技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種生物發(fā)酵l-蘋果酸的提取制備方法。
背景技術(shù)：
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l-蘋果酸是一種重要的有機(jī)酸，在化工、食品、醫(yī)藥、畜牧等行業(yè)領(lǐng)域具有廣泛的用途。l-蘋果酸作為酸化劑和病原微生物的抑制劑已用于反芻動物[1]。對動物的生理和營養(yǎng)作用主要表現(xiàn)以下五方面[2]：1.改善胃腸道內(nèi)微生物區(qū)系，抑制有害菌生長，促進(jìn)有益菌增值。2.調(diào)節(jié)胃中ph值和減緩胃的排空速度，促進(jìn)營養(yǎng)消化吸收。3.直接參與體內(nèi)代謝，提高營養(yǎng)消化率。4.改善飼料適口性，增強(qiáng)食欲。5.抗應(yīng)激。因此在動物飼料使用過程中替代胃酸，抑制病原微生物，減少抗生素使用，提高斷奶仔豬的日增重有很好效果，有廣闊的市場前景。
蘋果酸(malicacid)化學(xué)名稱：對羥基丁二酸，分子式為hoocch2ch(oh)cooh。
l-蘋果酸在化工、食品、醫(yī)藥、畜牧等行業(yè)領(lǐng)域具有廣泛的用途，特別是在畜牧行業(yè)能減少抗生素，提高生產(chǎn)性能有著廣泛的用途。但畜牧行業(yè)使用需考慮使用成本和吸收利用度，目前直接利用淀粉質(zhì)原料生物發(fā)酵量產(chǎn)l-蘋果酸的還沒有量產(chǎn)，因此在畜牧行業(yè)的廣泛使用受到限制。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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為了解決以淀粉質(zhì)原料生物發(fā)酵l-蘋果酸的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種生物發(fā)酵l-蘋果酸粉，此種生物發(fā)酵l-蘋果酸粉具有蘋果芳香，糖酸轉(zhuǎn)化率80％以上，且制備成本低。
本發(fā)明的生物發(fā)酵l-蘋果酸的提取制備方法為：步驟一：菌種復(fù)蘇：將高產(chǎn)菌株aspflavus置于發(fā)酵配方中混勻，在培養(yǎng)溫度30℃條件下，培養(yǎng)2-3天，搖轉(zhuǎn)速度60r/分鐘下制成復(fù)蘇的菌種；其中所述的發(fā)酵配方的制備方法為：將豆餅6g、蔗糖2g、nano30.3g、k2hpo30.1、kcl0.1、feso4.7h2o0.05、mgso4.7h2o0.03g加水至100ml；
步驟二：將步驟一制備的復(fù)蘇的菌種按10％的比例加入到發(fā)酵培養(yǎng)物中，發(fā)酵溫度30℃，發(fā)酵時間121小時，在攪拌60r/分鐘條件下得到發(fā)酵產(chǎn)物，其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)物的制備方法為：將豆餅0.5g、葡萄糖8.0-13.0g、nano30.3g、k2hpo30.1g、cacl20.1g、feso4.7h2o0.01g、mgso4.7h2o0.01g、mnso40.05g、(nh4)2so40.02g、caco36.5-8.5g加水至100ml即可。
步驟三：將步驟二的得到的發(fā)酵產(chǎn)物首先進(jìn)行負(fù)壓真空濃縮后，然后加入脫脂米糠混合均勻，在溫度80-90℃下進(jìn)行烘干，烘干時間12h，然后將烘干的產(chǎn)物進(jìn)行粉碎得到l-蘋果酸粉。
作為優(yōu)選，所述的l-蘋果酸粉碎后粉碎顆粒為45-60目。
作為優(yōu)選，所述的l-蘋果酸粉含水量≤3％。
本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明解決了以淀粉質(zhì)原料生物發(fā)酵l-蘋果酸的技術(shù)問題，提取上采用負(fù)壓真空濃縮技術(shù)，濃縮時間縮短40％，濃縮溫度降低20％，糖酸轉(zhuǎn)化率為80％以上，成本低。且發(fā)酵生成的蘋果酸全是l型，不需要再進(jìn)行分離。
具體實施方式：
本具體實施方式采用以下技術(shù)方案和實施例對發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
實施例：本實施例中生物發(fā)酵l-蘋果酸的提取制備方法為：步驟一：菌種復(fù)蘇：將高產(chǎn)菌株aspflavus置于發(fā)酵配方中混勻，在培養(yǎng)溫度30℃條件下，培養(yǎng)2天，搖轉(zhuǎn)速度60r/分鐘下制成復(fù)蘇的菌種；其中所述的發(fā)酵配方的制備方法為：將豆餅6g、蔗糖2g、nano30.3g、k2hpo30.1、kcl0.1、feso4.7h2o0.05、mgso4.7h2o0.03g加水至100ml；
步驟二：將步驟一制備的復(fù)蘇的菌種按10％的比例加入到發(fā)酵培養(yǎng)物中，發(fā)酵溫度30℃，發(fā)酵時間121小時，在攪拌60r/分鐘條件下得到發(fā)酵產(chǎn)物，其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)物的制備方法為：將豆餅0.5g、葡萄糖8.0-13.0g、nano30.3g、k2hpo30.1g、cacl20.1g、feso4.7h2o0.01g、mgso4.7h2o0.01g、mnso40.05g、(nh4)2so40.02g、caco36.5-8.5g加水至100ml即可。
步驟三：將步驟二的得到的發(fā)酵產(chǎn)物首先進(jìn)行負(fù)壓真空濃縮后，然后加入脫脂米糠混合均勻，在溫度80℃下進(jìn)行烘干，烘干時間12h，然后將烘干的產(chǎn)物進(jìn)行粉碎得到l-蘋果酸粉，粉碎顆粒為45目，含水量1.8％。
將實施例制備的生物發(fā)酵l-蘋果酸進(jìn)行如下試驗，試驗一：肉雞臨床使用試驗選取1日齡肉仔雞健雛8400羽，隨機(jī)分成2兩個組，公母各50％，都按常規(guī)免疫程序疫苗免疫，對照組喂基礎(chǔ)日糧，試驗組喂基礎(chǔ)日糧+0.4％的生物發(fā)酵l-蘋果酸，試驗45天。
結(jié)果：對照組肉仔雞的死亡率分別為4.57％，試驗組為2.43％，出欄時每羽均重對照組2.58kg，試驗組3.04kg。
結(jié)論：生物發(fā)酵l-蘋果酸應(yīng)用于肉雞具有降低死亡率提高肉雞出欄重的作用?？墒谷怆u死亡率降低47％，出欄體重提高18％，大大提高了養(yǎng)殖者的經(jīng)濟(jì)效益。
試驗二：斷奶仔豬臨床藥效試驗，選取28日齡斷奶仔豬100頭，隨機(jī)分成2組，公母各50％，都按常規(guī)免疫程序疫苗免疫，對照組喂基礎(chǔ)日糧，試驗組喂基礎(chǔ)日糧+0.2％的生物發(fā)酵l-蘋果酸，試驗35天。
結(jié)果：對照組斷奶仔豬的死亡率分別為4％，試驗組為0，出欄時頭豬均重對照組30.88kg，試驗組33.39kg。
結(jié)論：生物發(fā)酵l-蘋果酸應(yīng)用于斷奶仔豬具有降低死亡率提高保育階段仔豬體重的作用?？山档捅ＳA段仔豬死亡率，體重提高8％，大大提高了養(yǎng)豬的經(jīng)濟(jì)效益。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。