本發(fā)明公開(kāi)了一種利用klf5基因遺傳標(biāo)記檢測(cè)牛胴體肉質(zhì)性狀的方法，尤其涉及一種通過(guò)klf5的snps作為牛肉質(zhì)和胴體性狀分子標(biāo)記的檢測(cè)方法，屬于選育預(yù)測(cè)和選育牛胴體和肉質(zhì)性狀。

背景技術(shù)：

1、隨著飲食偏好的不斷演變和健康意識(shí)的增強(qiáng)，人們對(duì)于牛肉的數(shù)量的需求逐年增加，牛肉的質(zhì)量也得到了前所未有的關(guān)注。分子育種方法之一的標(biāo)記輔助選擇（marker-assisted?selection，mas）的出現(xiàn)，為探索遺傳多態(tài)性與肉質(zhì)性狀之間的聯(lián)系開(kāi)辟了新的可能性，是提高牛肉整體品質(zhì)的首選工具。單核苷酸多態(tài)性（snps）則作為最常用的遺傳標(biāo)記形式之一在肉牛的遺傳改良研究中被廣泛應(yīng)用。

2、kruppel樣因子5?（klf5）是一個(gè)以鋅指結(jié)構(gòu)為特征的轉(zhuǎn)錄因子。牛klf5基因位于12號(hào)染色體上，由4個(gè)外顯子組成（基因id：535702）。在脂肪細(xì)胞分化早期，ccaat/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β基因（c/ebp?β）和ccaat/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ基因（c/ebp?δ）首先表達(dá)。這些基因各自的產(chǎn)物直接結(jié)合到牛klf5基因的啟動(dòng)子序列上，啟動(dòng)klf5基因的轉(zhuǎn)錄。由此產(chǎn)生的klf5蛋白結(jié)合過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ基因（ppar?γ）的啟動(dòng)子序列，激活其轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化。此外，klf5可以與甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（srebp1）相互作用，增強(qiáng)srebp1介導(dǎo)的脂肪酸合成酶基因（fasn）的表達(dá)。這種相互作用可進(jìn)一步促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化，影響細(xì)胞內(nèi)脂肪酸代謝。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種klf5基因標(biāo)記檢測(cè)牛胴體和肉質(zhì)性狀的方法，利用klf5基因標(biāo)記作為預(yù)測(cè)和選育肉牛胴體及肉質(zhì)性狀的方法，為遺傳工作者的早期選育及改善肉品質(zhì)從而進(jìn)一步提高肉牛養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益奠定基礎(chǔ)。

2、本發(fā)明提供一種klf5基因分子標(biāo)記在制備檢測(cè)牛肉質(zhì)和胴體性狀試劑中的用途，所述的分子標(biāo)記為牛klf5基因的snp1：g.47,816,704?g?>?cg，snp2：g.47,816,926?g?>?a，snp3：g.47,816,927?c?>?t，snp4：g.47,816,938?t?>?c，snp5：g.47,817,373?g?>?c，snp6：g.47,817,402?c?>?g。

3、本發(fā)明所述的klf5基因snp1-6作為檢測(cè)牛肉質(zhì)性狀分子標(biāo)記的方法，包括以下步驟：

4、第一步：用抗凝劑處理過(guò)的試管從需要檢測(cè)的牛的頸靜脈采集血樣，并進(jìn)行基因組dna提取；

5、第二步：根據(jù)已公開(kāi)的牛klf5基因序列設(shè)計(jì)的一對(duì)引物如下：

6、klf5-f：５’gcacatccttgttcgttaccta３’；

7、klf5-r：５’cccaacggacttgtttgctaaa３’；

8、第三步：用?；蚪Mdna?1.4?μl、正、反向引物0.3?μl、ddh2o?8.0?μl、pcr?mix10.0?μl共20.0?μl的混合物進(jìn)行pcr。pcr混合物先在95℃預(yù)變性5?min，然后在95℃變性30s、55℃退火30?s、72℃延伸1?min，進(jìn)行35次循環(huán)，最后在72℃孵育10?min，4℃保存。pcr產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，4℃暫時(shí)保存；

9、第四步：采用sanger測(cè)序即一代測(cè)序技術(shù)對(duì)pcr產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，使用序列分析軟件查找混池dna測(cè)序結(jié)果中klf5基因snp位點(diǎn)的位置，以單個(gè)牛的血液基因組dna為模板針對(duì)該片段再次進(jìn)行pcr擴(kuò)增，使用引物為該片段所對(duì)應(yīng)的引物，擴(kuò)增體系與混池dna擴(kuò)增體系一致。最后根據(jù)分子標(biāo)記snp1-6，對(duì)檢測(cè)的牛個(gè)體樣品進(jìn)行基因型分析，并最后通過(guò)基因型評(píng)估和預(yù)測(cè)牛的胴體和肉質(zhì)性狀。

10、klf5基因可作為mas改良牛肉品質(zhì)的重要候選基因之一，探究klf5基因多態(tài)性與牛胴體性狀及肉質(zhì)性狀的相關(guān)性將有助于肉牛的遺傳改良研究工作的開(kāi)展。

11、本發(fā)明的積極效果在于：

12、獲得并公開(kāi)牛胴體、肉質(zhì)和脂肪性狀相關(guān)的klf5基因g.47,816,704?g?>?cg，g.47,816,926?g?>?a，g.47,816,927?c?>?t，g.47,816,938?t?>?c，g.47,817,373?g?>?c和g.47,817,402?c?>?g的6個(gè)snp作為分子遺傳標(biāo)記，檢測(cè)方法快捷有效，可應(yīng)用于牛肉用性能的早期選育，為肉牛的遺傳育種研究和生產(chǎn)飼養(yǎng)早期選育奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.一種klf5基因分子標(biāo)記在制備檢測(cè)牛肉質(zhì)和胴體性狀制劑中的用途，其特征在于：

2.一種klf5基因單核苷酸多態(tài)性作為牛肉質(zhì)性狀分子標(biāo)記的檢測(cè)方法,其特征在于：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的klf5基因snp1-6作為檢測(cè)牛肉質(zhì)性狀分子標(biāo)記的方法，包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)一種利用KLF5基因標(biāo)記輔助檢測(cè)肉牛胴體和肉質(zhì)性狀的方法，利用PCR技術(shù)和DNA測(cè)序技術(shù)相結(jié)合，篩查和檢測(cè)牛群體中KLF5基因突變位點(diǎn)和突變位點(diǎn)基因型。此方法僅通過(guò)擴(kuò)增KLF5基因部分片段根據(jù)基因型早期評(píng)估肉牛胴體和肉質(zhì)性狀，效率高，成本低，為標(biāo)記輔助選擇提供了多個(gè)新的遺傳分子標(biāo)記，進(jìn)一步加快肉牛性能的選育。

技術(shù)研發(fā)人員：房希碧,楊潤(rùn)軍,劉月,李康,盧鑫
受保護(hù)的技術(shù)使用者：吉林大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9