本發(fā)明涉及一種新的聚酮類化合物及其制備方法與抗炎應用。

背景技術：

1、炎癥是一種復雜的生物學過程，是機體對損傷、感染或其他刺激的一種非特異性反應，旨在清除病原體、修復受損組織并恢復穩(wěn)態(tài)。盡管炎癥是機體的一種自我保護反應，但過度或長期的炎癥反應可能導致組織損傷、疾病進展甚至多器官功能障礙綜合征。隨著對炎癥機制的深入研究，科研人員不斷探索新型抗炎藥物的研發(fā)。目前，新型抗炎藥物主要包括靶向炎癥信號通路的生物制劑、小分子化合物以及基因治療等。小分子化合物作為新型抗炎藥物的研究熱點之一，具有口服給藥、價格低廉等優(yōu)勢，備受關注。這類藥物通過干預炎癥信號通路的關鍵分子，抑制炎癥反應的發(fā)生，對于治療慢性炎癥性疾病具有重要意義。近年來，一些小分子化合物如jak抑制劑、il-1β拮抗劑等相繼問世，為抗炎藥物的研究開辟了新的領域。

技術實現思路

1、本發(fā)明目的是提供一種聚酮類化合物及其制備方法與應用，所述聚酮類化合物是一種新的具有抗炎活性的小分子先導化合物，解決臨床對于新型抗炎藥物需求的問題。

2、本發(fā)明采用的技術方案是：

3、本發(fā)明提供一種聚酮類化合物，所述聚酮類化合物結構如下列之一所示：

4、

5、本發(fā)明還提供一種所述聚酮類化合物的制備方法，所述方法按如下步驟進行：

6、(1)交枝頂孢霉zjut249菌懸液加入大米培養(yǎng)基，在28℃條件下發(fā)酵30天，獲得發(fā)酵產物；大米培養(yǎng)基是由大米加入水混合而成；所述水體積用量以大米質量計為1.5ml/g；所述交枝頂孢霉(sarocladium?sp.)zjut249保藏編號為cctcc?no：m?2023476；

7、(2)發(fā)酵產物用95％乙醇浸提3次，每次24小時，合并提取液，減壓回收溶劑得乙醇提取物，上述乙醇提取物以水懸浮，乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取物；

8、(3)將乙酸乙酯萃取物用甲醇溶解后進行mci?chp?20p柱層析分離，用體積比75:20→100:0的甲醇/水溶液梯度洗脫，每個洗脫液洗脫2個柱體積，流速均為15ml/min，收集體積比80:20的甲醇-水溶液洗脫部位，減壓濃縮至干，得組分a；收集體積比85:10的甲醇-水溶液洗脫部位，減壓濃縮至干，得組分b；

9、(4)組分a再經硅膠柱層析(5×30cm，硅膠300-400目)分離，以體積比為3:1的石油醚-丙酮溶液洗脫，以體積比2:1的石油醚-丙酮為展開劑進行薄層層析檢測，收集rf值為0.5的流出液，減壓濃縮至干得化合物7；收集rf值為0.35的流出液，減壓濃縮至干得化合物3；

10、(5)組分b先經ods?c18柱層析(4.5×30cm)分離，依次以體積比80:20的甲醇-水溶液、體積比85:15的甲醇-水溶液、體積比90:10的甲醇-水溶液洗脫，每個洗脫液各洗脫1l，流速均為15ml/min，分別收集體積比80:20、85:15和90:10甲醇-水洗脫部位，減壓回收溶劑，得組分b1、b2、b3；

11、(6)組分b1采用硅膠柱層析(4×30cm)分離，以體積比為8:1的二氯甲烷-甲醇溶液洗脫，以體積比2:1的石油醚-丙酮為展開劑進行薄層層析檢測，收集rf值為0.65的流出液，減壓濃縮至干得化合物2；

12、組分b2經ods?c-18柱層析(2.5×30cm)分離，以體積比80:20的甲醇/水溶液洗脫，以體積比2:1的石油醚-丙酮為展開劑進行薄層層析檢測，收集rf值為0.60的流出液，減壓濃縮至干得化合物5；

13、組分b3經ods柱層析(5×30cm)分離，依次以體積比80:20的甲醇-水溶液、體積比85:15的甲醇-水溶液、體積比90:10的甲醇-水溶液洗脫，每個洗脫液各洗脫1l，流速均為10ml/min，以體積比2:1的石油醚-丙酮為展開劑進行薄層層析檢測，分別收集rf值為0.40、0.65和0.70的流出液，減壓濃縮至干得化合物4、化合物1和化合物6。

14、進一步，步驟(1)所述交枝頂孢霉zjut249發(fā)酵前先進行活化，并制成菌懸液，以15-20ml/kg的量接種至大米發(fā)酵培養(yǎng)基，所述菌懸液按如下方法制備：將交枝頂孢霉zjut249接種至pda培養(yǎng)基，在28℃培養(yǎng)5-7天，獲得平板菌體；將含體積濃度0.05％吐溫80的無菌水溶液倒入平板中，將菌體從平板上刮下并與無菌水充分混合制成菌體濃度1×107-1×108cfu/ml的菌懸液。

15、進一步，步驟(2)所述95％乙醇每次浸提體積用量以發(fā)酵產物質量計為1-5l/g(優(yōu)選4l/g)；所述水與乙酸乙酯體積比為1:1，所述水和乙酸乙酯總體積以95％乙醇總體積比為1.4:30。

16、進一步，步驟(3)優(yōu)選依次用體積比75:25的甲醇-水溶液、體積比80:20的甲醇-水溶液、體積比85:15的甲醇-水溶液、體積比90:10的甲醇-水溶液、體積比100:0的甲醇-水溶液洗脫。

17、本發(fā)明還提供一種所述聚酮化合物在制備抗炎藥物中的應用。

18、進一步，所述抗炎藥物為lps誘導的巨噬細胞炎癥抑制劑，所述巨噬細胞為鼠源細胞株raw264.7。

19、本發(fā)明還提供一種用于制備聚酮類化合物的交枝頂孢霉(sarocladium?sp.)zjut249，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2023年4月6日，保藏編號為cctccno：m?2023476，保藏地址為中國，武漢，武漢大學，郵編430072。

20、與現有技術相比，本發(fā)明有益效果主要體現在：本發(fā)明篩選得到一株能夠發(fā)酵產聚酮類化合物的新菌株--交枝頂孢霉zjut249，將交枝頂孢霉zjut249接種至大米培養(yǎng)基，在28℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)，取發(fā)酵物進行分離純化，獲得所述聚酮類化合物；本發(fā)明所述聚酮類化合物對lps誘導的raw264.7巨噬細胞炎癥具有較好的抑制作用，在濃度為9μm時抑制率分別為65％、35％、62％、76％、36％、60、78％。

技術特征：

1.一種聚酮類化合物，其特征在于，所述聚酮類化合物結構如下列之一所示：

2.一種權利要求1所述聚酮類化合物的制備方法，其特征在于，所述方法按如下步驟進行：

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述交枝頂孢霉zjut249發(fā)酵前先進行活化，并制成菌懸液，以15-20ml/kg的量接種至大米發(fā)酵培養(yǎng)基，所述菌懸液按如下方法制備：將交枝頂孢霉zjut249接種至pda培養(yǎng)基，在28℃培養(yǎng)5-7天，獲得平板菌體；將含體積濃度0.05％吐溫80的無菌水溶液倒入平板中，將菌體從平板上刮下并與無菌水充分混合制成菌體濃度1×107-1×108cfu/ml的菌懸液。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述95％乙醇每次浸提體積用量以發(fā)酵產物質量計為1-5l/g；所述水與乙酸乙酯體積比為1:1，所述水和乙酸乙酯總體積以95％乙醇總體積比為1.4:30。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)依次用體積比75:25的甲醇-水溶液、體積比80:20的甲醇-水溶液、體積比85:15的甲醇-水溶液、體積比90:10的甲醇-水溶液、體積比100:0的甲醇-水溶液洗脫。

6.一種權利要求1所述聚酮化合物在制備抗炎藥物中的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述抗炎藥物為lps誘導的巨噬細胞炎癥抑制劑。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述巨噬細胞為鼠源細胞株raw264.7。

9.一種用于制備權利要求1所述聚酮類化合物的交枝頂孢霉(sarocladium?sp.)zjut249，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2023年4月6日，保藏編號為cctccno：m?2023476，保藏地址為中國，武漢，武漢大學，郵編430072。

技術總結
本發(fā)明公開了一種聚酮類化合物及其制備方法與應用，本發(fā)明篩選得到一株能夠發(fā)酵產聚酮類化合物的新菌株??交枝頂孢霉ZJUT249，將交枝頂孢霉ZJUT249接種至大米培養(yǎng)基，在28℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)，取發(fā)酵物進行分離純化，獲得所述聚酮類化合物；本發(fā)明所述聚酮類化合物對LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞炎癥具有較好的抑制作用，在濃度為9μM時抑制率分別為65％、35％、62％、76％、36％、60、78％。

技術研發(fā)人員：應優(yōu)敏,李靜,王鴻,屠樹寶,宋英
受保護的技術使用者：浙江工業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/11/14