本發(fā)明涉及噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵，具體為一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝。
背景技術：
1、抗生素濫用已成為全球性的問題，隨著越來越多耐藥致病菌的出現(xiàn)，也推動了研究者們加快替抗減抗方案的開發(fā)研究。噬菌體和益生菌作為綠色新型的減抗替抗方案，近年來一直備受關注。
2、噬菌體是一種可以感染并殺死細菌的病毒，由twort于1915年發(fā)現(xiàn)，并由f'elixd'herelle首次描述了噬菌體現(xiàn)象和噬菌斑。噬菌體在自然界中分布廣泛，在20世紀初進行的早期噬菌體研究大多集中在治療細菌感染的噬菌體療法上。噬菌體也是微生態(tài)中的重要組成成分，在人體以及動物腸道，土壤環(huán)境，水體環(huán)境中有各自微生態(tài)系統(tǒng)存在，噬菌體廣泛分布于這些微生態(tài)系統(tǒng)中，在調(diào)節(jié)微生態(tài)系統(tǒng)的功能上起到重要作用。噬菌體與宿主細菌的相互作用對于微生物群落的生態(tài)和進化至關重要，其與宿主菌的共進化可以維持細菌表型和遺傳多樣性，并且可提高其進化和分化速度。
3、益生菌是對人體有益的微生物的統(tǒng)稱，其中占比最大的是乳酸菌。乳酸菌能發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸，在自然界中的分布極其廣泛，至今已發(fā)現(xiàn)至少18個屬，共計200余種。被人們熟知的乳酸菌主要集中在乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬等。除極少數(shù)外，絕大部分乳酸菌都被人體所必需，可定殖于人體腸道，具有抑制有害菌生長、改善腸道微環(huán)境、增強免疫系統(tǒng)功能等多種益生功能。
4、細菌性疾病是由致病性細菌引起的人或動物的一類疾病，該類疾病與病毒性疾病是目前威脅人與動物健康發(fā)展的主要疾病之一，常規(guī)的防治手段主要有疫苗的免疫接種及抗生素的使用，但由于抗生素耐藥性日益嚴重而引發(fā)的限抗、禁抗等一系列問題，導致亟需開發(fā)新的防治手段。噬菌體作為一種侵襲細菌的病毒，具有專一性、殺菌迅速、不破壞菌群平衡等一系列優(yōu)點而日益受到關注?，F(xiàn)有的噬菌體由相應的宿主菌經(jīng)過一系列嚴格的侵染過程制備而得，現(xiàn)有的方法發(fā)酵提高降低：噬菌體和益生菌不在同一發(fā)酵培養(yǎng)基中進行共發(fā)酵，不能有效地利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，提高微生態(tài)制劑的產(chǎn)量。
技術實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明提供了一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，解決了上述背景技術所提出的問題。
2、本發(fā)明提供如下技術方案：一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，包括以下步驟：
3、步驟s1：將活化后的宿主菌菌種，接入tsb培養(yǎng)基，接種比例為1％～20％，培養(yǎng)溫度25～45℃，轉速20～240rpm，培養(yǎng)時間4～60h，獲得宿主菌種子液；將活化后的益生菌菌種，接入種子培養(yǎng)基，接種比例為1％～20％，培養(yǎng)溫度25～45℃，轉速20～240rpm，培養(yǎng)時間4～60h，獲得益生菌種子液；
4、步驟s2：同時接種益生菌、噬菌體和噬菌體宿主菌后混勻，進行共發(fā)酵；其中，益生菌和/或其代謝產(chǎn)物能夠殺滅噬菌體宿主菌，并且噬菌體與益生菌錯時發(fā)酵；
5、步驟s3：發(fā)酵培養(yǎng)結束后，離心分離，取上清液過濾后收取噬菌體產(chǎn)品，取沉淀噴干或凍干后獲取益生菌產(chǎn)品；
6、步驟s4：無菌包裝：將步驟3中的發(fā)酵除菌清液無菌包裝，獲得噬菌體和益生菌代謝產(chǎn)物混合物的水劑；
7、步驟s5：向步驟3中的菌體添加菌體量1～15倍量的保護劑和/或載體，乳化混勻后干燥，粉碎過篩，無菌包裝，獲得噬菌體和益生菌混合物的粉劑。
8、優(yōu)選的，步驟s1具體包括，益生菌為枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)blcc1-0155，其保藏編號為cctccno：m2015278；
9、噬菌體選白鼠傷寒沙門氏菌噬菌體(salmonellatyphimuriumphage)φsa-1和嗜水氣單胞菌噬菌體(aeromonashydrophilaphage)blcc16-001；
10、其中，鼠傷寒沙門氏菌噬菌體(salmonellatyphimuriumphage)φsa-1保藏編號為cctccno：m2017217；
11、嗜水氣單胞菌噬菌體(aeromonashydrophilaphage)blcc16-001保藏編號為cctccno：m2020456。
12、優(yōu)選的，步驟s2具體包括，將噬菌體和宿主菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵4～60h，獲得噬菌體發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)0.1μm～0.22μm膜除菌，將益生菌種子液接入到無菌噬菌體發(fā)酵液中，發(fā)酵6～120h，獲得噬菌體和益生菌的發(fā)酵液。
13、優(yōu)選的，步驟s3具體包括，步驟3中的發(fā)酵液通過采用絮凝、離心或膜過濾中的一種或多種分離工藝，獲得發(fā)酵除菌清液和菌體。
14、優(yōu)選的，步驟s2具體包括：將噬菌體和宿主菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，并添加微量元素fecl3、維生素b12和生物素，濃度分別為0.01g/l，0.002g/l和0.001g/l，發(fā)酵4—30h，獲得噬菌體發(fā)酵液。
15、本發(fā)明具備以下有益效果：
16、1、該噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，通過聯(lián)合發(fā)酵提高效率：通過將噬菌體和益生菌在同一發(fā)酵培養(yǎng)基中進行共發(fā)酵，可以更有效地利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，提高微生態(tài)制劑的產(chǎn)量。
17、2、該噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，微量元素和維生素的添加：向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加微量元素fecl3、維生素b12和生物素，有助于提供微生物生長所需的輔助因子，從而增強發(fā)酵效果。
18、3、該噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，水劑和粉劑的靈活制備：通過分離提取后，可以分別制備水劑和粉劑，提高產(chǎn)品的適用性和便利性。水劑適合直接使用，而粉劑更便于儲存和運輸。
1.一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權利要求1所述的一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，其特征在于：步驟s1具體包括，益生菌為枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)blcc1-0155，其保藏編號為cctccno：m2015278；
3.根據(jù)權利要求1所述的一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，其特征在于：步驟s2具體包括，將噬菌體和宿主菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵4～60h，獲得噬菌體發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)0.1μm～0.22μm膜除菌，將益生菌種子液接入到無菌噬菌體發(fā)酵液中，發(fā)酵6～120h，獲得噬菌體和益生菌的發(fā)酵液。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，其特征在于：步驟s3具體包括，步驟3中的發(fā)酵液通過采用絮凝、離心或膜過濾中的一種或多種分離工藝，獲得發(fā)酵除菌清液和菌體。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種噬菌體與益生菌的聯(lián)合發(fā)酵工藝，其特征在于：步驟s2具體包括：將噬菌體和宿主菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，并添加微量元素fecl?3、維生素b12和生物素，濃度分別為0.01g/l，0.002g/l和0.001g/l，發(fā)酵4—30h，獲得噬菌體發(fā)酵液。