本發(fā)明涉及一種液體酶制劑。更具體而言，本發(fā)明涉及酶的活性穩(wěn)定性優(yōu)異的液體酶制劑。

背景技術(shù)：

1、作為對(duì)蛋白質(zhì)中的谷氨酰胺殘基和天冬酰胺殘基的 γ-酰胺基和 β-酰胺基進(jìn)行脫酰胺的酶，如專利文獻(xiàn)1等中記載的那樣，已知有源自粘金黃桿菌（chryseobacteriumgleum）jcm2410株的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶和源自解朊金黃桿菌（chryseobacteriumproteolyticum）9670株的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶。這樣的蛋白質(zhì)脫酰胺酶的酶制劑制品目前僅以粉末形態(tài)市售。

2、關(guān)于酶制劑，一般而言，如果考慮到除塵和處理這一點(diǎn)，則與粉末形態(tài)相比，優(yōu)選為液體形態(tài)。因此，對(duì)各種酶研究將酶制劑以液態(tài)形態(tài)制劑化的技術(shù)。例如，專利文獻(xiàn)2中提出了一種液體酶制劑，其特征在于，在多元醇-水懸濁液中包含至少一種乳蛋白交聯(lián)和/或修飾酶，所述多元醇-水懸濁液包含25%～100%（w/w）的多元醇，具有4.4～5.1范圍內(nèi)的ph值。具體而言，在專利文獻(xiàn)2中，發(fā)現(xiàn)在ph5.2中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的穩(wěn)定性低，基于該見(jiàn)解，公開(kāi)了ph4.4～4.8的甘油-水懸濁液中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑、ph4.6的山梨醇-水懸濁液中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑的穩(wěn)定性提高，與此同時(shí)，還公開(kāi)了ph4.6的甘油-水懸濁液中的酪氨酸酶制劑和ph4.6的甘油-水懸濁液中的蛋白質(zhì)谷氨酰胺酶制劑。

3、另外，專利文獻(xiàn)3中記載了在包含有用蛋白質(zhì)、溶劑、具有硫醇結(jié)構(gòu)的化合物的有用蛋白質(zhì)組合物中，通過(guò)使氮等窒息性氣體鼓泡而使溶解氧濃度為3mg/l以下，由此能夠制造穩(wěn)定的干擾素等有用蛋白質(zhì)組合物。

4、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)

6、專利文獻(xiàn)1：國(guó)際公開(kāi)第2010/029685號(hào)

7、專利文獻(xiàn)2：國(guó)際公開(kāi)第2013/064736號(hào)

8、專利文獻(xiàn)3：日本特開(kāi)2013-049650號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題

2、專利文獻(xiàn)2中，對(duì)于轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶制劑的液體酶制劑研究了穩(wěn)定性，另一方面，對(duì)于蛋白質(zhì)脫酰胺酶的液體酶制劑，僅公開(kāi)了制劑處方，對(duì)于該酶的穩(wěn)定性沒(méi)有進(jìn)行充分的研究。另外，專利文獻(xiàn)3中，對(duì)于包含犬干擾素- γ的水性制劑，研究了其抗病毒活性，另一方面，沒(méi)有提及蛋白質(zhì)脫酰胺酶的液體酶制劑，當(dāng)然也沒(méi)有進(jìn)行任何研究。

3、因此，本發(fā)明的目的在于提供蛋白質(zhì)脫酰胺酶等酶的活性穩(wěn)定性優(yōu)異的液體酶制劑。

4、用于解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案

5、本發(fā)明人進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將包含酶的液體酶制劑收納于內(nèi)部空間被不活潑氣體置換后的容器，從而酶的活性穩(wěn)定性顯著提高。該效果在液體制劑中的溶解氧量為專利文獻(xiàn)3中顯示出有用蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性降低的超過(guò)3mg/l的情況下也能夠得到，因此，包含酶的液體酶制劑與溶解氧量無(wú)關(guān)，僅通過(guò)用不活潑氣體置換內(nèi)部空間就能夠得到這樣的效果，這是完全出乎意料的。

6、進(jìn)而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)在包含蛋白質(zhì)脫酰胺酶的液體酶制劑中加入規(guī)定的添加劑，蛋白質(zhì)脫酰胺酶的活性穩(wěn)定性也提高。鑒于在使用抗壞血酸等作為抗氧化劑而公知的其他多種成分的情況下無(wú)法得到該效果，判明了該效果是使用該規(guī)定的添加劑所帶來(lái)的特有效果。

7、本發(fā)明是基于這些見(jiàn)解而完成的。即，本發(fā)明包含以下揭示的發(fā)明。

8、項(xiàng)1.一種液體酶制劑，其特征在于，上述液體酶制劑包含酶，且收納在內(nèi)部空間被不活潑氣體置換后的容器（以下，也記載為“第一液體酶制劑”）。

9、項(xiàng)2.根據(jù)項(xiàng)1記載的液體酶制劑，其中，上述酶為蛋白質(zhì)脫酰胺酶或轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。

10、項(xiàng)3.根據(jù)項(xiàng)1或2記載的液體酶制劑，其中，上述酶活性為0.1u/ml～10000u/ml。

11、項(xiàng)4.根據(jù)項(xiàng)1～3中任一項(xiàng)記載的液體酶制劑，其中，上述液體酶制劑包含選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚中的添加劑。

12、項(xiàng)5.一種液體酶制劑（以下，也記載為“第二液體酶制劑”），其特征在于，上述液體酶制劑包含蛋白質(zhì)脫酰胺酶和添加劑，上述添加劑選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚。

13、項(xiàng)6.根據(jù)項(xiàng)4或5記載的液體酶制劑，其中，上述添加劑的含量以總量計(jì)為5w/v%以上。

14、項(xiàng)7.根據(jù)項(xiàng)4～6中任一項(xiàng)記載的液體酶制劑，其中，上述添加劑的含量以總量計(jì)為80w/v%以下。

15、項(xiàng)8.根據(jù)項(xiàng)1～7中任一項(xiàng)記載的液體酶制劑，其中，上述液體酶制劑的ph為5.5以上。

16、項(xiàng)9.根據(jù)項(xiàng)1～8中任一項(xiàng)記載的液體酶制劑，其中，上述液體酶制劑的ph為8.2以下。

17、項(xiàng)10.根據(jù)項(xiàng)5～9中任一項(xiàng)記載的液體酶制劑，其中，上述蛋白質(zhì)脫酰胺酶活性為0.1u/ml～10000u/ml。

18、項(xiàng)11.根據(jù)項(xiàng)2～10中任一項(xiàng)記載的液體酶制劑，其中，上述蛋白質(zhì)脫酰胺酶源自解朊金黃桿菌。

19、項(xiàng)12.一種液體酶制劑的酶活性穩(wěn)定化方法，其特征在于，包含：將包含酶的液體酶制劑收納于內(nèi)部空間被不活潑氣體置換后的容器。

20、項(xiàng)13.一種包含蛋白質(zhì)脫酰胺酶的液體酶制劑的蛋白質(zhì)脫酰胺酶活性穩(wěn)定劑，其特征在于，包含選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚中的添加劑。

21、發(fā)明效果

22、根據(jù)本發(fā)明，提供酶的活性穩(wěn)定性優(yōu)異的液體酶制劑。

技術(shù)特征：

1.一種液體酶制劑，其特征在于，所述液體酶制劑包含酶，且收納于內(nèi)部空間被不活潑氣體置換后的容器。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體酶制劑，其中，所述酶為蛋白質(zhì)脫酰胺酶或轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體酶制劑，其中，所述酶活性為0.1u/ml～10000u/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體酶制劑，其中，所述液體酶制劑包含選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚中的添加劑。

5.一種液體酶制劑，其特征在于，所述液體酶制劑包含蛋白質(zhì)脫酰胺酶和添加劑，所述添加劑選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的液體酶制劑，其中，所述添加劑的含量以總量計(jì)為5w/v%以上。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的液體酶制劑，其中，所述添加劑的含量以總量計(jì)為80w/v%以下。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的液體酶制劑，其中，所述液體酶制劑的ph為5.5以上。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的液體酶制劑，其中，所述液體酶制劑的ph為8.2以下。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的液體酶制劑，其中，所述蛋白質(zhì)脫酰胺酶活性為0.1u/ml～10000u/ml。

11.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的液體酶制劑，其中，所述蛋白質(zhì)脫酰胺酶源自解朊金黃桿菌。

12.一種液體酶制劑的酶活性穩(wěn)定化方法，其特征在于，包含：將包含酶的液體酶制劑收納于內(nèi)部空間被不活潑氣體置換后的容器。

13.一種包含蛋白質(zhì)脫酰胺酶的液體酶制劑的蛋白質(zhì)脫酰胺酶活性穩(wěn)定劑，其特征在于，包含選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚中的添加劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種活性穩(wěn)定性優(yōu)異的酶的液體酶制劑。通過(guò)將包含酶的液體酶制劑收納于內(nèi)部空間被不活潑氣體置換后的容器，或者在包含蛋白質(zhì)脫酰胺酶的液體酶制劑中配合選自糖醇、甘油、乙醇、亞硫酸鹽、卵磷脂、檸檬酸鹽、聚磷酸鹽、酒石酸鹽、植酸、偏磷酸、氯化鈉、生育三烯酚、蛋氨酸、果膠、甜菜色素、辣椒色素、迷迭香提取物、生育酚、茶提取物和丁基羥基茴香醚中的添加劑，從而酶活性的穩(wěn)定性提高。

技術(shù)研發(fā)人員：日浦惠太,谷內(nèi)寬之,水戶光司
受保護(hù)的技術(shù)使用者：天野酶制品株式會(huì)社
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10