本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)，尤其涉及一種通過生物技術(shù)擴增脫氧胸苷三磷酸的方法。
背景技術(shù)：
聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，pcr)由美國centus公司的karymullis發(fā)明，于1985年由saiki等在science雜志上首次報道，是近年來開發(fā)的體外快速擴增dna的技術(shù)。通過pcr可以簡便、快速地從微量生物材料中以體外擴增的方式獲得大量特定的核酸，并且有很高的靈敏度和特異性，可在動物檢疫中用于微量樣品的檢測。
dna分子是由四種脫氧核糖核苷酸分子結(jié)合成的兩條互補多聚核苷酸鏈。合成這些多聚核苷酸的前體是四種脫氧核苷三磷酸，脫氧胸苷三磷酸作為四種原料之一參與核酸分子的體內(nèi)或體外擴增。附著生物技術(shù)工業(yè)的發(fā)展特別是dna生物合成和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的推廣，市場上對dna擴增所需要的脫氧核苷三磷酸的需求量將會明顯地持續(xù)升高。另外，由于脫氧胸苷三磷酸在抗病毒抗腫瘤，治療心血管疾病等方面應(yīng)用的推廣，同樣也會對本發(fā)明所闡述的產(chǎn)品，脫氧胸苷三磷酸的需求量的提高起到促進作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種一種通過生物技術(shù)擴增脫氧胸苷三磷酸的方法，采用的技術(shù)方案是：
一種通過生物技術(shù)擴增脫氧胸苷三磷酸的方法，其包括：脫氧胸苷三磷酸模版dna、限制性切刻酶、dna聚合酶、脫氧核苷三磷酸、與靶核酸序列3’末端互補的寡核苷酸引物、表面活性劑，所述方法包括以下步驟：
a、在樣品脫氧胸苷三磷酸模版dna培養(yǎng)液中加入一種或多種能夠在所選限制位點切割dna的限制性切刻酶，該限制性切刻酶在該dna的一條鏈上形成特定的3’末端；
b、加入寡核苷酸引物，該啟動子引物5’區(qū)域包含被dna的rna聚合酶所識別的啟動子序列，且其3’區(qū)域與步驟a形成的dna特定的3’末端互補；
c、向樣品中加入dna聚合酶，脫氧核苷三磷酸，表面活性劑；
d、控制溫度，將如此形成的混合物保持足夠的時間，以進行擴增。
至少兩種與靶核酸序列3’末端互補的寡核苷酸引物。
至少一種具有鏈置換能力的dna聚合酶。
至少一種脫氧核苷三磷酸。
所述表面活性劑為聚氧乙烯失水山梨醇單脂肪酸脂。
所述培養(yǎng)液的溫度控制在40℃～50℃內(nèi)。
所述溶液在基本恒溫的條件下進行擴增的時間為45～60分鐘。
所述溶液的ph值控件在7.0－8.0。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明基本上在恒溫的條件下擴增靶核酸序列，以外通過添加限制性切刻酶而不需要額外添加任何另外的試劑，而且時間短，工藝結(jié)構(gòu)簡單，降低了生產(chǎn)成本。
具體實施方式
一種通過生物技術(shù)擴增脫氧胸苷三磷酸的方法，其包括：脫氧胸苷三磷酸模版dna、限制性切刻酶、至少一種具有鏈置換能力的dna聚合酶、至少一種具有鏈置換能力的dna聚合酶、至少兩種與靶核酸序列3’末端互補的寡核苷酸引物、聚氧乙烯失水山梨醇單脂肪酸脂表面活性劑，所述方法包括以下步驟：a、在樣品脫氧胸苷三磷酸模版dna培養(yǎng)液中加入一種或多種能夠在所選限制位點切割dna的限制性切刻酶，該限制性切刻酶在該dna的一條鏈上形成特定的3’末端；b、加入寡核苷酸引物，該啟動子引物5’區(qū)域包含被dna的rna聚合酶所識別的啟動子序列，且其3’區(qū)域與步驟a形成的dna特定的3’末端互補；c、向樣品中加入dna聚合酶，脫氧核苷三磷酸，表面活性劑；d、控制溫度，將如此形成的混合物保持足夠的時間，以進行擴增。所述培養(yǎng)液的溫度控制在40℃～50℃內(nèi)，所述溶液在基本恒溫的條件下進行擴增的時間為45～60分鐘，所述溶液的ph值控件在7.0－8.0。