本發(fā)明屬于瀝青制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法。
背景技術(shù)：
乳化瀝青，就是將黏稠的瀝青加熱至流動態(tài)，再經(jīng)機械力的作用形成微滴分散在有乳化劑一穩(wěn)定劑的水中而形成的均勻、穩(wěn)定的乳狀液。乳化瀝青是一種熱力學不穩(wěn)定體系。其穩(wěn)定性是由外界所添加的乳化劑、乳液穩(wěn)定劑等所產(chǎn)生的各種作用而引起的，目前的乳化瀝青存在著穩(wěn)定性不足的問題。
鼠李糖脂是一種糖脂類生物表面活性劑，具有較強的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，對環(huán)境友好，在石油開采、生物修復、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品醫(yī)藥等領(lǐng)域具有潛在的應用價值。但不前關(guān)于鼠李糖脂作為乳化劑應用于乳化瀝青的研究卻很少。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種乳化效果好、穩(wěn)定性好的等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：銅綠假單胞菌接種于斜面培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)24h；
步驟二：將斜面培養(yǎng)基上的菌落接到種子培養(yǎng)基，37℃、搖床轉(zhuǎn)速200r·min-1，培養(yǎng)24h；
步驟三：利用接種針將種子培養(yǎng)基上的菌落輕刮進裝有50l生理鹽水的容器中，置于搖床中震蕩30min后，用塞有無菌脫脂棉的漏斗過濾，吸取10ml濾液于無菌培養(yǎng)皿中，采用常壓室溫等離子體誘變處理2min，然后利用生理鹽水稀釋至8％(v/v)，將稀釋液均勻涂布于平板培養(yǎng)基上，37℃下，平板培養(yǎng)4d；
步驟四：挑取平板培養(yǎng)基上的菌落置于發(fā)酵培養(yǎng)基中，并于37℃、250rpm的搖床中培養(yǎng)4天后，得發(fā)酵液；
步驟五：取發(fā)酵液，在25℃、10000rpm的條件下離心處理3min，用移液槍吸取上清液到容器中，再加入5倍體積的乙酸萃取，用旋渦振蕩器混勻，靜置24h后，將上層有機相抽提到容器中，并將其放入通風廚中待乙醚揮發(fā)完全，得鼠李糖脂；
步驟六：稱取2g瀝青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管將100ml水緩慢滴加置容器中，并用攪拌機以600r/min的速度不停攪拌，混合均勻。
優(yōu)選的，步驟六中所述的滴加水的速度控制在10ml/min。
優(yōu)選的，步驟一中所述的斜面培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，包含：牛肉膏3g/l、蛋白胨10g/l、氯化鈉5g/l、瓊脂20g/l。
優(yōu)選的，步驟四中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含：k2hpo44g/l、kh2po44g/l、kcl1g/l、nano32.5g/l、nacl1g/l、cacl2·2h2o0.1g/l，mgso40.2g/l，酵母粉1g/l，甘油30v/v。
優(yōu)選的，步驟三中所述的平板培養(yǎng)基包含：葡萄糖20g/l、硝酸銨2.5g/l、酵母膏0.05g/l、磷酸二氫鉀10g/l、磷酸氫二鈉4g/l、瓊脂20g/l。
優(yōu)選的，步驟二中所述的種子培養(yǎng)基包含：naclg/l，胰蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l。
本發(fā)明的有益效果在于：
1)鼠李糖脂具有較強的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，對環(huán)境友好。
2)采用本發(fā)明制備的等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青，乳化效果好、穩(wěn)定性好，具有良好的降濾失性和抑制性。
3)采用等離子體作為誘變劑，對銅綠假單胞菌菌株進行誘變處理，獲得鼠李糖脂的產(chǎn)量更高。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
實施例1
一種等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：銅綠假單胞菌接種于斜面培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)24h；
步驟二：將斜面培養(yǎng)基上的菌落接到種子培養(yǎng)基，37℃、搖床轉(zhuǎn)速200r·min-1，培養(yǎng)24h；
步驟三：利用接種針將種子培養(yǎng)基上的菌落輕刮進裝有50l生理鹽水的容器中，置于搖床中震蕩30min后，用塞有無菌脫脂棉的漏斗過濾，吸取10ml濾液于無菌培養(yǎng)皿中，采用常壓室溫等離子體誘變處理2min，然后利用生理鹽水稀釋至8％(v/v)，將稀釋液均勻涂布于平板培養(yǎng)基上，37℃下，平板培養(yǎng)4d；
步驟四：挑取平板培養(yǎng)基上的菌落置于發(fā)酵培養(yǎng)基中，并于37℃、250rpm的搖床中培養(yǎng)4天后，得發(fā)酵液；
步驟五：取發(fā)酵液，在25℃、10000rpm的條件下離心處理3min，用移液槍吸取上清液到容器中，再加入5倍體積的乙酸萃取，用旋渦振蕩器混勻，靜置24h后，將上層有機相抽提到容器中，并將其放入通風廚中待乙醚揮發(fā)完全，得鼠李糖脂；
步驟六：稱取2g瀝青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管將100ml水緩慢滴加置容器中，并用攪拌機以600r/min的速度不停攪拌，混合均勻。
步驟六中所述的滴加水的速度控制在10ml/min。
步驟一中所述的斜面培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，包含：牛肉膏3g/l、蛋白胨10g/l、氯化鈉5g/l、瓊脂20g/l。
步驟四中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基包含：k2hpo44g/l、kh2po44g/l、kcl1g/l、nano32.5g/l、nacl1g/l、cacl2·2h2o0.1g/l，mgso40.2g/l，酵母粉1g/l，甘油30v/v。
步驟三中所述的平板培養(yǎng)基包含：葡萄糖20g/l、硝酸銨2.5g/l、酵母膏0.05g/l、磷酸二氫鉀10g/l、磷酸氫二鈉4g/l、瓊脂20g/l。
步驟二中所述的種子培養(yǎng)基包含：naclg/l，胰蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l。
將本發(fā)明實施例1制得的等離子體誘變鼠李糖脂乳化瀝青和市面上的其他陰離子乳化瀝青的儲存穩(wěn)定性對比結(jié)果見下表1，存儲時間為5天。
表1