本發(fā)明屬于蟲害防控，具體涉及一種bta60srpl7基因在煙粉虱防治中的應(yīng)用、防治煙粉虱的試劑及防治方法。

背景技術(shù)：

1、煙粉虱bemisia?tabaci(gennadius)隸屬于昆蟲綱(insecta)半翅目(hemiptera)粉虱科(aleyrodidae)。該蟲最早報(bào)道于1889年，在希臘煙草上發(fā)現(xiàn)。近40余年來，該蟲成為了一種世界性的重要農(nóng)業(yè)害蟲，對蔬菜、棉花等造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

2、目前，防治煙粉虱的方法主要以化學(xué)防治為主，使用化學(xué)合成的殺蟲劑，如有機(jī)磷、氨基甲酸酯等，進(jìn)行噴灑，能夠快速有效地殺滅煙粉虱。操作簡單，效果明顯，但可能對非靶標(biāo)生物造成危害，并且長期使用可能導(dǎo)致蟲害對藥劑的抗藥性，造成環(huán)境污染，存在安全隱患。生物防治方法對于生態(tài)環(huán)境友好，不會造成化學(xué)殘留，成為近年來研究熱點(diǎn)。

3、rna干擾(rna?interference，rnai)是一種由短片段rnas(sirnas)觸發(fā)，促進(jìn)同源mrna的降解或抑制其翻譯的作用機(jī)制。rnai首先在線蟲中被發(fā)現(xiàn)，并在大多數(shù)生物體中均可發(fā)揮作用。使用rnai技術(shù)進(jìn)行基因功能研究、轉(zhuǎn)基因抗蟲植物及新型核酸農(nóng)藥逐漸成為植物保護(hù)行業(yè)中一種重要的綠色生防手段，rnai技術(shù)可以特異性抑制基因的表達(dá)，高效地靶向沉默害蟲基因，從而達(dá)到防治害蟲的目的，在開發(fā)新的害蟲治理策略方面顯示出巨大的潛力。從基因?qū)用骈_發(fā)適用于防治煙粉虱的外源dsrna產(chǎn)品，使用方便、成本低，更由于基因的特異性，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的防治效果，對環(huán)境友好，在煙粉虱的防治方面具有很大的應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種bta60srpl7基因在煙粉虱防治中的應(yīng)用、防治煙粉虱的試劑及防治方法。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、煙粉虱bta60srpl7基因在煙粉虱防治或制備防治煙粉虱的試劑中的應(yīng)用，所述煙粉虱bta60srpl7基因的核酸序列如seq?id?no.1所示。

4、在上述方案的基礎(chǔ)上，通過基因沉默的方式，抑制煙粉虱體內(nèi)bta60srpl7基因的表達(dá)，降低煙粉虱對寄主植物的趨向性。

5、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述的基因沉默的方式為rna干擾。

6、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述的寄主植物為番茄。

7、一種用于煙粉虱生物防治的dsrna，針對煙粉虱bta60srpl7基因設(shè)計(jì)引物，合成針對于煙粉虱bta60srpl7基因的dsrna；所述煙粉虱bta60srpl7基因的核酸序列如seq?idno.1所示。

8、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述引物如seq?id?no.2、seq?id?no.3所示。

9、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述dsrna正義鏈所對應(yīng)的核酸序列如seq?id?no.4所示；反義鏈所對應(yīng)的核苷酸序列為seq?id?no.4的反向互補(bǔ)序列。

10、一種防治煙粉虱的試劑，含有上述的dsrna。

11、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述防治煙粉虱的試劑中dsrna的濃度≥700ng/μl。

12、一種防治煙粉虱的方法，通過基因沉默的方式，抑制煙粉虱體內(nèi)bta60srpl7基因的表達(dá)，降低煙粉虱對寄主植物的趨向性，所述煙粉虱bta60srpl7基因的核酸序列如seqid?no.1所示。

13、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述的基因沉默的方式為rna干擾。

14、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述的rna干擾是通過飼喂的方式，使煙粉虱攝入bta60srpl7基因的dsrna。

15、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述bta60srpl7基因的dsrna，由以下方法制得：

16、采用煙粉虱總rna反轉(zhuǎn)錄成的cdna為模板，用合成dsrna的引物進(jìn)行pcr擴(kuò)增，回收純化pcr擴(kuò)增產(chǎn)物并作為體外轉(zhuǎn)錄dsrna的模板，經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄合成dsrna。

17、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述合成dsrna的引物如seq?id?no.2、seq?id?no.3所示。

18、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述所述dsrna正義鏈所對應(yīng)的核酸序列如seq?id?no.4所示；反義鏈所對應(yīng)的核苷酸序列為seq?id?no.4的反向互補(bǔ)序列。

19、在上述方案的基礎(chǔ)上，所述的煙粉虱為med隱種(mediterranean，即q型煙粉虱)。

20、本發(fā)明具有以下有益效果：

21、本發(fā)明提供了煙粉虱的bta60srpl7基因及其在煙粉虱防治中的應(yīng)用，并開發(fā)了其高效沉默dsrna，開發(fā)了能夠高效防治煙粉虱的技術(shù)，即通過飼喂法將dsbta60srpl7導(dǎo)入煙粉虱體內(nèi)，顯著降低煙粉虱寄主定位能力和取食行為，從而達(dá)到防治目的。該方法操作方便、有效性和特異性強(qiáng)、影響寄主選擇性效果明顯，且具有環(huán)境友好等諸多優(yōu)點(diǎn)，有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.煙粉虱bta60srpl7基因在煙粉虱防治或制備防治煙粉虱的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述煙粉虱bta60srpl7基因的核酸序列如seq?id?no.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，通過基因沉默的方式，抑制煙粉虱體內(nèi)bta60srpl7基因的表達(dá)，降低煙粉虱對寄主植物的趨向性。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的基因沉默的方式為rna干擾。

4.一種用于煙粉虱生物防治的dsrna，其特征在于，針對煙粉虱bta60srpl7基因設(shè)計(jì)引物，合成針對于煙粉虱bta60srpl7基因的dsrna；所述煙粉虱bta60srpl7基因的核酸序列如seq?id?no.1所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述用于煙粉虱生物防治的dsrna，其特征在于，所述引物如seq?idno.2、seq?id?no.3所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述用于煙粉虱生物防治的dsrna，其特征在于，所述dsrna正義鏈所對應(yīng)的核酸序列如seq?id?no.4所示；反義鏈所對應(yīng)的核苷酸序列為seq?id?no.4的反向互補(bǔ)序列。

7.一種防治煙粉虱的試劑，其特征在于，含有權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的dsrna。

8.一種防治煙粉虱的方法，其特征在于，通過基因沉默的方式，抑制煙粉虱體內(nèi)bta60srpl7基因的表達(dá)，降低煙粉虱對寄主植物的趨向性，所述煙粉虱bta60srpl7基因的核酸序列如seq?id?no.1所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述防治煙粉虱的方法，其特征在于，所述的基因沉默的方式為rna干擾。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述防治煙粉虱的方法，其特征在于，所述的rna干擾是通過飼喂的方式，使煙粉虱攝入bta60srpl7基因的dsrna。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種Bta60SRPL7基因在煙粉虱防治中的應(yīng)用、防治煙粉虱的試劑及防治方法，屬于蟲害防控技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明煙粉虱Bta60SRPL7基因的核酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，根據(jù)Bta60SRPL7基因制備其高效沉默dsBta60SRPL7，通過飼喂法將dsBta60SRPL7導(dǎo)入煙粉虱體內(nèi)，能顯著降低煙粉虱對寄主的定位能力和取食行為，從而達(dá)到防治目的。該方法操作方便、有效性和特異性強(qiáng)、影響寄主選擇性效果明顯，且具有環(huán)境友好等諸多優(yōu)點(diǎn)，有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：褚棟,王康,許夢澤,楊坤,陶云荔
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9