本發(fā)明涉及一種利用動(dòng)物臟器提取肝素鈉的制備工藝，尤其是豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù)。
背景技術(shù)：
肝素鈉是廣泛存在于動(dòng)物器官(如：牛、羊的小腸粘膜、肝、胰臟及肺組織等)的一種葡萄胺聚糖，和大多數(shù)粘多糖一樣在體內(nèi)作為蛋白質(zhì)結(jié)合的復(fù)合物存在，這種復(fù)合物的抗凝活性隨著蛋白質(zhì)的去除而增加。肝素納及其衍生物藥品是經(jīng)典的抗凝、抗血栓藥物，在臨床上廣泛用于治療腎臟病患者的滲血，急性心肌梗塞癥，防止血栓形成，腦血管疾病，皮膚病，清除腎病形成的尿毒以及配合治療暴發(fā)性流腦敗血癥，腎炎等，同時(shí)，肝素鈉在降血脂和免疫等方面也有較好的作用，而且隨著對(duì)其逐漸深入了解，其醫(yī)療用途日益擴(kuò)大，市場(chǎng)供不應(yīng)求。
目前，我國(guó)通常利用豬小腸，提取新鮮腸粘膜液，運(yùn)用傳統(tǒng)的鹽解工藝生產(chǎn)肝素鈉，這種制備方法由于生產(chǎn)周期長(zhǎng)，水解不完全、不徹底，制得的肝素鈉純度低、收率低、效價(jià)低，很難進(jìn)行規(guī)模性生產(chǎn)，且不能滿(mǎn)足市場(chǎng)的大量需求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種產(chǎn)品純度高、雜質(zhì)少、效價(jià)高的豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù)，本工藝采用生物酶酶解法從原材料易得的豬大腸中提取肝素鈉粗品。
本發(fā)明實(shí)現(xiàn)目的的技術(shù)方案如下：
豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù)，步驟如下：
(1)破漿：將豬大腸絞碎再磨成漿狀物，在充分?jǐn)嚢柘录尤胫亓勘?∶1-2的水，混勻得豬大腸漿液；
(2)酶解：豬大腸漿液調(diào)整漿液的ph值為8-10，加入豬大腸漿液重量的1-1.5％的肝素鈉專(zhuān)用酶，攪拌均勻，升溫至45-60℃，保溫反應(yīng)1.5-2.5小時(shí)后，保持反應(yīng)液的ph值為8-10，加入酶解重量的4-5％氯化鈉，攪拌均勻，保溫0.5-1.5小時(shí)，繼續(xù)升溫到90-100℃，保持10-10分鐘，冷卻，得到豬大腸酶解液；
(3)過(guò)濾、吸附：過(guò)濾豬大腸酶解液，去除表面油脂層，濾液再升溫到40-55℃，攪拌狀態(tài)下加入濾液體積的2-4％的大孔吸附樹(shù)脂，攪拌3-5小時(shí)后靜置過(guò)濾，去除上層液，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂；
(4)洗脫：樹(shù)脂先用水沖洗濾干，再用鹽水進(jìn)行梯度洗脫，最后濾干樹(shù)脂；合并梯度洗脫的濾液，得洗脫液；
(5)沉淀獲得粗品：在洗脫液中加入等體積的95％乙醇沉淀過(guò)夜后，除去上層清液，沉淀物為肝素鈉粗品，最后干燥儲(chǔ)存。
而且，所述步驟(3)大孔吸附樹(shù)脂為d-254樹(shù)脂。
而且，所述步驟(3)過(guò)濾用60目尼龍布。
而且，所述梯度洗脫為：用樹(shù)脂體積1-2倍鹽度為4-5波美度氯化鈉洗脫1小時(shí)，濾干；繼續(xù)用樹(shù)脂體積0.5-0.9倍鹽度為4-5波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫45分鐘～70分鐘，濾干樹(shù)脂；再用樹(shù)脂體積2-3倍鹽度為23-24波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫2-3小時(shí)；濾干樹(shù)脂，繼續(xù)用1-2倍鹽度為23-24波美度氯化鈉溶液洗脫3-4小時(shí)，濾干樹(shù)脂。
而且，所述干燥儲(chǔ)存步驟為：肝素鈉粗品置于容器中抽干，然后放入干燥器內(nèi)，定時(shí)置換干燥劑。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為：
1、本發(fā)明將新鮮豬大腸絞碎成漿液、漿液保溫酶解、酶解液過(guò)濾收集濾液、對(duì)濾液進(jìn)行離子交換吸附處理、樹(shù)脂的洗滌與洗脫、肝素鈉的沉淀、干燥得肝素鈉粗品，本發(fā)明采用的酶解方法能更徹底全面地溶解豬大腸漿液，有效提高和穩(wěn)定產(chǎn)品的質(zhì)量以及肝素鈉收率，同時(shí)獲得的粗品雜質(zhì)少、效價(jià)高。
2、本發(fā)明制備工藝設(shè)計(jì)合理，無(wú)廢氣、廢渣、廢水排出污染環(huán)境，運(yùn)營(yíng)生產(chǎn)成本低，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
3、本發(fā)明工藝生產(chǎn)無(wú)毒、無(wú)害、生物環(huán)保，豬大腸原料來(lái)源易得，成本低，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
本實(shí)施例中使用的肝素鈉專(zhuān)用酶均采用南寧東恒華道生物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的肝素鈉提取專(zhuān)用酶。
豬腸粘膜中肝素鈉的提取精制技術(shù)，步驟如下：
(1)破漿：首先將新鮮豬大腸用清水仔細(xì)清洗，除去內(nèi)外污物和外部皮質(zhì)脂肪后，將其絞碎再磨成漿狀物，取1000g豬大腸漿狀物，在充分?jǐn)嚢柘录尤?000g水混勻得豬大腸漿液；
(2)酶解：豬大腸漿液在充分?jǐn)嚢柘拢脷溲趸c溶液調(diào)整漿液的ph值為8.5時(shí)，加入10g肝素鈉專(zhuān)用酶，攪拌均勻，升溫至53℃，保溫反應(yīng)2小時(shí)后，保持反應(yīng)液的ph值為8.5，加入90g氯化鈉，攪拌均勻，保溫1小時(shí)，繼續(xù)升溫到98℃，保持15分鐘，自然冷卻，得到豬大腸酶解液；
(3)過(guò)濾、吸附：豬大腸酶解液自然冷卻后，用60目尼龍布過(guò)濾，并撇去表面油脂層，濾液再升溫到48℃，攪拌狀態(tài)下加入60gd-254樹(shù)脂，攪拌4小時(shí)后靜置過(guò)濾，用虹吸管吸去上層液，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂；
(4)洗脫：樹(shù)脂先用水沖洗濾干，再用70g鹽度為4.5波美度氯化鈉洗脫1小時(shí)，濾干；繼續(xù)用樹(shù)脂體積0.7倍鹽度為4.5波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫45分鐘，濾干樹(shù)脂；再用240g鹽度為23波美度氯化鈉溶液攪拌洗脫2小時(shí)；濾干樹(shù)脂，繼續(xù)用240g鹽度為23-24波美度氯化鈉溶液洗脫3小時(shí)，濾干樹(shù)脂；合并上述濾液得洗脫液；
(5)沉淀獲得粗品：在洗脫液中加入3000g的95％乙醇沉淀過(guò)夜后，用虹吸管除去上層清液，沉淀物為肝素鈉粗品；
(6)干燥儲(chǔ)存：抽濾至干的肝素鈉沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入干燥器內(nèi)，定時(shí)置換干燥劑如五氧化二磷不再吸水為止，搗碎成顆粒狀，即得肝素鈉粗品2.0g，其效價(jià)為每毫克90單位。