml，10mmol)的ch2cl2混合溶液(30ml)，加畢，繼續(xù)攪拌反應(yīng)4h，tlc檢測顯示反應(yīng)完畢，加水淬滅，二氯甲烷萃取，分液，有機相依次用稀鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、食鹽水和水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干，粗品經(jīng)柱色譜分離(pe/ea＝2/1)得產(chǎn)品為淺黃色油狀物(2.82g，收率47％)。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(dd，j＝9.1，6.2hz，2h)，7.26-7.18(m，3h)，7.14(t，j＝6.9hz，1h)，7.07(d，j＝8.4hz，1h)，6.78(dd，j＝11.9，8.6hz，1h)，6.49(s，2h)，6.43(s，2h)，4.12(dd，j＝14.6，7.5hz，1h)，3.81(d，j＝17.2hz，6h)，3.65(dd，j＝28.5，8.0hz，9h)，1.56-1.42(m，2h)，0.91-0.86(m，3h)，0.84(dd，j＝6.2，4.5hz，3h)；ms(m/z)：599(m+)；hrms：calcd.599.2284，found599.2121。

實施例2[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)甘氨酸甲酯(sit-116)的制備

向三口瓶中加入l-亮氨酸甲酯鹽酸鹽(1.82g，10mmol)和二氯甲烷(30ml)，攪拌溶解，冰浴冷卻，加入三乙胺(2.81ml，20mmol)，攪拌30min后，向該反應(yīng)液中緩慢滴加入毛蘭素(3.18g，10mmol)和三乙胺(1.40ml，10mmol)的ch2cl2混合溶液(30ml)，加畢，繼續(xù)攪拌反應(yīng)4h，tlc檢測顯示反應(yīng)完畢，加水淬滅，二氯甲烷萃取，分液，有機相依次用稀鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉、食鹽水和水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋干，粗品經(jīng)柱色譜分離(pe/ea＝2/1)得產(chǎn)品為淺黃色油狀物(2.45g，收率45％)，。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(t，j＝7.8hz，2h)，7.29(d，j＝8.6hz，2h)，7.18(t，j＝7.6hz，1h)，6.93(d，j＝8.3hz，1h)，6.86(d，j＝8.3hz，1h)，6.79(dd，j＝17.9，8.1hz，1h)，6.39(d，j＝4.5hz，2h)，4.18(q，j＝7.1hz，2h)，3.83(d，j＝4.5hz，14h)，2.82(d，j＝5.9hz，4h)，1.25(t，j＝7.1hz，3h)；ms(m/z)：559(m+)；hrms：calcd.559.19712，found559.18135。

實施例3[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-丙氨酸異丙酯(代號：sit-105)的制備

操作同實施例1，以3mmol投料，得0.97g，產(chǎn)率55.22％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(t，j＝7.5hz，2h)，7.22(d，j＝7.5hz，3h)，7.15(t，j＝6.9hz，1h)，7.07(d，j＝8.3hz，1h)，6.79(t，j＝8.0hz，1h)，6.48(d，j＝1.8hz，2h)，6.43(s，2h)，5.01-4.94(m，1h)，4.10(dd，j＝16.5，9.7hz，1h)，3.82(t，j＝6.1hz，6h)，3.68(s，6h)，1.33(t，j＝7.2hz，3h)，1.21(dd，j＝12.0，6.0hz，6h).

實施例4[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-纈氨酸甲酯(代號：sit-106)的制備

操作同實施例1，以10mmol投料，得3.1042g，產(chǎn)率53.01％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.29(t，j＝7.7hz，2h)，7.22(t，j＝7.6hz，3h)，7.13(t，j＝7.2hz，1h)，7.06(d，j＝8.4hz，1h)，6.80-6.75(m，1h)，6.46(d，j＝15.8hz，2h)，6.40(d，j＝12.5hz，2h)，3.99-3.92(m，1h)，3.83-3.79(m，6h)，3.64(dd，j＝25.6，7.2hz，10h)，2.03(s，1h)，0.87-0.82(m，3h)，0.82-0.77(m，3h).

實施例5[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-環(huán)丙氨酸乙酯(代號：sit-107)的制備

操作同實施例1，以10mmol規(guī)模投料，得2.94g，產(chǎn)率50.38％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.32(t，j＝7.8hz，2h)，7.25(d，j＝6.9hz，3h)，7.16(t，j＝7.2hz，1h)，7.08(d，j＝8.4hz，1h)，6.80(d，j＝8.5hz，1h)，6.49(d，j＝13.3hz，2h)，6.44(t，j＝6.9hz，2h)，4.05(dd，j＝7.2，3.4hz，2h)，3.86-3.69(m，12h)，1.45-1.37(m，2h)，1.26(ddd，j＝15.6，13.0，4.9hz，2h)，1.16(t，j＝7.1hz，3h).

實施例6[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-甘氨酸乙酯(代號：sit-108)的制備

操作同實施例1，以10mmol投料，得2.7445，產(chǎn)率49.23％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.32(t，j＝7.8hz，2h)，7.24(d，j＝8.8hz，3h)，7.16(t，j＝7.2hz，1h)，7.08(d，j＝8.4hz，1h)，6.80(d，j＝8.5hz，1h)，6.47(d，j＝9.7hz，2h)，6.43(d，j＝13.0hz，2h)，4.18(q，j＝7.1hz，2h)，3.83(d，j＝2.9hz，6h)，3.69(s，6h)，2.04(s，2h)，1.26(t，j＝7.1hz，6h).

實施例7[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-苯丙氨酸甲酯(代號：sit-110)的制備

操作同實施例1，以10mmol投料，產(chǎn)量3.5702g，產(chǎn)率56.4％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(dd，j＝15.5，7.7hz，2h)，7.21(dd，j＝15.0，7.2hz，6h)，7.14(dd，j＝14.8，7.4hz，1h)，7.08(t，j＝7.0hz，1h)，7.00(dd，j＝9.0，5.7hz，2h)，6.77(dd，j＝8.4，2.7hz，1h)，6.51-6.40(m，4h)，4.45(qd，j＝9.6，5.2hz，1h)，3.82(s，3h)，3.73(d，j＝9.0hz，3h)，3.65(s，6h)，3.58(d，j＝21.5hz，3h)，3.12-2.90(m，2h).

實施例8[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-谷氨酸二甲酯(代號：sit-111)的制備

操作同實施例1，以10mmol投料，得2.75g，產(chǎn)率43.68％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.31(t，j＝7.7hz，2h)，7.25-7.18(m，3h)，7.16(t，j＝7.2hz，1h)，7.08(d，j＝8.0hz，1h)，6.79(t.j＝9.1hz，1h)，6.47(d，j＝13.0hz，2h)，6.42(t，j＝8.2hz，2h)，4.24-4.15(m，1h)，4.04-3.89(m，1h)，3.83(dd，j＝10.4，8.7hz，6h)，3.71-3.61(m，12h)，2.45-2.23(m，2h)，2.17-1.88(m，3h).

實施例9[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙烯基)苯氧基)(苯氧基)磷酰]-d-異亮氨酸甲酯(代號：sit-112)的制備

操作同實施例1，以10mmol投料，得2.8140g，產(chǎn)率46.93％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.30(t，j＝7.6hz，2h)，7.25-7.19(m，3h)，7.14(t，j＝7.1hz，1h)，7.07(d，j＝8.4hz，1h)，6.78(t，j＝8.5hz，1h)，6.47(d，j＝15.0hz，2h)，6.41(d，j＝12.6hz，2h)，3.91(dd，j＝19.1，10.0hz，1h)，3.84-3.79(m，6h)，3.65(dd，j＝27.8，8.1hz，9h)，1.81-1.67(m，1h)，1.10(ddd，j＝22.4，15.3，7.8hz，1h)，0.90-0.83(m，6h).

實施例10[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)丙氨酸異丙酯(代號：sit-113)的制備

操作同實施例2，以3mmol投料，產(chǎn)量0.95g，產(chǎn)率53.89％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(t，j＝7.1hz，2h)，7.28(t，j＝7.6hz，2h)，7.22(s，1h)，7.18(t，j＝7.2hz，1h)，6.93(d，j＝8.2hz，1h)，6.88-6.83(m，1h)，6.39(s，2h)，5.00(tt，j＝12.4，6.2hz，1h)，4.20-4.12(m，1h)，3.85(d，j＝15.3hz，12h)，2.87-2.75(m，4h)，1.35(dd，j＝27.0，7.0hz，3h)，1.25-1.19(m，6h)，0.09(s，1h).

實施例11[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)纈氨酸甲酯(sit-114)的制備

操作同實施例2，以3mmol投料，產(chǎn)量0.97g，產(chǎn)率55.03％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.37-7.31(m，2h)，7.31-7.25(m，2h)，7.22(d，j＝11.6hz，1h)，7.17(t，j＝7.1hz，1h)，6.93(d，j＝8.3hz，1h)，6.85(dd，j＝8.3，4.1hz，1h)，6.39(d，j＝3.4hz，2h)，3.99(dtd，j＝15.1，10.4，4.7hz，1h)，3.84(dd，j＝10.8，7.7hz，12h)，3.63(d，j＝20.2hz，3h)，2.81(d，j＝5.0hz，4h)，2.07-1.99(m，1h)，0.94-0.87(m，4h)，0.80(t，j＝6.5hz，3h)，0.09(s，1h).

實施例12[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)環(huán)丙氨酸乙酯(代號：sit-115)的制備

操作同實施例2，以10mmol投料，產(chǎn)量3.1761g，產(chǎn)率54.24％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.37-7.31(m，2h)，7.28(d，j＝8.5hz，2h)，7.24(s，1h)，7.17(t，j＝7.2hz，1h)，6.93(d，j＝7.7hz，1h)，6.86(d，j＝8.3hz，1h)，6.38(d，j＝11.5hz，2h)，4.03(q，j＝7.1hz，2h)，3.87-3.72(m，12h)，2.82(d，j＝2.9hz，4h)，1.51-1.25(m，4h)，1.13(t，j＝7.1hz，3h).

實施例13[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)亮氨酸甲酯(代號：sit-117)的制備

操作同實施例2，以5mmol投料，產(chǎn)量1.21g，產(chǎn)率40.22％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.36-7.31(m，2h)，7.30(s，1h)，7.27-7.20(m，2h)，7.20-7.15(m，1h)，6.94(d，j＝6.5hz，1h)，6.86(t，j＝8.3hz，1h)，6.40(d，j＝5.5hz，2h)，3.84(q，j＝8.0hz，12h)，3.71(d，j＝13.1hz，1h)，3.63(d，j＝21.3hz，3h)，2.85-2.78(m，4h)，1.52(dt，j＝12.3，6.4hz，2h)，1.28(t，j＝7.1hz，1h)，0.85-0.81(m，3h)，0.09(s，1h).

實施例14[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)苯丙氨酸甲酯(代號：sit-118)的制備

操作同實施例2，以10mmol投料，產(chǎn)量2.7480g，產(chǎn)率43.23％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.35(dd，j＝13.1，7.3hz，2h)，7.26(d，j＝15.0hz，5h)，7.22-7.19(m，2h)，7.03(d，j＝6.6hz，1h)，6.95(t，j＝8.4hz，2h)，6.85(d，j＝8.3hz，1h)，6.40(d，j＝2.4hz，2h)，4.54-4.45(m，1h)，3.84(s，9h)，3.77(d，j＝15.2hz，3h)，3.67(d，j＝12.6hz，1h)，3.61(d，j＝29.1hz，3h)，2.98(dd，j＝13.4，6.0hz，2h)，2.82(s，4h)，0.10(s，1h).

實施例15[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)谷氨酸二甲酯(代號：sit-119)的制備

操作同實施例2，以10mmol投料，產(chǎn)量1.14g，產(chǎn)率18.05％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.31-7.25(m，2h)，7.24(s，1h)，7.21(t，j＝7.3hz，1h)，7.16-7.08(m，2h)，6.87(d，j＝8.2hz，1h)，6.80(t，j＝7.9hz，1h)，6.34(d，j＝4.2hz，2h)，4.20-4.13(m，1h)，3.78(t，j＝8.9hz，12h)，3.57(dd，j＝19.1，14.5hz，6h)，2.76(s，4h)，2.34-1.81(m，4h).

實施例16[(2-甲氧基-5-甲基-((z)-3，4，5-三甲氧基苯乙基)苯氧基)(苯氧基)磷酰)異亮氨酸甲酯(代號：sit-120)的制備

操作同實施例2，以10mmol投料，產(chǎn)量3.7757g，產(chǎn)率61.81％。¹hnmr(500mhz，cdcl3)δ7.33(td，j＝8.1，3.0hz，2h)，7.30-7.25(m，2h)，7.25-7.19(m，1h)，7.16(t，j＝6.8hz，1h)，6.92(d，j＝8.3hz，1h)，6.87-6.82(m，1h)，6.39(d，j＝4.1hz，2h)，4.09-4.00(m，1h)，3.87-3.81(m，12h)，3.62(d，j＝20.8hz，3h)，2.80(dd，j＝8.5，5.7hz，4h)，1.80-1.67(m，1h)，1.27(dd，j＝15.1，8.1hz，2h)，0.91-0.75(m，7h)

實施例17化合物對hela宮頸癌細胞株的體外增殖抑制活性(mtt法)

1、試驗方法

細胞以含200ml/l胎牛血清的rpmi1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，使細胞一直處于對數(shù)生長期，接種至96孔板，密度4～8×10⁴/ml，37℃，預(yù)培養(yǎng)24小時加藥，藥物設(shè)6個濃度，每種藥物設(shè)3個復(fù)孔。連續(xù)作用48小時，甩去培養(yǎng)液風(fēng)干，每孔加冰冷500g/l三氯醋酸50μl(終濃度為100g/l)固定60min后去離子水洗4～5次，干燥，每孔加4g/lsrb100μl作用30min，10ml/l醋酸輕洗4次，甩干，每孔加10mmoltrisbase200μl搖動混勻，在平板振蕩器上振蕩5min，在酶聯(lián)免疫檢測儀測定a值，用空白對照調(diào)零，所用波長為490nm，抑瘤率(％)＝(無藥細胞對照孔a值平均值-用藥孔a值平均值)/無藥細胞對照孔a值平均值×100％，陽性對照為ca4和ca4p，根據(jù)不同濃度下藥物對細胞生長的抑制率，以logit方法計算ic50值。

2.試驗結(jié)果

表1實施例化合物對hela宮頸癌細胞株的體外增殖抑制活性(mtt法)。

表2實施例化合物對多種腫瘤細胞株的體外抗腫瘤活性評價(mtt法)

-*沒測定

實施例17化合物對多種耐藥性腫瘤細胞株的體外抗腫瘤活性評價(cck-8法)

1.實驗方法

取活細胞比例達90％以上的細胞進行實驗。細胞增殖抑制試驗采用enogenecell^tmcountingkit-8(cck-8)細胞活力檢測試劑盒。細胞消化、計數(shù)、制成濃度為1×10⁵個/ml的細胞懸液，96孔板中每孔加入100μl細胞懸液(每孔1×104個細胞)；96孔板置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時；每孔加入100μl相應(yīng)的含藥物的培養(yǎng)基，同時設(shè)立陰性對照組，溶媒對照組，陽性對照組，每組5復(fù)孔；96孔板置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時后；每孔加入10μlcck-8溶液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4小時，用酶標(biāo)儀測定在450nm處的od值，計算這些化合物對人甲狀腺癌細胞sw579、人肝癌細胞hepg2、人肺癌細胞a549、人胃癌細胞mgc-803和人乳腺癌細胞mda-mb-231等細胞的抑制率及ic50值。

2.實驗結(jié)果

表3化合物對多種耐藥型腫瘤細胞株的體外增殖活性的抑制率及ic50值(cck8法)

需要說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制。盡管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。