本發(fā)明涉及重組蛋白，具體為一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、對(duì)寵物(狗、貓)的過(guò)敏影響著全球10％-20％的人口，而隨著這些比例的增加，這將成為一個(gè)日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，考慮到即使在沒(méi)有寵物的家庭中也容易檢測(cè)到狗和貓過(guò)敏原，迫切需要準(zhǔn)確診斷和治療患者，以降低接觸導(dǎo)致的發(fā)病率和死亡率，與目前的診斷狗致敏的原材料主要采用天然的狗毛發(fā)、狗上皮天然提取物作為原料進(jìn)行診斷試劑的開(kāi)發(fā)。而隨著分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)對(duì)單個(gè)致敏蛋白敏感的成分解析，顯著的提高診斷的檢出率；迄今為止，已有8種狗毛皮屑過(guò)敏原被世界衛(wèi)生組織和國(guó)際免疫學(xué)會(huì)聯(lián)合鑒定，分別是can?f?1、can?f?2、can?f?4和can?f?6四種已知屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的狗毛皮屑過(guò)敏原、can?f?3血清白蛋白、can?f?5精氨酸酯酶、can?f?7免附睪分泌蛋白e1、can?f?8抑半胱氨酸蛋白酶蛋白。

2、現(xiàn)有的狗毛皮屑過(guò)敏原提取物是從狗皮屑、狗上皮中進(jìn)行過(guò)敏原富集，由于不同狗種屬來(lái)源及個(gè)體的差異，天然提取的狗毛皮屑過(guò)敏原在狗主要過(guò)敏原can?f?1和can?f?5含量方面存在較大差異，使得開(kāi)發(fā)的狗毛皮屑過(guò)敏原免疫印跡檢測(cè)試劑盒存在較大的批間差，并且天然提取的數(shù)量少，很難進(jìn)行規(guī)模化和商業(yè)化制備。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的是提供一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白及其應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中的問(wèn)題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：本發(fā)明第一方面提供一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

3、優(yōu)選的，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白包含了優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白canf?1，氨基酸序列如seq?id?no.2所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f2，氨基酸序列如seq?id?no.3所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原血清白蛋白can?f?3，氨基酸序列如seq?id?no.4所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f?4，氨基酸序列如seq?id?no.5所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原精氨酸酯酶can?f?5，氨基酸序列如seq?id?no.6所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f6，氨基酸序列如seq?id?no.7所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原免附睪分泌蛋白e1?can?f?7，氨基酸序列如seq?id?no.8所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原抑半胱氨酸蛋白酶蛋白can?f?8，氨基酸序列如seqid?no.9所示。

4、優(yōu)選的，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏過(guò)敏原融合基因的核苷酸序列如seq?id?no.10所示。

5、優(yōu)選的，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏過(guò)敏原融合基因核苷酸的重組表達(dá)質(zhì)粒為pet-22b(+)。

6、優(yōu)選的，所述的重組質(zhì)粒采用的表達(dá)宿主為大腸桿菌origamib(de3)。

7、本發(fā)明第二方面提供一種本發(fā)明第一方面所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的制備方法，包括如下步驟：

8、步驟(1)，合成狗毛皮屑過(guò)敏原融合基因；

9、步驟(2)，將步驟(1)的重組質(zhì)粒進(jìn)行克隆后，通過(guò)同源重組的方法，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pet-22b(+)-can，并且驗(yàn)證其序列的正確性；

10、步驟(3)，將步驟(2)的重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至大腸桿菌表達(dá)宿主origamib(de3)；

11、步驟(4)，將步驟(3)的菌種在原核表達(dá)培養(yǎng)基中進(jìn)行重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的表達(dá)；

12、步驟(5)，將步驟(4)的菌體進(jìn)行鎳柱純化的獲得重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白；

13、步驟(6)，將步驟(5)的重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白進(jìn)行蛋白定量和活性檢測(cè)；

14、步驟(7)，將步驟(6)的重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白進(jìn)行保存。

15、本發(fā)明第三方面提供一種本發(fā)明第一方面所述的重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的應(yīng)用，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白可應(yīng)用于狗毛皮屑脫敏治療。

16、優(yōu)選的，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白可應(yīng)用于免疫學(xué)診斷試劑或過(guò)敏原檢測(cè)診斷試劑盒。

17、優(yōu)選的，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白可制作半定量的狗毛皮屑過(guò)敏原特異性ige抗體檢測(cè)試劑盒，所述ige抗體檢測(cè)試劑盒包括含ccd阻斷劑樣本稀釋液、高活性過(guò)敏原膜條、堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人ig?e抗體、底物液、終止液、清洗液以及質(zhì)控品。

18、優(yōu)選的，所述ige抗體檢測(cè)試劑盒采用間接法原理在免疫印跡平臺(tái)進(jìn)行過(guò)敏原檢測(cè)，反應(yīng)全程在自動(dòng)蛋白印跡儀上自動(dòng)運(yùn)行。

19、本發(fā)明至少具備以下有益效果：

20、本發(fā)明提供的一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白及其應(yīng)用，重組融合蛋白融合了can?f?1、can?f?2、can?f?4和can?f?6四種已知屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的狗毛皮屑過(guò)敏原、can?f?3血清白蛋白、can?f?5精氨酸酯酶、can?f?7免附睪分泌蛋白e1、can?f?8抑半胱氨酸蛋白酶蛋白，解決了現(xiàn)有天然狗毛皮屑過(guò)敏原原料批間差大的問(wèn)題以及部分過(guò)敏原含量較多或缺失造成的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問(wèn)題，本發(fā)明保證了批間一致性，控制了產(chǎn)品質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。

技術(shù)特征：

1.一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白，其特征在于，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白，其特征在于，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白包含了優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f1，氨基酸序列如seq?idno.2所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f2，氨基酸序列如seq?id?no.3所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原血清白蛋白can?f3，氨基酸序列如seq?id?no.4所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f4，氨基酸序列如seq?id?no.5所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原精氨酸酯酶can?f5，氨基酸序列如seq?id?no.6所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原脂質(zhì)運(yùn)載蛋白can?f6，氨基酸序列如seq?id?no.7所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原免附睪分泌蛋白e1?can?f7，氨基酸序列如seq?id?no.8所示；優(yōu)勢(shì)序列過(guò)敏原抑半胱氨酸蛋白酶蛋白can?f8，氨基酸序列如seq?id?no.9所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白，其特征在于，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏過(guò)敏原融合基因的核苷酸序列如seq?id?no.10所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白及其應(yīng)用，其特征在于，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏過(guò)敏原融合基因核苷酸的重組表達(dá)質(zhì)粒為pet-22b(+)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白，其特征在于，所述的重組質(zhì)粒采用的表達(dá)宿主為大腸桿菌origamib(de3)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白，其特征在于，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的制備方法，包括如下步驟：

7.一種如權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的應(yīng)用，其特征在于，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白可應(yīng)用于狗毛皮屑脫敏治療。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的應(yīng)用，其特征在于，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白可應(yīng)用于免疫學(xué)診斷試劑或過(guò)敏原檢測(cè)診斷試劑盒。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的應(yīng)用，其特征在于，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白可制作半定量的狗毛皮屑過(guò)敏原特異性ige抗體檢測(cè)試劑盒，所述ige抗體檢測(cè)試劑盒包括含ccd阻斷劑樣本稀釋液、高活性過(guò)敏原膜條、堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人ig?e抗體、底物液、終止液、清洗液以及質(zhì)控品。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的應(yīng)用，其特征在于，所述ige抗體檢測(cè)試劑盒采用間接法原理在免疫印跡平臺(tái)進(jìn)行過(guò)敏原檢測(cè)，反應(yīng)全程在自動(dòng)蛋白印跡儀上自動(dòng)運(yùn)行。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明適用于重組蛋白技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種重組狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白及其應(yīng)用，所述狗毛皮屑過(guò)敏原融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示；優(yōu)選的，所述重組狗毛皮屑過(guò)敏過(guò)敏原融合基因的核苷酸序列如SEQ?IDNo.10所示。本發(fā)明重組融合蛋白融合了Can?f?1、Can?f2、Can?f4和Can?f6四種已知屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的狗毛皮屑過(guò)敏原、Can?f3血清白蛋白、Can?f5精氨酸酯酶、Can?f7免附睪分泌蛋白E1、Can?f8抑半胱氨酸蛋白酶蛋白，解決了現(xiàn)有天然狗毛皮屑過(guò)敏原原料批間差大的問(wèn)題以及部分過(guò)敏原含量較多或缺失造成的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問(wèn)題，本發(fā)明保證了批間一致性，控制了產(chǎn)品質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。

技術(shù)研發(fā)人員：陳斯勇,王益棟,郭敏卓,牛偉萍,江必勝
受保護(hù)的技術(shù)使用者：寧波博肽生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/28