本發(fā)明涉及生物細(xì)胞領(lǐng)域，涉及一種大腸桿菌發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
大腸埃希氏菌(Escherichia coli)通常被稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。直到20世紀(jì)中葉，才認(rèn)識(shí)到一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有病原性，尤其對(duì)嬰兒和幼畜(禽)，常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥，它是一種普通的原核生物，根據(jù)不同的生物學(xué)特性將致病性大腸桿菌分為6類：腸致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)和彌散粘附性大腸桿菌(DAEC)，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行發(fā)酵是十分必要的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明提供一種解決或部分解決上述問題的大腸桿菌發(fā)酵方法。
為達(dá)到上述技術(shù)方案的效果，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種大腸桿菌發(fā)酵方法，包含以下步驟：
從新鮮斜面上刮取一環(huán)大腸桿菌，轉(zhuǎn)接于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在39℃的溫度下培養(yǎng)4到8小時(shí)，然后8％的接種量轉(zhuǎn)接于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在42℃的溫度下培養(yǎng)16小時(shí)，再按照12％的接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵罐中，待pH自然降至5.4時(shí)，邊攪拌邊加氨水維持pH不變，采用連續(xù)變速補(bǔ)料工藝：發(fā)酵至第19小時(shí)開始補(bǔ)料，采用補(bǔ)料液的流速為80.0ml/h，第29小時(shí)開始調(diào)整補(bǔ)料流速為28.0ml/h，對(duì)發(fā)酵后的發(fā)酵液進(jìn)行除菌，取一定量的除菌后的發(fā)酵液，加入18％的三氯乙酸致終濃度為120g/L，攪拌均勻，靜置2個(gè)小時(shí)，用硅藻土作助濾劑進(jìn)行過濾，濾液調(diào)回p H7.0，測(cè)定過程前后大腸桿菌的含量，并計(jì)算出其的去除率。
本發(fā)明的有益成果是：本發(fā)明從大腸桿菌的發(fā)酵方法出發(fā)，進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)基以及二級(jí)種子培養(yǎng)基，并進(jìn)行29個(gè)小時(shí)的發(fā)酵，并進(jìn)行除菌，測(cè)定過程前后大腸桿菌的含量，并計(jì)算出其的去除率，整個(gè)過程步驟嚴(yán)謹(jǐn)、操作性強(qiáng)，具有很大的實(shí)用性。
具體實(shí)施方式
為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。應(yīng)當(dāng)說明的是，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明，能實(shí)現(xiàn)同樣功能的產(chǎn)品屬于等同替換和改進(jìn)，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體方法如下：
大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽孢。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3。國家規(guī)定，每毫升飲用水中的菌落總數(shù)小于100，每100毫升水中不得檢出總大腸菌群[1]。
大腸桿菌的抗原成分復(fù)雜，可分為菌體抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原(K)，后者有抗機(jī)體吞噬和抗補(bǔ)體的能力。根據(jù)菌體抗原的不同，可將大腸桿菌分為150多型，其中有16個(gè)血清型為致病性大腸桿菌，常引起流行性嬰兒腹瀉和成人肋膜炎。大腸桿菌是研究微生物遺傳的重要材料，如局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)就是1954年在大腸桿菌K12菌株中發(fā)現(xiàn)的。萊德伯格(Lederberg)采用兩株大腸桿菌的營養(yǎng)缺陷型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，奠定了研究細(xì)菌接合方法學(xué)上的基礎(chǔ)，以及基因工程的研究。
大腸桿菌(E.coli)為埃希氏菌屬(Escherichia)代表菌。一般多不致病，為人和動(dòng)物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強(qiáng)，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。
該菌對(duì)熱的抵抗力較其他腸道桿菌強(qiáng)，55℃經(jīng)60分鐘或60℃加熱15分鐘仍有部分細(xì)菌存活。在自然界的水中可存活數(shù)周至數(shù)月，在溫度較低的糞便中存活更久。膽鹽、煌綠等對(duì)大腸桿菌有抑制作用。對(duì)磺胺類、鏈霉素、氯霉素等敏感，但易耐藥，是由帶有R因子的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移而獲得的。
大腸桿菌的主要基因型包括：與基因重組相關(guān)的基因型(如recA、recB和recC等)、與甲基化相關(guān)的基因型(如dam、dcm、mcrA、mcrB和C、mrr和hsdM等)、與點(diǎn)突變相關(guān)的基因型(如mutS、mutT、dut、ung和uvrB等)、與核酸內(nèi)切酶相關(guān)的基因型(如hsdR、hsdS和endA等)、與終止密碼子相關(guān)的基因型(如supE和supF)、與抗藥性相關(guān)的基因型(gyrA、rpsl和Tn5等)及其他與能量代謝、氨基酸代謝、維生素代謝等相關(guān)的基因型?；蚬こ讨校?jīng)常使用的大腸桿菌幾乎都來自于K-12菌株，也使用由B株和C株來源的大腸桿菌。
菌體的生長和聚唾液酸的合呈明顯的相關(guān)的性，為生長偶聯(lián)型。20小時(shí)以后，出現(xiàn)了反?，F(xiàn)象，溶氧急劇增大，菌體量開始下降，碳源氮源大量積累，PSA的產(chǎn)率也大大降低，最終導(dǎo)致PSA的產(chǎn)量降低，分析原因可能是因?yàn)樵谡{(diào)節(jié)pH的過程中，我們使用的是氨水，本來是想是在調(diào)節(jié)pH的同時(shí)，補(bǔ)充氮源，但是由于C/N不能控制，導(dǎo)致最后雖然pH值一直恒定，但是N源過多的累積，對(duì)菌體生長以及產(chǎn)物合成的一些酶系產(chǎn)生了抑制，從而導(dǎo)致菌體量開始下降，C源利用率降低，C源也累積過多，產(chǎn)物合成速率也降低。因此以后的發(fā)酵可以嘗試將氨水改為NaOH，以減少N源的積累。
以上所述僅為本發(fā)明之較佳實(shí)施例，并非用以限定本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍。同時(shí)以上說明，對(duì)于相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)可以理解及實(shí)施，因此其他基于本發(fā)明所揭示內(nèi)容所完成的等同改變，均應(yīng)包含在本權(quán)利要求書的涵蓋范圍內(nèi)。
本發(fā)明的有益成果是：本發(fā)明從大腸桿菌的發(fā)酵方法出發(fā)，進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)基以及二級(jí)種子培養(yǎng)基，并進(jìn)行29個(gè)小時(shí)的發(fā)酵，并進(jìn)行除菌，測(cè)定過程前后大腸桿菌的含量，并計(jì)算出其的去除率，整個(gè)過程步驟嚴(yán)謹(jǐn)、操作性強(qiáng)，具有很大的實(shí)用性。