本發(fā)明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2，并進一步公開其克隆與應用。

背景技術：

高等植物生命周期主要包括種子萌發(fā)、營養(yǎng)器官生長、開花、受精、胚胎發(fā)育和種子形成等過程。其中，開花過程涉及由營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)換、花器官的發(fā)生，以及在環(huán)境因子作用下內(nèi)部各種信號的產(chǎn)生、傳遞和相互作用等，在植物生命周期中占有中心地位，并與農(nóng)作物產(chǎn)量以及品質(zhì)密切相關。

開花誘導即植物由營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)換的過程，它受內(nèi)源發(fā)育信號和環(huán)境因子的嚴格控制，開花誘導由一種復雜的信號途徑“網(wǎng)絡”形成，是一個非常復雜的過程。根據(jù)近年來對擬南芥、金魚草、玉米等幾種模式植物的開花調(diào)控信號途徑的研究，尤其是對擬南芥的研究，提出影響植物的生長發(fā)育及開花的4個主要的生物學途徑調(diào)控，包括自主調(diào)控途徑(autonomouspathway)、春化途徑(vernalization)、ga調(diào)控途徑(gibberellicacid)和光周期調(diào)控途徑(photoperiod)。其中自主調(diào)控途徑和ga調(diào)控途徑為植物主要內(nèi)在調(diào)控因素，而春化途徑和光周期調(diào)控途徑則是外界主要的調(diào)控因素。

ft(floweringlocust)基因是花期調(diào)控途徑中的關鍵基因。它位于花發(fā)育途徑中的匯集點，整合來自光周期途徑、春化途徑和自主途徑等不同花發(fā)育途徑的信號，在植物花發(fā)育中發(fā)揮著重要作用。ft蛋白是成花素的主要組成部分，在不同的開花遺傳途徑中，上游關鍵基因調(diào)控ft基因，使ft蛋白從韌皮部移動到莖頂端分生組織(sam)，與帶堿性亮氨酸拉鏈蛋白(basicregion-leucinezipper，b-zip)轉(zhuǎn)錄因子fd(floweringlocusd)在莖尖通過蛋白質(zhì)的相互作用來促進成花轉(zhuǎn)變，并通過轉(zhuǎn)錄激活花分生組織特性基因ap1(apetala1)來啟動花發(fā)育過程。

擬南芥的ft基因?qū)儆趂t/tfl1基因家族，又稱為磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白(phosphatidylethanolamine-bindingprotein，pebp)基因家族，因其蛋白易與磷脂酰乙醇胺結(jié)合而得名。擬南芥ft基因受到光周期調(diào)控，ft突變體長日照環(huán)境下延遲植物開花(kobayashiy,kayah,gotok,etal.1999.apairofrelatedgeneswithantagonisticrolesinmediatingfloweringsignals.science286,1960-1962.)。ft同源基因ptft1轉(zhuǎn)基因楊樹在很短時間即可表現(xiàn)出開花表型，同時還能夠可以抵制短日照條件下誘導的生長停止和芽休眠的現(xiàn)象的發(fā)生(bohleniush,huangt,charbonnel-campaal,etal.2006.co/ftregulatorymodulecontrolstimingoffloweringandseasonalgrowthcessationintrees.science312,1040-43.)。楊樹ft2也被證明具有促進開花的作用，同時受到光周期的調(diào)控而調(diào)控楊樹季節(jié)性開花的功能(hsucy,liuy,luthedsetal.2006.poplarft2shortensthejuvenilephaseandpromotesseasonalflowering.theplantcell18,1846-1861.)。西紅柿ft同源基因sft調(diào)控多個不同的發(fā)育過程，比如開花轉(zhuǎn)變、葉片的成熟、莖的伸長等(shalita,rozmana,goldshmidta,etal.2009.thefloweringhormoneflorigenfunctionsasageneralsystemicregulatorofgrowthandtermination.proc.nati.acad.sci.usa.106,8392-8397.)。美洲黑楊(populusdeltoides)中pdft1和pdft2因具有不同表達模式推測具有不同生物學功能(igasakit,watanabey,nishiguchim,etal.2008.thefloweringlocust/terminalflower1familyinlombardypoplar.plantandcellphysiology49,291-300.)。在梨樹中，根據(jù)表達分析推測pcft1具有促進開花的功能，而pcft2則可能調(diào)控梨樹的葉片的衰老和芽的休眠。過表達pcft2基因在煙草中能夠引起煙草早花表型的產(chǎn)生，嫁接研究表明pcft2蛋白具有可移動性。然而轉(zhuǎn)pcft2基因的梨樹卻不能表現(xiàn)早花表型，而是在延遲因短日照和低溫引起的葉片脫落和芽的休眠(freimana,golobovitchs,yablovitzz,etal.2015.expressionoffloweringlocust2transgenefrompyruscommunisl.delaysdormancyandleafsenescenceinmalus×domesticaborkh,andcausesearlyfloweringintobacco.plantscience241,164-176.)。甜菜中bvft1行使開花抑制功能，其表達受到春化處理的抑制，而bvft2則為開花促進者(pinpa,benllochr,bonnetd,etal.2010.anantagonisticpairoffthomologsmediatesthecontroloffloweringtimeinsugarbeet.science330,1397-1400.)?？梢姡琭t不僅在成花轉(zhuǎn)變過程中起重要作用，而且還參與調(diào)節(jié)生長發(fā)育的一些過程。

天然橡膠一直是我國重要的戰(zhàn)略物資和儲備資源，目前在我國，橡膠樹新品種的選育仍然是以傳統(tǒng)的人工授粉育種為主。由于橡膠樹生長緩慢，從胚后發(fā)育的童期到開花需要5-8年時間，而且有些性狀只有在成年期才能表現(xiàn)出來，這將嚴重阻礙橡膠樹育種的進程。目前，對橡膠樹尤其是巴西橡膠樹的成花機理與相關基因克隆和功能研究還未見報道。對橡膠樹開化調(diào)控基因的克隆及其生物學功能的研究和探索，明確其在橡膠樹開花轉(zhuǎn)變過程中的作用，為利用分子育種技術加快橡膠樹新品的培育奠定基礎。

技術實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2，并進一步公開其克隆與應用。

為解決上述技術問題，本發(fā)明所述的一種橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2，所述基因hbft2的cdna包括如seqidno：1所示的核苷酸序列。

所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2，所述基因hbft2的cdna核苷酸序列如seqidno：1所示。

本發(fā)明還公開了一種所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2編碼的蛋白，包括如seqidno：2所示的氨基酸序列。

具體的，所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2編碼的蛋白，其氨基酸序列如seqidno：2所示。

本發(fā)明還公開了一種橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2，所述基因hbft2的基因組dna包括如seqidno：3所示的核苷酸序列。

所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2，所述基因hbft2的基因組dna核苷酸序列如seqidno：3所示。

本發(fā)明還公開了一種含有所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2的重組植物表達載體，所述表達載體為重組質(zhì)粒pxcs-hbft2。

所述重組植物表達載體中的載體為pmd19-t載體。

本發(fā)明還公開了一種克隆所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2的方法，包括如下步驟：

(1)以巴西橡膠樹的葉片和花序cdna混合為模板，設計如下引物進行pcr擴增，獲得hbtf1基因開放閱讀框；

hbft2of：ggaattcatgcctagagatcctctggtt；

hbft2or：ccccccgggttgtcctcgccttctt；

(2)以hbtf1基因開放閱讀框為基礎，設計如下引起合成5’utr及3’utr；

hbft2-5uf：tggaaagcatattggcatagaaagt；

hbft2-5ur：ccttaaatcatctccacctacatca；

hbft2-gsp3^1st：cgaagacagacaatcaacccacc；

hbft2-gsp3^2nd：gaaactgctgcaagaagacgctaac；

(3)根據(jù)5’utr和3’utr的獲得，設計如下特異引物，進行目標基因hbft2全長的擴增；

hbft2-f：tggaaagcatattggcatagaaagt；

hbft2-r：gcataattatacttgtatatcttttaaatttatttgtatat。

本發(fā)明還公開了所述的橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2用于制備促進橡膠樹提前開花的促進劑的應用。

本發(fā)明首次在巴西橡膠樹中獲得橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2的全長cdna，并通過橡膠樹hbft2基因組織特異性表達分析，hbft2基因主要在繁殖器官中表達，尤其是在花序發(fā)育過程中，hbft2基因在開花的雄花中的表達量顯著高于花序原基，與擬南芥中ft基因表達一樣。

通過對擬南芥野生型遺傳轉(zhuǎn)化表明，hbft2基因在野生型擬南芥中過表達可有效的促進開花，同時又能彌補ft-10突變體的缺陷表型?？傊琱bft2可能參與調(diào)控橡膠樹開花和繁殖器官的發(fā)育。因此該基因可作為巴西橡膠樹非常有用的開花調(diào)控候選基因，可通過功能獲得突變或者功能缺失突變研究實現(xiàn)對橡膠樹開花的有效調(diào)控。

附圖說明

為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，其中，

圖1為hbft2基因的組織特異性表達分析(10齡樹根，莖，古銅葉，變色葉，淡綠葉，穩(wěn)定葉，芽，第一發(fā)育階段的花序，開花的雄花，開花的雌花，果皮及種子)；

圖2為hbft2基因在兩個不同樹齡橡膠樹不同季節(jié)的表達模式；

圖3為不同光周期對hbft2基因表達的影響；

圖4為不同溫度對hbft2基因表達的影響；

圖5為橡膠樹hbft2基因轉(zhuǎn)化野生型擬南芥的功能驗證；

圖6為hbft2基因?qū)t-10突變體表型恢復驗證實驗。

具體實施方式

下述實施例中所述的方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。

實施例1巴西橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2的獲得

分析已在ncbi登陸的擬南芥、蓖麻的ft基因的cdna序列，通過搜索建立的橡膠樹葉片轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，通過同源比對的方式獲得的片段信息，然后進行拼接，再預測開放閱讀并設計特異引物獲得包含有完整開放閱讀框的dna序列和cdna序列。具體方法如下：

(1)hbtf2基因開放閱讀框的獲得

基因特異性引物設計如下：

hbft2of：ggaattcatgcctagagatcctctggtt；

hbft2or：ccccccgggttgtcctcgccttctt。

以巴西橡膠樹熱研7-33-97(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院橡膠研究所培育)葉片和花序cdna混合為模板(以隨機引物反轉(zhuǎn)錄獲得)，以hbft2of和hbft2or為引物，其終濃度為0.4μmol/l，在20μl反應體系中進行pcr擴增。

pcr擴增程序為：95℃預變性3min，95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)，72℃終延伸10min。將擴增產(chǎn)物與pmd19-t載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌eha105中并測序。最后，獲得hbft2的完整開放閱讀框。

(2)5’及3’端utr

按照smart^tmcdnalibraryconstructionkit說明書進行構建racecdna文庫(試劑盒購自clontech公司)，5’utr通過5’race獲得，所用的接頭引物共有3條，分別為：

qt：

ccagtgagcagagtgacgaggactcgagctcaagcttttttttttttttt；

q1：gaggactcgagctcaagc；和

q0：ccagtgagcagagtgacg。

5’race操作流程參照文獻(迪芬巴赫cw，德維克斯勒gr.pcr技術實驗指南.黃培堂譯.北京:科學出版社,1998:268-277)。根據(jù)hbft2的cdna序列設計2條引物分別為：

hbft2-5uf：tggaaagcatattggcatagaaagt；

hbft2-5ur：ccttaaatcatctccacctacatca。

具體擴增程序為：95℃預變性3min，95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)，72℃終延伸10min。

hbft2的3’utr通過3’race獲得：所用的接頭引物與5’race用到的3個接頭引物一樣，同時3’race操作流程也是參照文獻(迪芬巴赫cw，德維克斯勒gr.pcr技術實驗指南.黃培堂譯.北京:科學出版社,1998:268-277)。先用qt引物作為反轉(zhuǎn)錄引物，反轉(zhuǎn)錄程序按反轉(zhuǎn)錄照說明書進行。之后分別以如下hbft2基因的gsp3^1st和q0為引物分別進行3組第一輪pcr，之后分別以50倍稀釋pcr產(chǎn)物作為第二輪pcr的模版。進行第二輪pcr時，再分別以這2個基因的如下gsp3^2nd和q1組合為引物對進行第二輪pcr，產(chǎn)物通過電泳挖膠獲得；

hbft2-gsp3^1st：cgaagacagacaatcaacccacc；

hbft2-gsp3^2nd：gaaactgctgcaagaagacgctaac；

擴增程序為：95℃預變性3min，95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)，72℃終延伸10min。5’及3’端race產(chǎn)物分別為122bp和113bp，產(chǎn)物經(jīng)切膠純化后，并進行克隆測序。

(3)hbft2基因全長的克隆

根據(jù)5’和3’utr的獲得，再次設計能夠擴增全長的特異引物：

hbft2-f：tggaaagcatattggcatagaaagt；

hbft2-r：gcataattatacttgtatatcttttaaatttatttgtatat。

以橡膠樹葉片和花序cdna混合為模版，進行目標基因hbft2全長的擴增。

擴增程序為：95℃預變性3min，95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)，72℃終延伸10min。獲得的pcr產(chǎn)物與pmd19-t連接并進行測序，測序表明上述獲得的片段即為本發(fā)明所需的橡膠樹開花調(diào)控基因，記為hbft2，該片段具有序列表中seqidno：1所示的核苷酸序列，

其全長為971個核苷酸，包含一個長度為528個核苷酸的開放閱讀框(orf，自序列1的5＇端第147-674位核苷酸序列)、146個核苷酸的5’-utr(自序列1的5’端第1-146位核苷酸序列)和297個核苷酸的3’-utr(自序列1的5’端第675-971位核苷酸序列)，編碼一個長度為120個氨基酸(序列表中seqidno：2)。

同時以巴西橡膠樹熱研7-33-97葉片基因組dna為模板，進行pcr擴增(程序同上所述)，測序結(jié)果表明獲得橡膠樹開花基因的基因組dna序列，該序列具有序列表中seqidno：3的核苷酸序列，共3089個核苷酸，包含了三個長度分別為317、1280和521個核苷酸的內(nèi)含子(自序列3的5’端第341-657、720-1999和2041-2561位核苷酸序列)。

實施例2橡膠樹hbft2基因組織特異性表達分析

本研究選取3月份采集的橡膠樹7-33-97的10齡樹的各個營養(yǎng)組織和繁殖器官(包括根、莖、古銅葉、變色葉、淡綠葉、變色葉、穩(wěn)定葉、芽、第一發(fā)育階段的花序、開花的雄花、開花的雌花)和8月份采集的果皮和種子，分別提取它們的rna備用。

對上述所獲得的rna進過dnasei消化后按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒進行反轉(zhuǎn)錄。通過熒光定量技術進行目標基因組織特異性表達分析。

定量引物為：

hbft2-qf：atctttctaccatttgaccccata；

hbft2-qr：ataactcgcccgcttgtaatct。

如圖1所示的結(jié)果顯示，hbft2基因主要在繁殖器官中表達，其中在種子種表達最高，然而在營養(yǎng)器官中表達量很低。

實施例3hbft2基因在兩個不同樹齡橡膠樹不同季節(jié)的表達模式

以2齡樹和10齡樹的穩(wěn)定葉為研究對象，從3月份開始采集材料，每個月采集一次，直至11月份為止。之后對hbft2基因進行熒光定量分析，定量引物同前述組織特異性表達分析引物。

如圖2所示結(jié)果顯示，hbft2基因在兩個不同樹齡橡膠樹中表現(xiàn)出相似的表達模式，而且主要在3月份、7月份和11月份表達。3月份是橡膠樹主開花期，其間hbft2基因在葉片中的表達量逐漸降低，在4到7月份期間又逐漸升高，8月份時回到低谷，9月份以后10齡樹中的hbft2基因表達量開始逐漸升高，而2齡樹中hbft2基因到10月份才開始升高。

實施例4不同光周期對hbft2基因表達的影響

將長勢一樣的40株3個月大的小苗平均分成兩組，每組20株。其中一組培養(yǎng)在28℃長日照環(huán)境(16h光照/8h黑暗)；另外一組則培養(yǎng)在28℃短日照環(huán)境(8h光照/16h黑暗)。在兩種環(huán)境下培養(yǎng)30天后，兩組植株的葉片分別在一天之內(nèi)(24h)每兩個小時采集一次，一共采集12次。熒光定量分析同上。

如圖3所示結(jié)果顯示，hbft2基因在長日照和短日照環(huán)境下皆表現(xiàn)出相似的表達模式。在兩種光周期條件下，從早上8點到下午16點，hbft2基因的表達量都十分微弱，16點后，長日照環(huán)境下的表達量達到最高，而短日照環(huán)境下的表達量卻仍然持續(xù)升高，直到晚上22點為止，此時hbft2基因的表達量最高。從凌晨2點開始，hbft2基因的表達量回到并一直保持著比較穩(wěn)定的低表達水平。

實施例5不同溫度對hbft2基因表達的影響

將40株3個月大的小苗平均分成兩組，每組20株。第一組植株種植在一個培養(yǎng)箱，里面設定28℃、32℃和36℃三個溫度時段；另外一組則培養(yǎng)在另外一個培養(yǎng)箱里，里面分別設定28℃、24℃、20℃、16℃和8℃五個溫度時段。每個溫度持續(xù)3天，然后依次調(diào)到下一個溫度。為了避免光周期和生物鐘可能對hbft2表達的影響，統(tǒng)一在每天早上10點準時采樣。

如圖4所示的結(jié)果顯示，在28℃時，hbft2基因表達量達到最高，當溫度高于或者低于28℃時，其表達量會受到抑制，由此說明，28℃是橡膠樹hbft2基因表達的最適合的誘導溫度。

實施例6橡膠樹hbft2基因轉(zhuǎn)化野生型擬南芥的功能驗證

利用pxcs植物表達載體(由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院橡膠研究所保存)與hbft2基因連接構建轉(zhuǎn)化擬南芥野生型轉(zhuǎn)化載體。具體實施方案如下：

分別設計構建植物表達載體的目標基因的引物：所用到的用于構建植物表達載體的引物即為實施例1中所述基因的特異引物，其中基因的正引物5’端分別加有ecori酶切位點，反引物5’端分別加有xmai酶切位點。獲得的pcr產(chǎn)物與pmd19-t載體連接并進行測序。最后，提取測序正確的質(zhì)粒，用ecori和xmai分別雙酶切pxcs和測序正確的質(zhì)粒，通過t4dna連接酶構建hbft2目標基因的植物表達載體，并命名為pxcs-hbft2。

對于野生型擬南芥的侵染，參照文獻(cloughsjandbentaf.1998.floraldip:asimplifiedmethodforagrobacterium-mediatedtransformationofarabidopsisthaliana.plantj16,735-743.)獲得的t0代種子，先將其用自來水浸泡，并放置于4℃環(huán)境暗室里春化3天。之后播撒在經(jīng)1/2m培養(yǎng)基浸泡過的蛭石上面于22℃長日照環(huán)境生長(16h/8h)，待小苗發(fā)芽時，用濃度為10mg/l的除草劑進行噴灑，以便篩選抗性植株。10天后，將生長正常的小苗移栽到營養(yǎng)土(營養(yǎng)土：蛭石＝2：1)中生長并等待收種。陽性植株的檢測通過southern方法，此方法參照文獻(blancg,baptistec,oliverg,martinf,montorop.2006.efficientagrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationofembryogeniccalliandregenerationofheveabrasiliensismüllarg.plants.plantcellrep2006,24,724-733)。

將基因t3代轉(zhuǎn)基因植株分別和野生型在相同環(huán)境中培養(yǎng)，并比較對它們進行開花表型比較，結(jié)果見圖5及表1。

表135s::hbft2的轉(zhuǎn)基因擬南芥和野生型開花比較

*表示0.01<p<0.05；**表示p<0.01.

結(jié)果顯示，所有35s::hbft2/wt的野生型轉(zhuǎn)基因株系都能表現(xiàn)出不同程度的早花表型，野生型植株25天左右開花，而轉(zhuǎn)基因株系在17-19天開花，開花時間和輪座葉數(shù)目確實比野生型的要少。

實施例7hbft2基因?qū)t-10突變體表型恢復驗證實驗

將構建好的hbft2目標基因植物表達載體轉(zhuǎn)化擬南芥ft-10突變體中，參照文獻(clough，s.j.andbent，a.f.(1998)floraldip:asimplifiedmethodforagrobacterium-mediatedtransformationofarabidopsisthaliana.plantj.16:735-743.)。獲得的t0代種子，先將其用自來水浸泡，并放置于4℃環(huán)境暗室里春化3天。之后播撒在經(jīng)1/2m培養(yǎng)基浸泡過的蛭石上面于22℃長日照環(huán)境生長(16h/8h)，待小苗發(fā)芽時，用濃度為10mg/l的除草劑進行噴灑，以便篩選抗性植株。10天后，將生長正常的小苗移栽到營養(yǎng)土(營養(yǎng)土：蛭石＝2：1)中生長并等待收種。

ft-10突變體轉(zhuǎn)基因植株分別和野生型、ft-10突變體植株在相同環(huán)境中培養(yǎng)，并分別比較它們和野生型，ft-10突變體植株的開花表型，結(jié)果見圖6和下表2。

表235s::hbft2的ft-10突變體轉(zhuǎn)基因擬南芥和ft-10突變體以及野生型開花比較

*表示0.01<p<0.05；**表示p<0.01.

結(jié)果顯示，ft-10突變體植株開花時間為42天左右，而ft-10突變體轉(zhuǎn)基因植株都不同程度的出現(xiàn)了比ft-10突變體更早的早花表型，且選取的6株35s::hbft2/ft-10轉(zhuǎn)基因株系甚至表現(xiàn)出比野生型擬南芥還要早的開花表型并長出更少的輪座葉。

顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。

序列表

<110>中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院橡膠研究所

<120>一種橡膠樹開花調(diào)控基因hbft2及其克隆與應用

<160>3

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>971

<212>cdna

<213>橡膠樹屬橡膠

<400>1

tggaaagcatattggcatagaaagtaaaagctggatacctcagaacaatatataaatacc60

taatgtatgtgattgaatttcatagctagcaacaacccatcaacagaataatattactgc120

tccacttgtgcttctcctatttgaaaatgcctagagatcctctggttgttggacgtgtgg180

taggggatgttttggatcccttcacaaggtctatttctcttcatgtcacttacaataaca240

gagatcatgtcaacaatggctgtgagctcaaaccctctcaagttgtcaaccaacctaggg300

ttgatgtaggtggagatgatttaaggatcttctacactttggtcatggtggaccctgacg360

ctcctagccccagtgaccctactctcagagaatacttgcattggttggtgaccgatattc420

cagcaactacaggagcaggctttgggcaggaggttgtgtgctatgagagtccacggccgt480

cggtggggattcatcggtttgttttcgtattattccggcaactagggaggcagactgtgt540

atgcacctgggtggcgtcagaattttaacactagggactttgctgagctttacaatcttg600

gattgccggtggccgctgtttactttaactgccagagggagagtggctccgggggaagaa660

ggcgaggacaataattataattaatttaattataatggcctgcatgtctccaatcaatgt720

attttccactaaaagatctttctaccatttgaccccatatgtgccatgaaaaaggaaggg780

aaagggaaaataaataaagaaacaaagtaataataaagaagggaagattacaagcgggcg840

agttatatatgctctgtatctccaactagctacatatagctggattcctaatggctcgaa900

taggtgtaatatatctagctatattaacatatatacaaataaatttaaaagatatacaag960

tataattatgc971

<210>2

<211>175

<212>prt

<213>橡膠樹屬橡膠

<400>2

metproargaspproleuvalvalglyargvalvalglyaspvalleu

151015

aspprophethrargserileserleuhisvalthrtyrasnasnarg

202530

asphisvalasnasnglycysgluleulysproserglnvalvalasn

354045

glnproargvalaspvalglyglyaspaspleuargilephetyrthr

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