本發(fā)明涉及流感中和抗體及其使用方法。

背景技術(shù)：

1、流感大流行代表對(duì)人類(lèi)健康最大的急性感染威脅之一。接種疫苗依然是預(yù)防季節(jié)性流感和大流行性流感及其并發(fā)癥的主要手段。誘導(dǎo)針對(duì)多種亞型流感病毒的廣譜免疫的“通用”流感疫苗已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)研究中長(zhǎng)期追求的目標(biāo)。最近發(fā)現(xiàn)了與ha莖上的高度保守疏水袋結(jié)合的人廣譜中和“異源亞型”抗體(sbnab)，這一發(fā)現(xiàn)重新激起技術(shù)人員研制這種疫苗的努力。然而，在季節(jié)性流感的血清或h5n1疫苗中，或者在商業(yè)靜脈內(nèi)免疫球蛋白(ivig)制劑中，僅檢測(cè)到極低濃度的sbnab。

2、人們一直在努力生產(chǎn)用于抗流感病毒免疫療法的單克隆抗體(mab)和藥物。具體地，致力于開(kāi)發(fā)一種能中和所有各種流感病毒株的治療性化合物。目前，僅報(bào)道了少數(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)該目標(biāo)的mab。這些mab通過(guò)淘選噬菌體抗體文庫(kù)和從接種疫苗的志愿者篩選b細(xì)胞來(lái)分離。然而，對(duì)廣譜中和流感抗體特征的更深入理解可以用于在更合理的設(shè)計(jì)方法中摻入某些結(jié)構(gòu)決定簇，以發(fā)現(xiàn)和產(chǎn)生廣泛的一組中和流感抗體。

3、因此，非常需要能夠廣譜中和流感病毒的附加單克隆抗體，以及通過(guò)合理的設(shè)計(jì)方法提高此類(lèi)抗體的親和力或功效的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的各方面涉及中和流感病毒的分離的單克隆抗體。例如，流感病毒是甲型流感病毒。例如，本發(fā)明的分離的單克隆抗體中和甲型流感病毒i組和ii組毒株。

2、在實(shí)施方案中，該分離的單克隆抗體包含：重鏈，該重鏈包含具有氨基酸序列g(shù)ftfsnyg(seq?id?no:7)的cdr1；具有氨基酸序列isfdgskk(seq?id?no:8)的cdr2，和具有氨基酸序列caklpspyyfdsrfvwvaasafhfw(seq?id?no:9)的cdr3；和輕鏈，該輕鏈包含具有氨基酸序列ssniggnt(seq?id?no:10)的cdr1；具有氨基酸序列tns(seq?id?no:11)的cdr2；和具有氨基酸序列caawddslngqvf(seq?id?no:12)的cdr3；重鏈，該重鏈包含具有氨基酸序列g(shù)ftfsnyg(seq?id?no:7)的cdr1；具有氨基酸序列isfdgskk(seq?id?no:8)的cdr2，和具有氨基酸序列caklpspyyfdsrfvwvaasafhfw(seq?id?no:9)的cdr3；和輕鏈，該輕鏈包含具有氨基酸序列ssniggnt(seq?id?no:10)的cdr1；具有氨基酸序列tns(seq?id?no:11)的cdr2；和具有氨基酸序列caawdnslngqvf(seq?id?no:13)的cdr3；或重鏈，該重鏈包含具有氨基酸序列g(shù)ftfsnyg(seq?id?no:7)的cdr1；具有氨基酸序列isfdgskk(seq?id?no:8)的cdr2，和具有氨基酸序列caklpspyyfdsrfvwvaasafhfw(seq?id?no:9)的cdr3；和輕鏈，該輕鏈包含具有氨基酸序列ssnigxnt(seq?id?no:14)的cdr1；具有氨基酸序列tns(seq?id?no:11)的cdr2；和具有氨基酸序列caawddslngqvf(seq?id?no:12)的cdr3；并且其中該分離的單克隆抗體還在fc區(qū)中包含至少一個(gè)突變。在實(shí)施方案中，x不是甘氨酸。在實(shí)施方案中，x是絲氨酸。

3、本發(fā)明的各方面還涉及分離的單克隆抗體，其中所述抗體包含vh氨基酸序列seqid?no:2和vl氨基酸序列seq?id?no:4；或vh氨基酸序列seq?id?no:2和vl氨基酸序列seqid?no:6；并且其中該分離的單克隆抗體還在fc區(qū)中包含至少一個(gè)突變。例如，fc區(qū)中的至少一個(gè)突變包括l234a、l235a、k322a、l234f、l235e、p329g、p331s、n297a、n297d和n297q氨基酸置換。例如，突變的fc區(qū)包含l234a和l235a氨基酸置換。

4、在實(shí)施方案中，抗體是去糖基化的。

5、在實(shí)施方案中，抗體與流感病毒的ha莖區(qū)結(jié)合。

6、在實(shí)施方案中，抗體是igg1或igg4。例如，igg4包括穩(wěn)定化的igg4。

7、在實(shí)施方案中，抗體與治療劑或診斷劑相關(guān)。例如，治療劑是毒素、放射性標(biāo)記、sirna、小分子或細(xì)胞因子。

8、在實(shí)施方案中，抗體包括人抗體、人源化抗體、嵌合抗體或鑲嵌抗體。

9、本發(fā)明的各方面還涉及多特異性抗體。例如，多特異性抗體是雙特異性抗體或三特異性抗體。例如，雙特異性抗體包括如本文所述與第一抗原結(jié)合的抗體，和與第二抗原免疫特異性結(jié)合的抗體。例如，與第二抗原免疫特異性結(jié)合的抗體包括抗乙型流感ha或抗甲型流感na。

10、本發(fā)明的各方面還涉及產(chǎn)生如本文所述抗體的細(xì)胞。

11、更進(jìn)一步，本發(fā)明的各方面涉及一種包含如本文所述抗體和藥學(xué)上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑的組合物。

12、另外的方面涉及編碼如本文所述分離的單克隆抗體的核酸序列、包含該核酸序列的載體，以及/或者包含該載體的細(xì)胞。

13、另外，本發(fā)明的各方面還涉及一種包含如本文所述抗體的納米顆粒。

14、本發(fā)明的各方面涉及一種預(yù)防或治療由流感病毒引起的疾病或病癥的方法。在實(shí)施方案中，該方法包括向有遭受所述疾病或病癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者施用治療有效量的如本文所述抗體，或包含該抗體的組合物。實(shí)施方案可以還包括向受試者施用抗病毒劑。在實(shí)施方案中，將抗體或組合物靜脈內(nèi)施用于受試者。

技術(shù)特征：

1.一種中和流感病毒的分離的單克隆抗體，所述分離的單克隆抗體包含：

2.一種分離的單克隆抗體，其中所述抗體包含：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離的單克隆抗體，其中所述fc區(qū)中的所述至少一個(gè)突變包括l234a、l235a、k322a、l234f、l235e、p329g、p331s、n297a、n297d和n297q氨基酸置換。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離的單克隆抗體，其中所述突變的fc區(qū)包含l234a和l235a氨基酸置換。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的單克隆抗體，其中x不是甘氨酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的單克隆抗體，其中x是絲氨酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離的單克隆抗體，其中所述抗體是去糖基化的。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體，其中所述抗體與所述流感病毒的的ha的莖區(qū)結(jié)合。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述流感病毒是甲型流感病毒。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體中和甲型流感病毒組i和組ii毒株。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是igg1或igg4。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體，其中所述igg4包括穩(wěn)定化的igg4。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體，其與治療劑或診斷劑相關(guān)。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗體，其中所述治療劑是毒素、放射性標(biāo)記、sirna、小分子或細(xì)胞因子。

15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體，其中所述抗體包括人抗體、人源化抗體、嵌合抗體或鑲嵌抗體。

16.一種雙特異性抗體，所述雙特異性抗體包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體和與第二抗原免疫特異性結(jié)合的抗體。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的雙特異性抗體，其中與第二抗原免疫特異性結(jié)合的所述抗體包括抗乙型流感ha或抗甲型流感na。

18.一種細(xì)胞，所述細(xì)胞產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的抗體。

19.一種組合物，所述組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑。

20.一種核酸序列，所述核酸序列編碼根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的分離的單克隆抗體。

21.一種載體，所述載體包含根據(jù)權(quán)利要求20所述的核酸。

22.一種細(xì)胞，所述細(xì)胞包含根據(jù)權(quán)利要求21所述的載體。

23.一種納米顆粒，所述納米顆粒包含根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的抗體。

24.一種預(yù)防或治療由流感病毒引起的疾病或病癥的方法，所述方法包括向有遭受所述疾病或病癥風(fēng)險(xiǎn)的受試者施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的抗體，或者根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物。

25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，還包括向所述受試者施用抗病毒劑。

26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中將所述抗體或組合物靜脈內(nèi)施用于所述受試者。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了對(duì)于與流感病毒的HA蛋白的莖結(jié)構(gòu)域結(jié)合很重要的結(jié)構(gòu)決定簇，以及基于這些決定簇產(chǎn)生高親和力中和性流感病毒抗體的結(jié)構(gòu)決定簇使用方法。本發(fā)明還提供了測(cè)定流感病毒疫苗功效的工具。本發(fā)明還提供了可用于確定流感病毒疫苗在受試者中的功效，或者用于預(yù)測(cè)既往對(duì)疫苗或流感病毒感染的免疫暴露或抗原反應(yīng)性的分子標(biāo)簽。

技術(shù)研發(fā)人員：W·A·馬拉斯科,H·U·拉姆斯特德
受保護(hù)的技術(shù)使用者：丹娜-法伯癌癥研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9