本發(fā)明涉及一種熒光素類半胱氨酸熒光探針以及其在檢測(cè)半胱氨酸中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

半胱氨酸(cysteine)屬于20種天然氨基酸之一，是一種含硫的非必需氨基酸。動(dòng)物體內(nèi)可經(jīng)由蛋氨酸和絲氨酸合成。具有緩解修復(fù)放射線對(duì)人體的損傷作用。半胱氨酸是不穩(wěn)定的化合物，容易氧化還原，與胱氨酸相互轉(zhuǎn)換。可與有毒的芳香族化合物縮合成硫醚氨酸(mercapturicacid)而起解毒作用。半胱氨酸在食品加工中具有許多用途，它主要用于焙烤制品，作為面團(tuán)改良劑的必需成分，它作為一種還原劑，它可以促進(jìn)面筋的形成，減少混合所需的時(shí)間和所需藥用的能量，半胱氨酸通過改變蛋白質(zhì)分子之間和蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的二硫鍵，減弱了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，這樣蛋白質(zhì)就伸展開來。

目前，半胱氨酸含量測(cè)定的方法有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、全自動(dòng)的熒光偏振免疫測(cè)定、高效毛細(xì)管電泳法、有機(jī)小分子熒光探針檢測(cè)法等。在各種方法中有機(jī)小分子熒光探針檢測(cè)法由于其具有簡單、便捷、成本低、快速、靈敏及其潛在的細(xì)胞內(nèi)成像等特性，已被證明是一種非常有效的檢測(cè)方法，目前許多的有機(jī)小分子熒光探針被開發(fā)出來。

熒光素具有較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度、優(yōu)良的溶解性、易于制備等特征，因此成為熒光探針使用非常廣泛的熒光基團(tuán)之一。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種熒光素類半胱氨酸熒光探針，它適于在食品、藥品、化妝品等產(chǎn)品中檢測(cè)半胱氨酸。

更具體的是，本發(fā)明涉及一種熒光素類半胱氨酸熒光探針，它通過下式表示：

附圖說明

圖1是在磷酸緩沖鹽溶液中，本發(fā)明的熒光探針(10μm)在半胱氨酸(30μm)加入前后的顏色變化。

圖2是在磷酸緩沖鹽溶液中，隨著不同濃度半胱氨酸的加入，本發(fā)明的熒光探針(10μm)的熒光強(qiáng)度變化。嵌入圖：半胱氨酸的濃度。

圖3是在磷酸緩沖鹽溶液中，本發(fā)明的熒光探針(10μm)熒光強(qiáng)度隨著半胱氨酸濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1.熒光素類半胱氨酸熒光探針的制備

合成路線如下式所示：

將1g(3mmol)a熒光素與0.8g(3mmol)b2，4-二硝基苯磺酰氯加入到50ml三口燒瓶中，再將一滴三乙胺加入到其中，加入10ml三氯甲烷，加熱回流5h。后將溫度將至室溫，旋蒸濃縮，柱層析分離純化(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)，得白色晶體105mg。

產(chǎn)物經(jīng)過核磁氫譜及核磁碳譜表征。

¹hnmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：10.25(s，1h)，8.91(d，j＝2.7hz，1h)，8.48(dd，j＝9.3，2.7hz，1h)，8.00(d，j＝7.2hz，1h)，7.72-7.85(m，2h)，7.42(d，j＝9.3hz，1h)，7.26-7.36(m，2h)，7.00(dd，j＝8.7，2.4hz，1h)，6.91(d，j＝8.7hz，1h)，6.70(d，j＝0.9hz，1h)，6.61(s，2h).

¹³cnmr(300mhz，dmso)：δ(ppm)：169.1，160.2，156.1，154.2，152.8，152.4，151.9，142.8，140.5，136.4，136.4，130.9，130.3，129.7，126.3，125.4，124.6，122.5，121.5，117.0，116.2，113.7，109.6，108.5，102.8，82.4.

如圖1所示，隨著半胱氨酸的加入，本發(fā)明的熒光探針溶液的顏色由淺黃色變?yōu)辄S綠色，該顏色變化可以在自然光下用人眼直接觀察到，表明本發(fā)明的熒光探針可用于半胱氨酸的定性檢測(cè)。本發(fā)明的熒光探針的熒光強(qiáng)度隨著半胱氨酸濃度的變化如圖2所示，依據(jù)該變化可作出該熒光探針(10μm)熒光強(qiáng)度隨著半胱氨酸濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示，通過該標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，本發(fā)明的熒光探針可用于半胱氨酸的定量檢測(cè)。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種熒光素類半胱氨酸熒光探針，具體化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式所示：本發(fā)明的熒光探針可用于食品、藥品、化妝品中半胱氨酸的檢測(cè)。

技術(shù)研發(fā)人員：楊紹祥;田紅玉;劉永國;孫寶國;王嘉琳;王皓;郝顏峰
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京工商大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.05.16
技術(shù)公布日：2017.09.08