本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)微生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一株可降低副溶血弧菌耐藥性的噬菌體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、副溶血弧菌(vibrio?parahaemolyticus)可引起的對(duì)蝦急性肝胰腺壞死綜合征(acute?hepatopancreatic?necrosis?disease,ahpnd)導(dǎo)致極大的經(jīng)濟(jì)損失；患ahpnd的蝦苗在投苗后10～35d內(nèi)，可達(dá)100％的死亡率。因此，開(kāi)展弧菌病防控技術(shù)研究對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展意義重大。

2、副溶血弧菌可引起魚(yú)類體表出血、爛尾、鮑魚(yú)足部白斑、蝦急性肝胰腺壞死病。此外，副溶血性弧菌也是人類重要的食源性病原體，食用受污染的生海鮮可引起急性胃腸炎并伴有腹瀉。從各種來(lái)源分離的副溶血性弧菌對(duì)單一或多種抗生素，具有高度耐藥性。在最佳條件下，副溶血性弧菌是一種快速生長(zhǎng)的病原體，可以形成生物被膜，難以從食物鏈中去除。

3、抗生素是早期養(yǎng)殖生產(chǎn)中防治弧菌病的主要手段，在弧菌病防控中也發(fā)揮著巨大的作用。然而，隨著抗生素廣泛使用產(chǎn)生的選擇性壓力導(dǎo)致耐藥性細(xì)菌的發(fā)生、留存和傳播,降低了藥物防控的效果，也對(duì)環(huán)境和食品安全造成了巨大的隱患。目前，水產(chǎn)養(yǎng)殖中可用的抗生素藥劑僅包括甲砜霉素粉、氟苯尼考粉、氟苯尼考注射液、氟甲喹粉、恩諾沙星粉、鹽酸多西環(huán)素粉、維生素c磷酸酯鎂鹽酸環(huán)丙沙星預(yù)混劑、鹽酸環(huán)丙沙星鹽酸小檗堿預(yù)混劑、硫酸新霉素粉、磺胺間甲氧嘧啶鈉粉、復(fù)方磺胺嘧啶粉、復(fù)方磺胺二甲嘧啶粉和復(fù)方磺胺甲噁唑粉13種藥物,而隨著耐藥性的增加，原本可用于治療ahpnd的四環(huán)素和土霉素已經(jīng)被限制使用。

4、利用抗生素治療細(xì)菌性疾病時(shí)會(huì)殺滅正常菌和有益菌，常導(dǎo)致生物體內(nèi)菌群失衡，導(dǎo)致其他耐受性致病菌生長(zhǎng)，進(jìn)而引發(fā)疾病?？股卮罅渴褂蒙踔翞E用，不可避免地會(huì)帶來(lái)水產(chǎn)品藥物殘留和細(xì)菌耐藥等問(wèn)題，開(kāi)發(fā)安全有效的抗生素替代品迫在眉。

5、噬菌體具有高效特異裂解性，在防治細(xì)菌性疾病時(shí)可針對(duì)特定的有害細(xì)菌菌株寄生，消滅有害細(xì)菌。當(dāng)活細(xì)菌被噬菌體消滅后，噬菌體也會(huì)失去活性，不會(huì)殘留在動(dòng)物體內(nèi)，對(duì)水環(huán)境和人體健康無(wú)明顯危害。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為應(yīng)對(duì)水產(chǎn)多種致病菌的耐藥性及對(duì)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失問(wèn)題，本發(fā)明目的是提供一株可降低副溶血弧菌耐藥性的噬菌體grnvpp42，所述噬菌體的保藏編號(hào)為：cctcc?no：cctcc?m?2024945。

2、本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供副溶血弧菌噬菌體grnvpp42的應(yīng)用。

3、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過(guò)如下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

4、申請(qǐng)人在山東日照某水產(chǎn)養(yǎng)殖水塘，分離出一株副溶血弧菌噬菌體grnvpp42，該噬菌體已于2024年05月15日送至中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)；分類命名：副溶血性弧菌噬菌體(vibrio?parahaemolyticus?phage)grnvpp42，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024945。

5、一種噬菌體復(fù)合菌劑，包括副溶血弧菌噬菌體grnvpp42和抗生素。

6、以上所述的復(fù)合菌劑，優(yōu)選的，所述的抗生素為氟苯尼考、多西環(huán)素或恩諾沙星。

7、副溶血弧菌噬菌體grnvpp42或上述噬菌體復(fù)合菌劑在制備副溶血弧菌抑菌劑中的應(yīng)用。副溶血弧菌噬菌體grnvpp42或上述噬菌體復(fù)合菌劑在制備治療或預(yù)防副溶血弧菌感染的藥物中的應(yīng)用。

8、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

9、1)噬菌體grnvpp42具有高發(fā)酵率，在最佳感染復(fù)數(shù)moi＝0.001時(shí)，發(fā)酵7h，效價(jià)可達(dá)3.7×1011pfu/ml，為工業(yè)發(fā)酵提供了理論基礎(chǔ)。

10、2)所述噬菌體grnvpp42殺菌譜廣，對(duì)包含10種噬菌體受體在內(nèi)的60株臨床致病性副溶血弧菌，裂解率高達(dá)95％。

11、3)噬菌體grnvpp42可與抗生素協(xié)同作用，實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)28株臨床分離的耐藥性水產(chǎn)弧菌中25株的mic均有一定的降低作用，表明其可降低副溶血弧菌耐藥性，減少藥物殘留及耐藥性傳播風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)特征：

1.?一株分離的副溶血性弧菌噬菌體（vibrio?parahaemolyticus?phage）grnvpp42，所述噬菌體的保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024945。

2.一種噬菌體復(fù)合菌劑，包括副溶血弧菌噬菌體grnvpp42和抗生素。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合菌劑，所述的抗生素為氟苯尼考、多西環(huán)素或恩諾沙星。

4.權(quán)利要求1所述的副溶血弧菌噬菌體grnvpp42或權(quán)利要求2所述的噬菌體復(fù)合菌劑在制備副溶血弧菌抑菌劑中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1所述的副溶血弧菌噬菌體grnvpp42或權(quán)利要求2所述的噬菌體復(fù)合菌劑在制備治療或預(yù)防副溶血弧菌感染的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)微生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，公開(kāi)了一株可降低副溶血弧菌耐藥性的噬菌體及其應(yīng)用，申請(qǐng)人在山東日照某水產(chǎn)養(yǎng)殖水塘，分離出一株副溶血弧菌噬菌體，所述噬菌體的保藏編號(hào)為CCTCC?NO：CCTCC?M?2024945，該副溶血弧菌噬菌體應(yīng)用于水產(chǎn)弧菌的生物控制過(guò)程中，具有可配合消毒劑輪用、降低耐藥性基因傳播風(fēng)險(xiǎn)、裂解譜廣、殺菌效率高的優(yōu)勢(shì)，且其發(fā)酵效率高，生產(chǎn)成本低，對(duì)水產(chǎn)中占比大的多種弧菌均有效果。

技術(shù)研發(fā)人員：張秀玲,王喜亮,黃金梅,田甲,張曉東
受保護(hù)的技術(shù)使用者：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/8/20