本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種超聲輔助提取高粱麩皮中二氫槲皮素的方法。

背景技術(shù)：

二氫槲皮素又叫花旗松素、紫杉葉素，其化學(xué)名為3,5,7,3',4'一五輕基二氫黃酮，英文名dihydroquercetin，taxifolin，3,5,7,3',4'-pentahydroxyflavanone，分子式為c15h12o7，分子量為304.26。二氫槲皮素是天然黃酮類活性成分之一，屬于維生素pp家族，具有很強(qiáng)的抗氧化能力。它能從人體中有效地消除過量的自由基，促進(jìn)毛細(xì)血管的滲透性，改善免疫功能，減少癌癥的形成；是防止心血管疾病、有效恢復(fù)毛細(xì)血管彈性、阻止發(fā)炎和腫塊形成的優(yōu)良天然藥物。同時，二氫槲皮素還是高效的天然食品抗氧化劑，它的抗氧化作用超過其它諸如槲皮素、蕓香苷和合成抗氧化劑等。二氫槲皮素廣泛存在于松科植物中，如海岸松、落葉松、花旗松，并且是落葉松中含量最大的黃酮類化合物，但是二氫槲皮素在植物中含量偏低，一般只有0.3～5.7％，這些因素使得二氫槲皮素的價格較為昂貴，這也進(jìn)一步阻礙了它的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。

高粱是我國北方和西南地區(qū)的主要作物之一，主要用于釀酒和飼料工業(yè)，少部分作為雜糧食用。高粱麩皮約占高粱籽粒質(zhì)量的12％，含有大量的原花青素、花青素、單寧、酚類、甾醇等，具有較高的抗氧化能力，高粱麩皮因此也具有抗癌防癌功效。前期研究發(fā)現(xiàn)，高粱麩皮中含有二氫槲皮素組分，但目前尚未有從高粱麩皮中提取分離二氫槲皮素的文獻(xiàn)報道和專利申請。超聲輔助提取是利用超聲波產(chǎn)生的高速、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)和攪拌作用破壞藥材的細(xì)胞，使溶劑滲透到藥材細(xì)胞中而提取有效成分的一種綠色、環(huán)保、高效、節(jié)能的提取方法，具有提取時間短，提取效率高的優(yōu)點(diǎn)，采用超聲輔助提取高粱麩皮中二氫槲皮素的方法至今未見相關(guān)文獻(xiàn)報道。本發(fā)明可進(jìn)一步擴(kuò)大高粱麩皮的開發(fā)和利用，同時也為二氫槲皮素的提取提供新資源和新方法，可產(chǎn)生良好的社會效益和可觀的經(jīng)濟(jì)效益。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種超聲輔助提取高粱麩皮中萃取二氫槲皮素的方法。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種超聲輔助提取高粱麩皮中二氫槲皮素的方法，按照下述步驟進(jìn)行：

(1)以高粱麩皮為原料，干燥后粉碎過20～200目篩；

(2)將高粱麩皮粉末與乙醇水溶液按一定質(zhì)量體積比混合，在超聲條件下進(jìn)行提取，經(jīng)抽濾后，對濾渣重復(fù)萃取三次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味的浸膏；

(3)將步驟2所述浸膏上大孔吸附樹脂層析柱進(jìn)行初步分離，上樣后，先用蒸餾水洗脫除去未吸附的水溶性雜質(zhì)，再用一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇水溶液洗脫，收集有效餾分液；

(4)將上述有效餾分液減壓濃縮至無醇味，置于低溫條件下，使其析出結(jié)晶粗產(chǎn)物；粗產(chǎn)物再經(jīng)重結(jié)晶、真空干燥后得二氫槲皮素純品。

步驟(2)中，所述乙醇的水溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為10～95％；高粱麩皮與水的用量比為1g:10～50ml；所述提取過程在超聲設(shè)備中進(jìn)行，超聲頻率25khz，功率100～300w，溫度25～70℃的條件下，超聲提取5～60min。

步驟(3)中，所述大孔吸附樹脂為非極性或中等極性，具體型號為d101、ab-8和ads-17等；所述一定體積的乙醇水溶液中，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30～95％；所述有效餾分液為經(jīng)hplc檢測含有二氫槲皮素的餾分液。

步驟(4)中，所述低溫條件為0～4℃；所述重結(jié)晶的具體步驟為：將二氫槲皮素粗產(chǎn)物，用熱水溶解，趁熱抽濾，攪拌冷卻，放于0-4℃條件下重結(jié)晶，反復(fù)結(jié)晶三次，得到二氫槲皮素。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明公開的超聲輔助提取高粱麩皮中二氫槲皮素的方法，所用提取溶劑和高粱麩皮原料低廉易得，涉及到的工藝流程簡單，操作簡便，涉及到的化學(xué)藥劑成本較低，可回收重復(fù)使用，無有毒有害試劑污染，可進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，可用于醫(yī)藥用原料藥。

附圖說明

圖1為從高粱麩皮中分離得到二氫槲皮素單體化合物的hplc圖。

具體實施方式

下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。

實施例1

取粉碎過20目篩的高粱麩皮粉末100g，加入1000ml體積分?jǐn)?shù)為10％的乙醇水溶液，在超聲頻率25khz，功率100w，溫度25℃的條件下，超聲提取5min，提取結(jié)束后，經(jīng)抽濾，濾渣重復(fù)提取三次，合并濾液，真空減壓濃縮至無醇味；將濃縮液以3ml/min流速上大孔樹脂色譜柱(ab-8大孔吸附樹脂，非極性，玻璃柱型號為φ3.0*l100cm)，以同樣的流速，用2000ml蒸餾水沖洗柱子；采用體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇水溶液洗脫，收集二氫槲皮素有效餾分液，用高效液相色譜檢測(方法見實施例3)；將收集的有效餾分液經(jīng)減壓濃縮至無醇味，于0℃下靜置，析出結(jié)晶后過濾，得二氫槲皮素粗品；將二氫槲皮素粗產(chǎn)物，用熱水溶解，趁熱抽濾，攪拌冷卻，將該濾液于0℃的條件下靜置，經(jīng)重結(jié)晶，室溫真空干燥后，得二氫槲皮素純品。經(jīng)hplc檢測，二氫槲皮素純度高于97.56％，提取率為80.3％。

實施例2

取粉碎過200目篩的高粱麩皮粉末100g，加入5000ml體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液，在超聲頻率25khz，功率300w，溫度70℃的條件下，超聲提取60min，提取結(jié)束后，經(jīng)抽濾，濾渣重復(fù)提取三次，合并濾液，真空減壓濃縮；將濃縮液液以3ml/min流速上大孔樹脂色譜柱(ads-17大孔吸附樹脂，非極性，玻璃柱型號為φ3.0*l100cm)，以同樣的流速，用2000ml蒸餾水沖洗柱子；采用體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液洗脫，收集二氫槲皮素有效餾分液，用高效液相色譜檢測(方法見實施例3)；將收集的有效餾分液經(jīng)減壓濃縮至無醇味，于4℃下靜置，析出結(jié)晶后過濾，得二氫槲皮素粗品；將二氫槲皮素粗產(chǎn)物，用熱水溶解，趁熱抽濾，攪拌冷卻，將該濾液于4℃的條件下靜置，經(jīng)重結(jié)晶，室溫真空干燥后，得二氫槲皮素純品。經(jīng)hplc檢測，二氫槲皮素純度高于95.16％，提取率為，提取率為83.7％。

實施例3

本實施例為二氫槲皮素檢測方法的實施例。

二氫槲皮素通過高效液相色譜法檢測，二氫槲皮素產(chǎn)品在檢測波長為290nm，經(jīng)安捷倫zorbaxsb-c18柱(4.6×250mm，5μm)分離(流動相：a相為0.1％的乙酸水溶液，b相為甲醇；流速為1ml/min，柱溫為25℃，梯度洗脫)，色譜圖如圖1所示，二氫槲皮素在25.45min處出現(xiàn)色譜峰，在同一色譜條件下，該峰的保留時間與山柰苷對照品的保留時間一致。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種超聲輔助提取高粱麩皮中二氫槲皮素的方法，屬于天然產(chǎn)物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。該方法以高粱麩皮為原料，經(jīng)超聲輔助提取、抽濾，減壓濃縮、低溫靜置、離心、分離/富集、洗脫、餾分液低溫靜置、結(jié)晶和重結(jié)晶、干燥的步驟，得到二氫槲皮素純品。本發(fā)明方法可用于高純度二氫槲皮素的工業(yè)化生產(chǎn)，所用高粱麩皮原料低廉易得，工藝流程簡單，操作簡便，成本低，無有毒有害試劑污染，可用于醫(yī)藥用原料藥。

技術(shù)研發(fā)人員：段玉清;羅孝平;崔潔媚;張海暉;張迪;蔡梅紅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.07.24
技術(shù)公布日：2017.09.29