一種淡水舟形藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藻類培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種淡水舟形藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 舟形藻屬硅藻門羽紋硅藻綱舟形藻屬，是一種常用作貝類養(yǎng)殖的單胞藻類。其脂 肪含量高，脂肪酸種類豐富。GC-MS分析結(jié)果表明，該藻富含多種不飽和脂肪酸。同時該藻 株在生長過程中能分泌具有多種生物活性的硫酸化多糖，因此舟形藻不僅是水產(chǎn)動物理想 的開口餌料，另外舟形藻還是一種具有潛在藥學價值的的浮游藻類。
[0003] 但在天然水體中，舟形藻與其他藻類混雜生長，種群密度很低，很難滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖 的需要。目前，淡水舟形藻的培養(yǎng)多采用CSI培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中，舟形藻生長速度較緩 慢，不利于舟形藻的大規(guī)模培養(yǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種淡水舟形藻培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液適用于淡水舟形藻的生 長。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種舟形藻的培養(yǎng)方法，該方法可提高淡水舟形藻生 長速率，有利于淡水舟形藻的規(guī)?；囵B(yǎng)。
[0006] 為了達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施：
[0007] -種淡水舟形藻培養(yǎng)液（本發(fā)明或稱LXN培養(yǎng)液），包括：
[0008]
[0009]
[0010] 其余為雙蒸水，培養(yǎng)液的pH范圍是7. 5~8。
[0011] 所述的舟形藻為生長在淡水中的舟形藻。
[0012] -種舟形藻的培養(yǎng)方法，包括下述步驟：
[0013] 1)將培養(yǎng)至對數(shù)期的舟形藻進行饑餓培養(yǎng)1~2d(培養(yǎng)液為不含氮、磷、硅、鐵的 CSI培養(yǎng)基），備用。
[0014] 2)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的舟形藻3000~4000r/min離心5~lOmin，棄上清后接種至 LXN培養(yǎng)液中，接種量為1~10X104cells/mL。25~30°C，光照強度為3000~50001x，光 暗比為12h~14h: 10h~12h，每隔3h振搖錐形瓶一次。
[0015] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點：
[0016] 本發(fā)明所公開的培養(yǎng)液和培養(yǎng)方法，根據(jù)淡水舟形藻生長的營養(yǎng)鹽、溫度、pH值等 的需求特性，達到促進純種淡水舟形藻快速生長的目的。本發(fā)明中培養(yǎng)液搭配合理，可以有 效地促進舟形藻的快速分裂增殖，促進其更好地吸收利用各種營養(yǎng)物質(zhì)，加快舟形藻細胞 的新陳代謝，提高其生產(chǎn)量。本發(fā)明中培養(yǎng)方法操作簡單，針對性強，適應淡水舟形藻的快 速生長，因此本發(fā)明具備了廣泛的市場前景，特別適合于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域推廣應用。
【附圖說明】
[0017] 圖1為實施例1中的舟形藻在LXN培養(yǎng)液和CSI培養(yǎng)液中的生長曲線示意圖。
【具體實施方式】
[0018] 本發(fā)明所述技術(shù)方案，如未特別說明，均為常規(guī)技術(shù)，所述試劑或原料，如未特別 說明，均來源于商業(yè)渠道。
[0019] 實施例1 :
[0020] -種淡水舟形藻培養(yǎng)液（本發(fā)明實施例或稱LXN培養(yǎng)液），包括：
[0021]
[0022]
[0023] 其余為雙蒸水。
[0024] 實施例2:
[0025] 一種淡水舟形藻培養(yǎng)方法，包括：
[0026] (1)按照實施例1所述配方配制LXN培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH值為8。放入滅菌鍋中，120°C， 滅菌20min。滅菌結(jié)束后，放入4°C冰箱中備用。
[0027] (2)將舟形藻在CSI培養(yǎng)基（《HandbookofMicroalgalCulture》）中培養(yǎng)至 對數(shù)期，備用。
[0028] (3)將（2)中的舟形藻進行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、磷、硅、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0029] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的舟形藻4000r/min離心lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXN培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為0· 52X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0030] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設定溫度為25°C，光照強度為30001X，光暗比為 12h:12h〇
[0031] (6)每隔3h振搖錐形瓶一次，以上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進 行。
[0032] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0033] 所述的舟形藻購自中科院水生生物研究所藻種庫，編號為NaviculaFACHB-1226。
[0034] 細胞生長情況如表1和圖1所示，試驗組舟形藻在接種的第2d藻細胞開始 分裂，第6d進入對數(shù)期。生長速率一直遞增到接種后的第10d，最大藻細胞密度達到 39. 75X105cells/ml〇
[0035] 表1舟形藻細胞密度隨時間的變化（X105cells/ml)
[0036]
[0037]
[0038] 對照組CSI培養(yǎng)基中的細胞生長趨勢與試驗組中基本一致，但細胞生長速率顯著 低于試驗組，在第l〇d達到最大細胞密度，僅有12. 24X105cells/ml。
[0039] 實施例3:
[0040]一種淡水舟形藻培養(yǎng)方法，包括：
[0041] ⑴按照實施例1所述配方配置好LXN培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH值為7.5,放入滅菌鍋中， 120°C，滅菌20min，滅菌結(jié)束后。放入4°C冰箱中備用。
[0042] (2)將舟形藻在CSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。
[0043] (3)將（2)中的舟形藻進行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、磷、硅、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0044] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的舟形藻4000r/min離心lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXN培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為0· 52X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0045] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設定溫度為將25°C，光照強度為30001x，光暗比 為 12h:12h〇
[0046](6)每隔3h振搖錐形瓶一次。以上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進 行。
[0047] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0048] 所述的舟形藻為NaviculaFACHB-1226,購自中科院水生生物研究所藻種庫。
[0049] 經(jīng)過10d培養(yǎng)，試驗組細胞密度可達37. 98±0. 56X105cells/ml。
[0050] 實施例4:
[0051]一種淡水舟形藻培養(yǎng)方法，包括：
[0052] (1)按照實施例1所述培養(yǎng)液配方配置好LXN培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH值為8,放入滅菌鍋 中，120°C，滅菌20min。滅菌結(jié)束后，放入4°C冰箱中備用。
[0053](2)將舟形藻在CSI培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，備用。
[0054] (3)將（2)中的舟形藻進行饑餓培養(yǎng)Id(培養(yǎng)液為不含氮、磷、硅、鐵的CSI培養(yǎng) 基），備用。
[0055] (4)將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的舟形藻4000r/min離心lOmin，棄上清后分別接種到裝有 LXN培養(yǎng)液（試驗組）和CSI培養(yǎng)液（對照組）的錐形瓶中，接種量為0· 52X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0056] (5)將錐形瓶移入光照培養(yǎng)箱中，設定溫度為將30°C，光照強度為30001x，光暗比 為 12h:12h;
[0057] (6)每隔3h振搖錐形瓶一次。以上所有器皿均需滅菌，操作均在超凈工作臺中進 行。
[0058] (7)每2d取樣于顯微鏡下觀察計數(shù)。
[0059] 所述的舟形藻為Navicula FACHB-1226,購自中科院水生生物研究所藻種庫。
[0060] 經(jīng)過10d培養(yǎng)，試驗組細胞密度可達38. 23±0· 33X105cells/ml。
【主權(quán)項】
1. 一種淡水舟形藻培養(yǎng)液，包括： 4水硝酸鈣 60~75mg/L 硝酸鉀 40~50mg/L 7水硫酸鎂 35~40mg/L 5水β-甘油磷酸鈉 20~25mg/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸 400~500mg/L 9水偏硅酸鈉 200~250mg/L 6水氯化鐵 1~L5mg/L 乙二胺四乙酸二鈉 4~4.5mg/L 4水合氯化錳 0· 25~0· 35mg/L 7水氯化鋅 25~30ug/L 2水合鉬酸鈉 20~24ug/L 6水氯化鈷 7~12ug/L 維生素B12 0. 05~0.lug/L 維生素Η 0. 05~0.lug/L 維生素B1 5~10ug/L 其余為雙蒸水，培養(yǎng)液的pH范圍是7. 5~8。2. 利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)液培養(yǎng)舟形藻的方法，包括： 將經(jīng)過饑餓培養(yǎng)的舟形藻3000~4000r/min離心5~10min，棄上清后接種至權(quán)利要求1 所述培養(yǎng)液中，25~30°C，光照強度為3000~50001x，光暗比為12h~14h: 10h~12h，每隔3h振 搖錐形瓶一次。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種淡水舟形藻培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法，本發(fā)明所公開的培養(yǎng)液，配方組分簡單易得，根據(jù)淡水舟形藻生長的營養(yǎng)鹽、溫度、pH值等的需求特性，可以有效地促進舟形藻的快速分裂增殖，促進其更好地吸收利用各種營養(yǎng)物質(zhì)，加快舟形藻細胞的新陳代謝，提高其生產(chǎn)量，達到促進純種淡水舟形藻快速生長的目的。將該培養(yǎng)液結(jié)合本發(fā)明提供的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)方法操作簡單，針對性強，適應淡水舟形藻的快速生長，具備廣泛的市場前景，特別適合于在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域推廣應用。
【IPC分類】C12N1/12, C12R1/89
【公開號】CN105349428
【申請?zhí)枴緾N201510974664
【發(fā)明人】李曉莉, 李谷, 陶玲
【申請人】中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年12月22日