本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)，具體涉及一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

1、體細(xì)胞系的建立和低溫保存是研究瀕危物種的特性和保存有價(jià)值資源的基礎(chǔ)和重要方法。在這個(gè)基礎(chǔ)上，成纖維細(xì)胞的研究成為了關(guān)注的焦點(diǎn)。成纖維細(xì)胞，作為疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，起源于胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞。它們?cè)谛螒B(tài)上具有明顯的特征，如較大的細(xì)胞體積、清晰的外輪廓，以及紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)。此外，成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞的功能活動(dòng)十分旺盛，其細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具有明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)。在一定條件下，成纖維細(xì)胞可以與纖維細(xì)胞相互轉(zhuǎn)化。這一特性使得成纖維細(xì)胞在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要作用，對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)具有十分重要的作用。

2、近年來(lái)，成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能不足的問(wèn)題逐漸凸顯，首先，成纖維干細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)其活率和分化潛能具有重要影響。傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法往往難以完全模擬細(xì)胞在體內(nèi)的自然生長(zhǎng)環(huán)境，導(dǎo)致細(xì)胞活性和分化能力受限。其次，培養(yǎng)過(guò)程中所使用的培養(yǎng)基、添加劑以及培養(yǎng)條件等因素也可能對(duì)成纖維干細(xì)胞的活率和分化潛能產(chǎn)生影響。如果這些因素未能得到合理優(yōu)化，就可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不良或分化方向偏離預(yù)期。此外，細(xì)胞來(lái)源的個(gè)體差異、年齡差異以及操作過(guò)程中的污染等因素也可能對(duì)成纖維干細(xì)胞的活率和分化潛能造成不利影響。研究人員致力于研究如何提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法。這將對(duì)于拯救瀕危動(dòng)物具有重要意義。通過(guò)對(duì)成纖維細(xì)胞的研究，我們可以更深入地了解瀕危動(dòng)物的生理特性和細(xì)胞機(jī)制，為保護(hù)瀕危物種提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，這也將為再生醫(yī)學(xué)和疾病治療領(lǐng)域帶來(lái)新的突破。成纖維細(xì)胞的研究在瀕危動(dòng)物保護(hù)、再生醫(yī)學(xué)和疾病治療等方面具有重要價(jià)值。建立高效的成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)方法和體系，將有助于提高瀕危動(dòng)物的保護(hù)水平，為拯救瀕危物種的生物醫(yī)學(xué)研究提供新的研究方向和理論基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能不足的問(wèn)題。

2、本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，包括培養(yǎng)皿，所述培養(yǎng)皿的制備方法包括以下步驟：

4、a1、于室溫?cái)嚢锠顟B(tài)下將硼酸、蔗糖加入至醋酸中，升溫至75-85℃繼續(xù)攪拌0.5-1h，冷卻至室溫，加入正丙醇鋯，于55-65℃攪拌3-4h，于120℃真空干燥3-4h，研磨，得到物料a，將所述物料a于氬氣氛圍中進(jìn)行燒制，得到納米硼化鋯；

5、a2、取氧化石墨烯分散液、葡萄糖混合，攪拌20-30min，加入氨水，攪拌5-8min，于85-95℃攪拌1-2h，加入所述納米硼化鋯、十二烷基磺酸鈉，超聲分散30-40min，于40-50℃水浴攪拌8-10h，過(guò)濾，取固相洗滌，干燥，得到物料b；

6、a3、于氮?dú)夥諊校喝÷然瘉嗚F四水合物、去離子水混合，加入所述物料b，超聲攪拌2-3h，于30-40℃水浴攪拌20-30h，真空干燥，得到物料c；

7、a4、取無(wú)水乙醇、去離子水、濃硝酸、氨水、硝酸鍶混合，加入鈦酸丁酯，攪拌2-3h，于水熱釜中160℃加熱2-3h，真空干燥，于450℃煅燒2-3h，研磨，得到物料d；

8、a5、于避光條件下取雙酚a丙三醇雙甲基丙烯酸酯、雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯、甲基丙烯酸二甲氨乙酯、樟腦醌、物料c、物料d、聚丙烯-graft-馬來(lái)酸酐相容劑(購(gòu)于上海麥克林生化科技股份有限公司)置于高速混合機(jī)中混合20-30min，得到混合物料，將所述混合物料涂覆于半徑為5cm的圓形的玻璃皿表面，壓整均勻至厚度為2mm，然后使用紫外燈照射4-5h進(jìn)行固化，即得所述培養(yǎng)皿。

9、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，還包括培養(yǎng)基，將所述培養(yǎng)基均勻平鋪于所述培養(yǎng)皿底部表面，厚度為5mm，制得細(xì)胞培養(yǎng)皿；所述培養(yǎng)基為dmem培養(yǎng)基(購(gòu)于山東西亞化學(xué)有限公司)。

10、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，利用所述細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行成纖維干細(xì)胞的培養(yǎng)，包括以下步驟：

11、s1、獲取成纖維干細(xì)胞；

12、s2、將所述成纖維干細(xì)胞轉(zhuǎn)移至所述細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)；

13、s3、挑選生長(zhǎng)良好的所述培養(yǎng)后的成纖維干細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、體外成脂誘導(dǎo)分化。

14、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a1中，所述硼酸、蔗糖、醋酸、正丙醇鋯的配量比為2-3g：2-3g：30-40ml：5-6g。

15、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a1中，所述燒制指的是從室溫以5℃/min升溫至800℃保溫10-20min，然后以3℃/min升溫至1200℃保溫2-3h，然后以2℃/min升溫至1500-1600℃保溫1-2h，然后以5℃/min降溫至室溫。

16、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a2中，所述氧化石墨烯分散液、葡萄糖、氨水、納米硼化鋯、十二烷基磺酸鈉的配量比為55-65ml：3.5-3.8g：70-80μl：6-8mg：1-1.2mg。

17、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a2中，所述氧化石墨烯分散液的濃度為0.1mmo?l/l；所述氨水的質(zhì)量濃度為25％。

18、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a3中，所述氯化亞鐵四水合物、去離子水、物料b的配量比為70-80g：500ml：4-6g。

19、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a4中，所述無(wú)水乙醇、去離子水、濃硝酸、氨水、硝酸鍶、鈦酸丁酯的配量比為20-22ml：5-5.5ml：1-1.5ml：17-18ml：0.3-0.5g：4-6ml；所述濃硝酸的濃度為16mo?l/l；所述氨水的濃度為14.8mo?l/l。

20、作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案，步驟a5中，所述雙酚a丙三醇雙甲基丙烯酸酯、雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯、甲基丙烯酸二甲氨乙酯、樟腦醌、物料c、物料d、聚丙烯-graft-馬來(lái)酸酐相容劑的質(zhì)量比為40-50：40-50：2-3：1-2：1-1.2：1-1.2：0.5-0.8。

21、本發(fā)明的有益效果：

22、本發(fā)明所公開(kāi)的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法通過(guò)提供了一種細(xì)胞培養(yǎng)皿，其由氧化石墨烯、納米硼化鋯、二氧化鈦等試劑進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)皿的表面處理，以提高細(xì)胞培養(yǎng)皿的生物相容性和細(xì)胞粘附性等效果；利用上述細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行成纖維干細(xì)胞培養(yǎng)的方法，通過(guò)獲取成纖維干細(xì)胞，并將其轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)、成脂誘導(dǎo)分化。在培養(yǎng)過(guò)程中，通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)條件以促進(jìn)成纖維干細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，提高成纖維干細(xì)胞的活率和分化潛能。

技術(shù)特征：

1.一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括培養(yǎng)皿，所述培養(yǎng)皿的制備方法包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，還包括培養(yǎng)基，將所述培養(yǎng)基均勻平鋪于所述培養(yǎng)皿底部表面，制得細(xì)胞培養(yǎng)皿；所述培養(yǎng)基為dmem培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，利用所述細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行成纖維干細(xì)胞的培養(yǎng)，包括以下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a1中，所述硼酸、蔗糖、醋酸、正丙醇鋯的配量比為2-3g：2-3g：30-40ml：5-6g。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a1中，所述燒制指的是從室溫以5℃/min升溫至800℃保溫10-20min，然后以3℃/min升溫至1200℃保溫2-3h，然后以2℃/min升溫至1500-1600℃保溫1-2h，然后以5℃/min降溫至室溫。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a2中，所述氧化石墨烯分散液、葡萄糖、氨水、納米硼化鋯、十二烷基磺酸鈉的配量比為55-65ml：3.5-3.8g：70-80μl：6-8mg：1-1.2mg。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a2中，所述氧化石墨烯分散液的濃度為0.1mmo?l/l；所述氨水的質(zhì)量濃度為25％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a3中，所述氯化亞鐵四水合物、去離子水、物料b的配量比為70-80g：500ml：4-6g。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a4中，所述無(wú)水乙醇、去離子水、濃硝酸、氨水、硝酸鍶、鈦酸丁酯的配量比為20-22ml：5-5.5ml：1-1.5ml：17-18ml：0.3-0.5g：4-6ml；所述濃硝酸的濃度為16mol/l；所述氨水的濃度為14.8mol/l。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟a5中，所述雙酚a丙三醇雙甲基丙烯酸酯、雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯、甲基丙烯酸二甲氨乙酯、樟腦醌、物料c、物料d、聚丙烯-graft-馬來(lái)酸酐相容劑的質(zhì)量比為40-50：40-50：2-3：1-2：1-1.2：1-1.2：0.5-0.8。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種提高成纖維干細(xì)胞活率和分化潛能的培養(yǎng)方法，屬于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種細(xì)胞培養(yǎng)皿，其由氧化石墨烯、納米硼化鋯、二氧化鈦等試劑進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)皿的表面處理，以提高細(xì)胞培養(yǎng)皿的生物相容性和細(xì)胞粘附性等效果；利用上述細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行成纖維干細(xì)胞培養(yǎng)的方法，通過(guò)獲取成纖維干細(xì)胞，并將其轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)、成脂誘導(dǎo)分化。在培養(yǎng)過(guò)程中，通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)條件以促進(jìn)成纖維干細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，提高成纖維干細(xì)胞的活率和分化潛能。

技術(shù)研發(fā)人員：莫芳正,李相魯,馮馨儀,朱婧
受保護(hù)的技術(shù)使用者：肇慶廣府萬(wàn)海細(xì)胞生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/17