本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè),具體而言,涉及一種評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的生物標(biāo)志物,以及檢測(cè)生物樣本中l(wèi)rp1b基因突變的試劑的應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、肺癌是一種普遍存在的癌癥,是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一,嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命。肺癌的兩大病理亞型為非小細(xì)胞肺癌(nsclc)和小細(xì)胞肺癌(sclc),其中nsclc又細(xì)分為腺癌(luad)和鱗狀細(xì)胞癌(lusc)。在超過(guò)75%的nsclc患者中,晚期診斷是常見(jiàn)的,盡管有各種治療方案,但5年生存率仍低于25%[walters?s,maringec,coleman?mp,et?al.lung?cancer?survival?and?stage?at?diagnosis?in?australia,canada,denmark,norway,sweden?and?the?uk:a?population-based?study,2004-2007.thorax?2013,68(6):551-564]。近年來(lái),免疫療法已成為一種革命性的治療方法。免疫療法為晚期肺癌患者帶來(lái)了新的治療選擇。盡管其療效優(yōu)異,但研究表明,只有約20%的患者從中受益[cascone?t,fradette?j,pradhan?m,gibbons?dl.tumor?immunology?andimmunotherapy?ofnon-small-cell?lung?cancer.cold?spring?harb?perspectmed.2022may27;12(5):a037895.]。此外,免疫療法是一種昂貴的治療選擇,并可能導(dǎo)致副作用。因此,確定合適的生物標(biāo)志物來(lái)識(shí)別可能從治療中獲益的個(gè)體是至關(guān)重要的。目前,程序性死亡配體1(pd-l1)和腫瘤突變負(fù)荷(tmb)是臨床中應(yīng)用最廣泛的生物標(biāo)志物,有豐富的循證醫(yī)學(xué)。然而,pd-l1和tmb對(duì)患者的分層篩選仍然有限,并且需要篩選新的生物標(biāo)志物以準(zhǔn)確地在臨床實(shí)踐中應(yīng)用免疫治療。
2、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1b(low?density?lipoprotein?receptor-相關(guān)蛋白1b,lrp1b)位于2號(hào)染色體上,其基因序列長(zhǎng)度超過(guò)500kb,由91個(gè)外顯子組成,范圍從77個(gè)堿基到1899個(gè)堿基,編碼4599個(gè)氨基酸[liu?cx,musco?s,lisitsina?nm,et?al.genomicorganization?of?a?new?candidate?tumor?suppressor?gene,lrp1b.genomics?2000,69(2):271-274.]。以往對(duì)lrp1b的研究主要集中在其抗腫瘤功能上。已知lrp1b在多種癌癥中下調(diào)。lrp1b最初被稱為脂蛋白受體相關(guān)蛋白缺失,因?yàn)樵?0%的nsclc細(xì)胞系中觀察到其純合缺失。隨后,在胃癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤、食管鱗狀細(xì)胞癌和口腔鱗狀細(xì)胞癌中也發(fā)現(xiàn)了lrp1b的純體細(xì)胞缺失,而在甲狀腺癌、胃癌、食管鱗狀細(xì)胞癌和口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中也發(fā)現(xiàn)了lrp1b啟動(dòng)子區(qū)甲基化。此外,在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中觀察到兩個(gè)外顯子融合,導(dǎo)致過(guò)早終止密碼子出現(xiàn),mir-548a-5p和mir-301b-3p過(guò)表達(dá)導(dǎo)致lrp1b下調(diào)。lrp1b在腫瘤中的低表達(dá)可能是由染色體、表觀遺傳和微rna(mirna)相關(guān)機(jī)制共同導(dǎo)致的。大量研究表明,lrp1b的表達(dá)降低有助于腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展,而上調(diào)lrp1b則抑制腫瘤的發(fā)生[wang?z,sunp,gao?c,et?al.down-regulation?of?lrp1b?in?colon?cancer?promoted?the?growthand?migration?of?cancer?cells.exp?cell?res2017,357(1):1-8.]。
3、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)的免疫生物標(biāo)志物是pd-l1和tmb。然而,它們不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)免疫治療的有效性。如果能找到一種評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的生物標(biāo)志物,就能提前為免疫治療受益性不好的患者避免因免疫治療而耽誤其他治療方案最佳時(shí)間的風(fēng)險(xiǎn)。因此,確定能夠區(qū)分免疫治療受益群體的適當(dāng)生物標(biāo)志物是必要的。通過(guò)檢索國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有技術(shù),尚沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道lrp1b突變是luad免疫治療的潛在生物標(biāo)志物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明的目的在于提供一種評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的生物標(biāo)志物,以及檢測(cè)生物樣本中l(wèi)rp1b基因突變的試劑的應(yīng)用,以提高免疫療法的經(jīng)濟(jì)學(xué)性能,進(jìn)而避免不必要的資源浪費(fèi)。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的,本發(fā)明人通過(guò)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行下一代測(cè)序(ngs),通過(guò)對(duì)患者的ngs數(shù)據(jù)分析研究發(fā)現(xiàn),lrp1b突變與有利的免疫反應(yīng)相關(guān)。在進(jìn)一步的試驗(yàn)中,本發(fā)明人通過(guò)研究分析發(fā)現(xiàn):(1)lrp1b突變患者與肺腺癌(luad)野生型患者pd-l1和tmb的表達(dá)水平存在顯著差異;(2)luad中l(wèi)rp1b突變患者的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(til)水平明顯高于野生型患者;(3)與野生型患者相比,luad中l(wèi)rp1b突變患者的無(wú)進(jìn)展生存期(pfs)顯著延長(zhǎng),而lrp1b突變的lusc患者pd-l1表達(dá)、tils和pfs未見(jiàn)差異。這些發(fā)現(xiàn)提供了強(qiáng)有力的證據(jù),證明lrp1b突變是luad免疫治療的潛在生物標(biāo)志物。此外,本發(fā)明人通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,敲低lrp1b可增強(qiáng)mpd-1的療效,機(jī)制研究表明,lrp1b通過(guò)改變stat3的磷酸化水平,調(diào)節(jié)slc7a11的表達(dá),從而調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)鐵死亡的敏感性。進(jìn)一步的分析表明,lrp1b敲低可促進(jìn)體內(nèi)免疫治療。
3、基于上述研究成果,本發(fā)明提供了如下實(shí)現(xiàn)發(fā)明技術(shù)目的的技術(shù)方案:一種評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的生物標(biāo)志物,該生物標(biāo)志物為突變的lrp1b基因。需要說(shuō)明的是,只要肺腺癌患者的腫瘤組織中l(wèi)rp1b基因發(fā)生突變,就代表該患者后期進(jìn)行免疫治療的受益性較好,而對(duì)基因突變的具體方式?jīng)]有要求,任何突變方式都可以。
4、另外,本發(fā)明還提供了檢測(cè)生物樣本中l(wèi)rp1b基因突變的試劑的應(yīng)用,所述應(yīng)用為制備用于評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的產(chǎn)品,所述生物樣本為肺腺癌患者的腫瘤組織。
5、進(jìn)一步優(yōu)選地,所述的免疫治療包括免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療、過(guò)繼性免疫治療、細(xì)胞治療。
6、再進(jìn)一步優(yōu)選地,所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑包括pd-1/pd-l1抗體。
7、本發(fā)明還提供了一種肺腺癌患者免疫治療受益性的評(píng)估方法,該方法包括以下步驟:
8、(1)收集肺腺癌患者的腫瘤組織樣本,檢測(cè)lrp1b基因是否突變;
9、(2)若lrp1b基因突變,則評(píng)估為免疫治療受益性較高;若lrp1b未發(fā)生基因突變,則評(píng)估為免疫治療受益性較低。
10、與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明首次提出lrp1b突變可以作為評(píng)估肺腺癌(luad)免疫治療受益性的生物標(biāo)志物,從而為免疫治療受益性不好的患者避免因免疫治療而耽誤其它治療方案最佳時(shí)間的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)有利于提高肺腺癌免疫療法的經(jīng)濟(jì)學(xué)性能,進(jìn)而避免了不必要的資源浪費(fèi)。
1.檢測(cè)生物樣本中l(wèi)rp1b基因突變的試劑的應(yīng)用,所述應(yīng)用為制備用于評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的產(chǎn)品,所述生物樣本為肺腺癌患者的腫瘤組織。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述的免疫治療包括免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療、過(guò)繼性免疫治療、細(xì)胞治療。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑包括pd-1/pd-l1抗體。
4.一種評(píng)估肺腺癌免疫治療受益性的生物標(biāo)志物,其特征在于,該生物標(biāo)志物為突變的lrp1b基因。
5.一種肺腺癌患者免疫治療受益性的評(píng)估方法,其特征在于,該方法包括以下步驟: