本發(fā)明屬于生物制藥，具體提供一種支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60及其應用。

背景技術(shù)：

1、犬傳染性氣管支氣管炎(犬窩咳)是狗的一種重要疾病，常在犬集中飼養(yǎng)的群體中如養(yǎng)犬場、流浪犬收容中心、寵物店和寵物醫(yī)院的犬群中發(fā)生和流行。由支氣管敗血波氏桿菌(bordetella?bronchiseptica，bb)感染引起。本病不同品種、不同性別和不同年齡的犬都可感染,但以幼齡犬最為敏感、危害更為嚴重。臨床上以陣發(fā)性咳嗽，氣管支氣管炎和鼻炎等為主要特征。

2、支氣管敗血波氏桿菌最早是從患有犬瘟熱的犬呼吸道中分離，是一種革蘭氏陰性球桿菌，屬于波氏桿菌屬，該菌可感染多種哺乳動物，引起豬萎縮性鼻炎、肺炎及兔子、豚鼠的支氣管肺炎，還可引發(fā)貓、老鼠和馬的呼吸道感染。對犬具有高度傳染性，犬之間易通過直接接觸傳播。

3、支氣管敗血波氏桿菌在鮑姜氏血平板上生長存在4種表型，分別為ⅰ相菌、ⅱ相菌、ⅲ相菌和粗糙型菌。ⅰ相菌在鮑姜氏血平板菌落形態(tài)為珍珠樣小菌落，有的菌株具有溶血性，表達一系列的毒力因子，ⅲ相菌在鮑姜氏血平板菌落形態(tài)為灰白色扁平的大菌落，不溶血，不表達相應的毒力因子。研究證明ⅰ相菌株為強毒株，其他變異型菌株為弱毒株。

4、疫苗接種在預防傳染性犬氣管支氣管炎疾病中發(fā)揮著重要作用。本發(fā)明選取國內(nèi)分離的支氣管敗血波氏桿菌野毒株進行培育，得到1株弱化毒株，對犬傳染性氣管支氣管炎有著積極預防和高效控制的作用。

5、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的在于提供一種支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60。

2、本發(fā)明的第二目的在于提供上述支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60的應用。

3、本發(fā)明的第三目的在于提供一種疫苗。

4、本發(fā)明的第四目的在于提供上述疫苗的制備方法。

5、本發(fā)明的第五目的在于提供一種支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03。

6、本發(fā)明的第六目的在于提供上述支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03的應用。

7、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明特采用如下技術(shù)方案：

8、一種支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60，保藏號為cctccno:m20221719，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢·武漢大學，保藏日期為2022年11月3日。

9、上述支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物在制備預防支氣管敗血波氏桿菌感染的藥物中的應用。

10、進一步地，該藥物為疫苗。

11、優(yōu)選地，藥物對象為犬或貓。

12、一種疫苗，該疫苗包括免疫有效量的支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物，以及藥學上可接受的輔料。

13、進一步地，該支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60含量為≥1×106cfu/頭份；優(yōu)選地，該支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60含量為1×106～1×1010cfu/頭份；進一步優(yōu)選為該支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60含量為1×109cfu/頭份。

14、進一步地，該支氣管敗血波氏桿菌hn60培養(yǎng)物為1～60代次的培養(yǎng)物。

15、進一步地，該藥學上可接受的輔料為凍干保護劑，該凍干保護劑包括spga、糖類、明膠、蛋白質(zhì)、含有蛋白質(zhì)的物質(zhì)或/和緩沖液。

16、優(yōu)選地，糖類選自山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖或葡聚糖；蛋白質(zhì)選自白蛋白或酪蛋白；含有蛋白質(zhì)的物質(zhì)為牛血清或脫脂乳；緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

17、優(yōu)選地，該凍干保護劑為20w/v％蔗糖和2w/v％明膠。

18、優(yōu)選地，支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物與藥學上可接受的輔料的體積比1:1。

19、該疫苗的制備方法，將支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物與藥學上可接受的輔料混勻，得到疫苗。

20、一種支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03，該支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03與支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60同源，保藏號為cctccno:m20221718，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢·武漢大學，保藏日期為2022年11月3日。

21、該支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03在檢驗支氣管敗血波氏桿菌疫苗的效力中的應用。

22、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)效果為：

23、本發(fā)明選取國內(nèi)分離的支氣管敗血波氏桿菌野毒株hn03進行培育，得到1株弱化毒株hn60，其具有穩(wěn)定的生物學特性，且具有良好的免疫原性，安全可靠，對犬傳染性氣管支氣管炎有著積極預防和高效控制的作用。

技術(shù)特征：

1.一種支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60，其特征在于，保藏號為cctccno:m20221719，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢·武漢大學，保藏日期為2022年11月3日。

2.權(quán)利要求1所述支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物在制備預防支氣管敗血波氏桿菌感染的藥物中的應用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，所述藥物為疫苗；

4.一種疫苗，其特征在于，所述疫苗包括免疫有效量的權(quán)利要求1所述的支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物，以及藥學上可接受的輔料。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的疫苗，其特征在于，所述支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60含量為≥1×106cfu/頭份；優(yōu)選地，所述支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60含量為1×106～1×1010cfu/頭份；進一步優(yōu)選為所述支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60含量為1×109cfu/頭份。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述支氣管敗血波氏桿菌hn60培養(yǎng)物為1～60代次的培養(yǎng)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求4～6任一項所述的疫苗，其特征在于，所述藥學上可接受的輔料為凍干保護劑，所述凍干保護劑包括spga、糖類、明膠、蛋白質(zhì)、含有蛋白質(zhì)的物質(zhì)或/和緩沖液；

8.權(quán)利要求4～7任一項所述的疫苗的制備方法，其特征在于，將支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60或其培養(yǎng)物與藥學上可接受的輔料混勻，得到疫苗。

9.一種支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03，其特征在于，所述支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03與支氣管敗血波氏桿菌弱毒株hn60同源，保藏號為cctccno:m20221718，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢·武漢大學，保藏日期為2022年11月3日。

10.權(quán)利要求8所述的支氣管敗血波氏桿菌強毒株hn03在檢驗支氣管敗血波氏桿菌疫苗的效力中的應用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體提供一種支氣管敗血波氏桿菌弱毒株HN60及其應用。支氣管敗血波氏桿菌弱毒株HN60，保藏號為CCTCCNO:M20221719，從支氣管敗血波氏桿菌野毒株HN03培育得到，其具有穩(wěn)定的生物學特性，且具有良好的免疫原性，安全可靠，對犬傳染性氣管支氣管炎有著積極預防和高效控制的作用。

技術(shù)研發(fā)人員：田克恭,谷世江,張許科
受保護的技術(shù)使用者：洛陽惠中生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10