本發(fā)明涉及生物，特別是涉及免疫細(xì)胞培養(yǎng)基和免疫細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

1、免疫細(xì)胞是指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞。包括淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。免疫細(xì)胞可以分為多種，在人體中各種免疫細(xì)胞擔(dān)任著重要的角色。其中，cd3ak細(xì)胞是一種新型抗腫瘤免疫活性細(xì)胞，具有體外擴(kuò)增能力強(qiáng)、體外存活時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞毒性活性高、分泌淋巴因子能力強(qiáng)和體內(nèi)外抗腫瘤效果顯著等優(yōu)點(diǎn)，成為多細(xì)胞治療當(dāng)中不可缺少的組成部分。目前，常用aim-v培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)cd3ak細(xì)胞。但采用aim-v培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)得到的cd3ak細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存活率較低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，采用該免疫細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，得到免疫細(xì)胞的存活率較高。

2、此外，還提供一種免疫細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

3、一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，包括細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基、以及添加到所述細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的活性組分，所述活性組分包括：花生四烯酸、β-巰基乙醇、白藜蘆醇、銀杏葉提取物、環(huán)糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗敗血酸，所述細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括rpmi-1640培養(yǎng)基。

4、本研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基例如rpmi-1640培養(yǎng)基不足以培養(yǎng)免疫細(xì)胞，尤其是cd3ak細(xì)胞。而本申請(qǐng)上述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中的各活性組分配合rpmi-1640培養(yǎng)基等細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，能夠促進(jìn)cd3ak細(xì)胞等免疫細(xì)胞生長(zhǎng)，提高免疫細(xì)胞的存活率。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，采用含有上述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)pbmc進(jìn)行培養(yǎng)得到的總細(xì)胞量明顯高于aim-v培養(yǎng)基得到的總細(xì)胞。

5、在其中一些實(shí)施例中，所述活性組分還包括il-2、抗cd3單克隆抗體、抗cd28單克隆抗體。

6、在其中一些實(shí)施例中，所述環(huán)糊精為β-環(huán)糊精。

7、在其中一些實(shí)施例中，所述活性組分以所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度計(jì)包括500u/ml～1000u/ml的il-2、2ng/ml～20ng/ml的抗cd3單克隆抗體、2ng/ml～20ng/ml的抗cd28單克隆抗體、1μm～10μm的花生四烯酸、1μm～10μm的β-巰基乙醇、1μm～10μm的白藜蘆醇、1μm～10μm的銀杏葉提取物、1μg/ml～10μg/ml的環(huán)糊精、1mm～10mm的丙氨酸-谷氨酰胺、1μg/ml～10μg/ml的l-抗敗血酸。

8、在其中一些實(shí)施例中，所述活性組分以所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度計(jì)包括700u/ml的il-2、20ng/ml的抗cd3單克隆抗體、20ng/ml的抗cd28單克隆抗體、4μm的花生四烯酸、5μm的β-巰基乙醇、6μm的白藜蘆醇、3μm的銀杏葉提取物、5μg/ml的環(huán)糊精、2mm的丙氨酸-谷氨酰胺、5μg/ml的l-抗敗血酸。

9、在其中一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基由rpmi-1640培養(yǎng)基和所述活性組分構(gòu)成，所述活性組分由如下組分構(gòu)成：花生四烯酸、β-巰基乙醇、白藜蘆醇、銀杏葉提取物、環(huán)糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗敗血酸、il-2、抗cd3單克隆抗體、抗cd28單克隆抗體。

10、上述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基在制備免疫細(xì)胞及/或免疫細(xì)胞外泌體中的應(yīng)用。

11、在其中一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞包括cd3ak細(xì)胞。

12、一種免疫細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：采用上述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)血液?jiǎn)魏思?xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，得到免疫細(xì)胞。

13、在其中一些實(shí)施例中，采用所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)所述血液?jiǎn)魏思?xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的步驟包括：將所述血液?jiǎn)魏思?xì)胞接種至所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中每隔2-3天補(bǔ)充一次所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基和血漿。

14、在其中一些實(shí)施例中，培養(yǎng)時(shí)間為14天，第0-5天的培養(yǎng)過(guò)程中每次補(bǔ)充所述血漿的量為10％(v/v)，第5-14天的培養(yǎng)過(guò)程中每次補(bǔ)充所述血漿的量為5％(v/v)。

技術(shù)特征：

1.一種免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，包括細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基、以及添加到所述細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的活性組分，所述活性組分包括：花生四烯酸、β-巰基乙醇、白藜蘆醇、銀杏葉提取物、環(huán)糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗敗血酸，所述細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括rpmi-1640培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述活性組分還包括il-2、抗cd3單克隆抗體、抗cd28單克隆抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述活性組分以所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度計(jì)包括500u/ml～1000u/ml的il-2、2ng/ml～20ng/ml的抗cd3單克隆抗體、2ng/ml～20ng/ml的抗cd28單克隆抗體、1μm～10μm的花生四烯酸、1μm～10μm的β-巰基乙醇、1μm～10μm的白藜蘆醇、1μm～10μm的銀杏葉提取物、1μg/ml～10μg/ml的環(huán)糊精、1mm～10mm的丙氨酸-谷氨酰胺、1μg/ml～10μg/ml的l-抗敗血酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述活性組分以所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中的終濃度計(jì)包括700u/ml的il-2、20ng/ml的抗cd3單克隆抗體、20ng/ml的抗cd28單克隆抗體、4μm的花生四烯酸、5μm的β-巰基乙醇、6μm的白藜蘆醇、3μm的銀杏葉提取物、5μg/ml的環(huán)糊精、2mm的丙氨酸-谷氨酰胺、5μg/ml的l-抗敗血酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基由rpmi-1640培養(yǎng)基和所述活性組分構(gòu)成，所述活性組分由如下組分構(gòu)成：花生四烯酸、β-巰基乙醇、白藜蘆醇、銀杏葉提取物、環(huán)糊精、丙氨酸-谷氨酰胺、l-抗敗血酸、il-2、抗cd3單克隆抗體、抗cd28單克隆抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述環(huán)糊精為β-環(huán)糊精。

7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基在制備免疫細(xì)胞及/或免疫細(xì)胞外泌體中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述免疫細(xì)胞包括cd3ak細(xì)胞。

9.一種免疫細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：采用權(quán)利要求5-8任一項(xiàng)所述的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)血液?jiǎn)魏思?xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，得到免疫細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，采用所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)所述血液?jiǎn)魏思?xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的步驟包括：將所述血液?jiǎn)魏思?xì)胞接種至所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中每隔2-3天補(bǔ)充一次所述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基和血漿；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及免疫細(xì)胞培養(yǎng)基和免疫細(xì)胞的培養(yǎng)方法。該免疫細(xì)胞培養(yǎng)基包括細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基、以及添加到細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的活性組分，所述活性組分包括：花生四烯酸、β?巰基乙醇、白藜蘆醇、銀杏葉提取物、環(huán)糊精、丙氨酸?谷氨酰胺、L?抗敗血酸，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括RPMI?1640培養(yǎng)基。上述免疫細(xì)胞培養(yǎng)基成本僅是AIM?V(Gibco)培養(yǎng)體系的1/3，但培養(yǎng)得到的CD3AK細(xì)胞的純度、細(xì)胞存活率及對(duì)K562細(xì)胞的殺傷活性均高于AIM?V培養(yǎng)體系，即該免疫細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)細(xì)胞成本低，得到的細(xì)胞質(zhì)量好且對(duì)癌細(xì)胞的殺傷活性強(qiáng)，能夠應(yīng)用到制備免疫細(xì)胞及/或免疫細(xì)胞外泌體中。

技術(shù)研發(fā)人員：白宗科,陳復(fù)興,何無(wú)霜,張?jiān)聢A
受保護(hù)的技術(shù)使用者：深圳澤醫(yī)細(xì)胞治療集團(tuán)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10