技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及固定化酶領(lǐng)域，具體涉及一種添加海藻糖增加磁性固定化磷脂酶熱穩(wěn)定性的方法的研究。
背景技術(shù)：
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固定化酶技術(shù)是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一項(xiàng)生物工程技術(shù)。由于具有重復(fù)使用周期長，可以大大提高酶穩(wěn)定性的特點(diǎn)，受到各個(gè)領(lǐng)域的青睞。其中，殼聚糖是目前最常用的一種材料。殼聚糖是甲殼素脫乙酰基的產(chǎn)物,是由大部分2-氨基-2-脫氧-β-d-葡萄糖單元和少量n-乙酰-2-氨基-2-脫氧-β-d-葡萄糖單元以β-1,4糖苷鍵連接的二元線性共聚物。殼聚糖及其衍生物的固定化酶具有酶活性高、回收率高和耐貯藏等特點(diǎn)。常與戊二醛進(jìn)行交聯(lián)，提高結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，但該微球內(nèi)部緊實(shí)，表面光滑，可用活性基團(tuán)較少，比表面積很小，導(dǎo)致酶固定化效率低，酶載量少。海藻糖,一種天然存在的非還原性二糖，對(duì)生物材料的活性保存起著重要作用。
本發(fā)明在固定化磷脂酶的過程中加入一定量的海藻糖，以提高固定化酶在制備、存放和使用過程中酶的熱穩(wěn)定性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明是一種添加海藻糖增加磁性固定化磷脂酶熱穩(wěn)定性的方法，創(chuàng)新之處在于在常用的磁性固定化磷脂酶的過程中加入一定量的海藻糖，提高了固定化酶的酶活力，增強(qiáng)了固定化酶的熱穩(wěn)定性。改變了固定化酶使用壽命短，酶活降低快的現(xiàn)象。
海藻糖增加磁性固定化磷脂酶熱穩(wěn)定性通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：一、首先將1g的fe3o4/siox-g-p(gma)復(fù)合粒子置于50ml的磷酸緩沖液(0.1mol/l，ph7.0)中浸泡一段時(shí)間，磁分離后將上述浸泡后的載體加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸緩沖液(0.1mol/l，ph7.0)中，加入一定量的海藻糖，同時(shí)在45℃下攪拌反應(yīng)一段時(shí)間，最后磁分離并用磷酸緩沖液(0.1mol/l，ph7.0)洗滌得到固定化酶。測定酶活力，研究該方法的最佳反應(yīng)條件；
具體實(shí)施方式：
具體實(shí)施方式一：步驟一、研究固定化的最佳反應(yīng)條件，浸泡時(shí)間為16-32h，磷脂酶磷酸緩沖液的量為1-9ml，海藻糖添加量8％-12％，攪拌時(shí)間為40-70min，測定固定化酶的酶活力。
具體實(shí)施方式二：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟一中浸泡時(shí)間為20-28h，測定固定化酶的酶活力。
具體實(shí)施方式三：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟一中磷脂酶磷酸緩沖液的量為3-7ml，測定固定化酶的酶活力。
具體實(shí)施方式四：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟一中海藻糖添加量9％-11％，測定固定化酶的酶活力
具體實(shí)施方式五：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟一中攪拌時(shí)間為40-70min，測定固定化酶的酶活力。