本發(fā)明涉及生物，特別涉及一種藜麥中降壓活性多肽的制備方法及應用。

背景技術(shù)：

1、藜麥(chenopodium?quinoa?willd.)，是藜科藜屬植物。藜麥是唯一一種全谷物完全蛋白質(zhì)堿性食物，蛋白質(zhì)含量高達14-23％，品質(zhì)與奶粉和肉類相當。并且富含多種氨基酸，均衡含有人體必需的全部9種必需氨基酸，比例適當而且易于吸收，優(yōu)于谷物和豆類，尤其富含植物中缺乏的賴氨酸、錳、鐵、鉀等礦物質(zhì)含量極高，平均是谷物的3-10倍。藜麥還富含不飽和脂肪酸、類黃酮、b族維生素和e族維生素、膽堿、甜菜堿、葉酸、植物甾醇、脂肪酸、a-亞麻酸、葡聚糖等多種有益化合物。同時，藜麥不含麩質(zhì)，擁有高膳食纖維、零膽固醇、低脂、低熱量、低升糖。藜麥具有均衡補充營養(yǎng)，修復體質(zhì)，增強免疫力，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，降三高、提高機體應激能力，預防疾病，抗氧化，抗癌，減肥，輔助治療等效果。是慢性病患者，高營養(yǎng)需求人群和工作繁忙人士的首選食物。

2、食源性生物活性肽與其他生物活性肽相比具有無毒無害效果溫和無副作用等更加安全的特點，近年來眾多研究學者通過不同制備方式將核桃、辣木籽、螺旋藻、桑葉、芝麻等植物作為蛋白原料提取制備出了具有明顯血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制活性的生物活性肽，而藜麥作為優(yōu)良營養(yǎng)作物已被發(fā)現(xiàn)其生物活性肽具有抗糖、抗壓、抗炎、抗菌等作用。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種藜麥中降壓活性多肽的制備方法及應用，制備得到四條多肽氨基酸序列，且四條肽均未被報道過且具有一定血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制能力。

2、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

3、本申請的一個目的在于提供一種藜麥中降壓活性多肽的制備方法，包括以下步驟：

4、(1)藜麥蛋白的提?。簩⑥见湸蛩槟シ圻^60目篩，與醋酸溶液按質(zhì)量體積比1:5比例混合，浸提后離心，收集上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和冷凍干燥，得到藜麥蛋白；

5、(2)藜麥多肽制備：將藜麥蛋白復溶成底物濃度為5％的溶液，加入木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)ph為6.2，在55.7℃下酶解3h，100℃水浴鍋中滅酶10min，冷卻后離心，收集上清液；

6、(3)離子交換層析：使用0.002mol/l的tris-hcl緩沖液和初始緩沖液+0.3mol/lnacl等度洗脫，流速3ml/min，進樣量2ml，280nm波長處檢測吸光度，收集各洗脫峰并測定各洗脫峰的ace抑制率；

7、(4)葡聚糖凝膠sephadex?g-15分離純化：將樣品加在凝膠柱中，用超純水進行洗脫，進樣量2ml，流速3ml/min，收集各洗脫峰并測定ace抑制率；

8、(5)rp-hplc分離純化：使用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，乙腈/甲酸水溶液進行梯度洗脫，洗脫條件為流動相a乙腈，b含0.1％甲酸的超純水，梯度洗脫：洗脫梯度：2％～56％?b?12min，56％～95％?b?4min，95％～95％?b?5min，95％～2％?b?2min，2％～2％?b2min。檢測波長280nm柱溫35℃，進樣量100μl，流速1ml·min-1，自動進樣，手動收集各峰處的液體，組分分別濃縮，并測定ace抑制率。

9、優(yōu)選地，步驟(1)中，所述藜麥蛋白提取步驟中使用的醋酸溶液濃度為0.1mol/l；浸提條件為：在40℃下浸提3小時；離心條件為：5000r/min離心30min。

10、優(yōu)選地，步驟(2)中，使用的木瓜蛋白酶用量為10456u/g，酶解溫度為55.7℃，ph為6.2，酶解時間為3小時。

11、優(yōu)選地，步驟(3)中，所述離子交換層析步驟中使用的tris-hcl緩沖液的ph值為7.0。

12、本申請的又一目的在于提供一種藜麥蛋白源的ace抑制肽，所述ace抑制肽是根據(jù)上述方法制備得到。

13、優(yōu)選地，所述ace抑制肽具有下列氨基酸序列：

14、grcpgglccsk、atpaptpvh、hgsgygv或spfanrl。

15、本申請的再一目的在于提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包含藜麥蛋白源的ace抑制肽。

16、優(yōu)選地，所述藥物組合物用于治療高血壓。

17、本申請的又一目的在于提供一種功能食品，所述功能食品包含藜麥蛋白源的ace抑制肽。

18、優(yōu)選地，所述功能食品用于降低血壓。

19、本發(fā)明上述技術(shù)方案，具有如下有益效果：

20、本申請通過單因素實驗和響應面實驗確定了藜麥蛋白酶解的最佳工藝參數(shù)，以及通過離子交換層析、葡聚糖凝膠層析和反相高效液相色譜分離純化技術(shù)，成功從藜麥中提取并純化出具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制活性的多肽。通過質(zhì)譜鑒定篩選得到的四條多肽氨基酸序列均為未被報道過的新肽段。多肽具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制活性，有助于降低血壓，對于高血壓患者具有潛在的輔助治療作用。本申請的制備工藝采用的酶解條件和層析技術(shù)能夠高效地從藜麥中分離出具有生物活性的多肽，提高了制備工藝的效率。

技術(shù)特征：

1.一種藜麥中降壓活性多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藜麥中降壓活性多肽的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述藜麥蛋白提取步驟中使用的醋酸溶液濃度為0.1mol/l；浸提條件為：在40℃下浸提3小時；離心條件為：5000r/min離心30min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藜麥中降壓活性多肽的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，使用的木瓜蛋白酶用量為10456u/g，酶解溫度為55.7℃，ph為6.2，酶解時間為3小時。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藜麥中降壓活性多肽的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述離子交換層析步驟中使用的tris-hcl緩沖液的ph值為7.0。

5.一種藜麥蛋白源的ace抑制肽，其特征在于，所述ace抑制肽是根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述方法制備得到。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藜麥蛋白源的ace抑制肽，其特征在于，所述ace抑制肽具有下列氨基酸序列：

7.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含權(quán)利要求5-6任一所述的藜麥蛋白源的ace抑制肽。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物用于治療高血壓。

9.一種功能食品，其特征在于，所述功能食品包含權(quán)利要求5-6任一所述的藜麥蛋白源的ace抑制肽。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的功能食品，其特征在于，所述功能食品用于降低血壓。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種藜麥中降壓活性多肽的制備方法及應用，該制備方法包括以下步驟：(1)藜麥蛋白的提??；(2)藜麥多肽制備；(3)離子交換層析；(4)葡聚糖凝膠Sephadex?G?15分離純化；(5)RP?HPLC分離純化，獲得目的多肽。本發(fā)明通過上述技術(shù)獲得具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制活性的多肽。通過質(zhì)譜鑒定篩選得到的四條多肽氨基酸序列均為未被報道過的新肽段。多肽具有ACE抑制活性，有助于降低血壓，對于高血壓患者具有潛在的輔助治療作用。本申請的制備工藝采用的酶解條件和層析技術(shù)能夠高效地從藜麥中分離出具有生物活性的多肽，提高了制備工藝的效率。

技術(shù)研發(fā)人員：魏東,馮亭亭,尚鶴婷,栗慧,武天煜,高優(yōu)偉,趙蕙新,褚明娟
受保護的技術(shù)使用者：河北北方學院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9