本發(fā)明屬于生物化工技術領域，尤其是涉及一種細胞色素c溶液澄清方法。
背景技術：
細胞色素c廣泛分布于動物、植物和酵母等微生物中，定位在線粒體內膜的外表面。因分子中有多個堿性氨基酸(特別是lys)殘基，在生理ph環(huán)境帶正電荷，可通過靜電相互作用與膜磷脂質相締合，能被h+和金屬離子從膜上置換取代下來。
現(xiàn)有細胞色素c提取方法為硫酸溶液提取、沸石捕集、硫酸銨分級、三氯乙酸沉淀以及離子交換色譜純化等五大步驟。硫酸溶液提取后，經(jīng)過過濾除渣料液仍然難以做到澄清，因此影響沸石捕集細胞色素c的效率。
如果能在沸石捕集細胞色素c之前將料液處理澄清，可以用精濾的方法，但是這種方法對于大量的料液處理速度有限，因此如果能夠加入絮凝劑使料液快速絮凝澄清，那么經(jīng)過簡單的過濾即可快速得到澄清的料液。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于改進已有技術的不足而提供一種有效的細胞色素c溶液澄清方法?，F(xiàn)有細胞色素c生產(chǎn)工藝中料液的澄清方法是粗濾和精濾。商品用細胞色素c使用動物心肌提取，提取的溶液一般含有很多不溶物，直接過濾速度較慢。如果加入絮凝劑使其中的不溶成分快速絮凝沉降，那么將提高過濾速度和過濾質量。選擇殼聚糖作為絮凝劑，是由于其來自于天然產(chǎn)物，操作步驟簡單、沒有毒副作用、達到絮凝效果后能夠完全除去、不影響最終產(chǎn)品質量，所形成的絮凝沉淀能夠保持很長一段時間，即使輕微攪動也不會被打散。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的，動物心肌提取出的細胞色素c溶液，加入殼聚糖作為絮凝劑，攪拌至不溶物絮凝成團后，靜置適當時間后過濾澄清即可。
殼聚糖的加入量是澄清的重要的影響因素。殼聚糖的加入重量為細胞色素c溶液重量的0.01～0.03％。針對于細胞色素c溶液而言，少于0.01％的加入量通常不足以將所有不溶物沉淀下來，多于0.03％的加入量，有可能會造成殼聚糖的浪費，并且有可能影響細胞色素c收率。
脫乙酰度70～90％的殼聚糖比較常見，粘度比較穩(wěn)定，容易在不同工藝中均達到穩(wěn)定的絮凝效果。但是在本發(fā)明中使用脫乙酰度較高的殼聚糖，這是因為實驗發(fā)現(xiàn)不同脫乙酰度的殼聚糖中，脫乙酰度較高的殼聚糖能夠以最快的速度在細胞色素c溶液中絮凝，可使工藝快速進行，處理成噸的料液時分外有利。殼聚糖脫乙酰度范圍91～95％。殼聚糖在使用前需預先溶解。由于殼聚糖溶解于酸性環(huán)境，因此使用鹽酸或醋酸來調節(jié)殼聚糖溶液ph，使其穩(wěn)定在3.0～3.5。這個ph范圍下，殼聚糖可以充分溶解，并且不會很快分解導致粘度降低，從而影響絮凝效果。殼聚糖配制成水溶液濃度應限定在3％，過低的濃度在生產(chǎn)中不易操作，過高的濃度會增加殼聚糖的溶解時間。殼聚糖配制成水溶液后應盡快使用，存放時間不宜超過12小時。較高的離子強度不利于殼聚糖的絮凝，處理的料液應避免高鹽環(huán)境。殼聚糖會溶于酸性溶液，因此為了生產(chǎn)絮凝，細胞色素c溶液應保持偏中性或堿性環(huán)境。將細胞色素c溶液調節(jié)ph7.0～8.0為宜。
具體實施方式：
實施例1，一種細胞色素c溶液澄清方法，將5kg豬心絞碎，加入適量濃度為2％硫酸溶液，ph值控制在3.5，室溫提取2小時，粗濾去渣，得到提取液50升，用氨水調節(jié)ph7.0，此時料液濁度大于200ntu。
現(xiàn)場配制殼聚糖溶液，取5克脫乙酰度91％的殼聚糖，置于0.17升純化水中，用鹽酸維持ph3.0，攪拌使殼聚糖溶解。將殼聚糖溶液緩緩加入細胞色素c水解液中并保持攪拌，約10分鐘后出現(xiàn)可見絮凝后停止攪拌并靜置，在不同靜置時間取上清液，使用中速定性濾紙在重力作用下過濾后檢測濁度如下表。
實施例2，一種細胞色素c溶液澄清方法，細胞色素c溶液提取方法同實施例1，用氨水調節(jié)ph7.5，此時料液濁度大于200ntu。
現(xiàn)場配制殼聚糖溶液，取10克脫乙酰度93％的殼聚糖，置于0.33升純化水中，用醋酸維持ph3.2，攪拌使殼聚糖溶解。將殼聚糖溶液緩緩加入細胞色素c水解液中保持攪拌，約10分鐘后出現(xiàn)可見絮凝后停止攪拌并靜置，在不同靜置時間取上清液，使用中速定性濾紙在重力作用下過濾后檢測濁度如下表。
實施例3，一種細胞色素c溶液澄清方法，細胞色素c溶液提取方法同實施例1，用氨水調節(jié)ph8.0，此時料液濁度大于200ntu。
現(xiàn)場配制殼聚糖溶液，取15克脫乙酰度95％的殼聚糖，置于0.5升純化水中，用鹽酸維持ph3.5，攪拌使殼聚糖溶解。將殼聚糖溶液緩緩加入細胞色素c水解液中保持攪拌，約10分鐘后出現(xiàn)可見絮凝后停止攪拌并靜置，在不同靜置時間取上清液，使用中速定性濾紙在重力作用下過濾后檢測濁度如下表。
上述三個實施例中經(jīng)過殼聚糖絮凝后的料液，與殼聚糖處理之前相比，可以快速通過精濾器過濾澄清，滿足快速過濾的要求。