本發(fā)明屬于生物免疫學(xué)，具體涉及一種鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體及其雜交瘤細(xì)胞株和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、鴨呼腸孤病毒(duck?reovirus，drv)是呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬禽呼腸孤病毒的成員之一。

2、鴨呼腸孤病毒屬于呼腸孤病毒科，正呼腸孤病毒屬，呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)，有囊膜的雙鏈rna節(jié)段病毒，病毒粒子直徑約為60-80nm，基因組全長為約23.4kb。根據(jù)其病毒基因組的雙鏈rna節(jié)段的大小，分為l(l1、l2、l3)、m(m1、m2、m3)和s(s1、s2、s3、s4)共十個(gè)節(jié)段。drv除了s1節(jié)段含有3個(gè)順反子外，即含有3個(gè)開放閱讀框，分別編碼p10、p18和σc蛋白，其余9個(gè)節(jié)段僅含有單個(gè)順反子，對應(yīng)編碼1種蛋白。其中，σc蛋白是drv的主要衣殼蛋白，參與病毒的吸附、增殖，能夠促進(jìn)合胞體形成，并且可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體和保護(hù)性中和抗體，因此σc蛋白成為鴨呼腸孤病毒新型基因工程疫苗和診斷試劑研發(fā)的首選抗原。

3、目前鴨呼腸孤病毒的檢測技術(shù)包括：病毒分離、rt-pcr、rt-qpcr、間接免疫熒光(ifa)、elisa等方法，但檢測所需時(shí)間長，成本昂貴，并且目前尚無針對鴨呼腸孤病毒的檢測的商品化試劑盒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，本發(fā)明的目的是提供一種鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體及其雜交瘤細(xì)胞株和應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)檢測鴨呼腸孤病毒檢測時(shí)間長以及成本昂貴的問題。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：提供一種鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體，該單克隆抗體的重鏈可變區(qū)具有vh?cdr1、vh?cdr2和vh?cdr3三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，分別由seq?id?no.5、seq?id?no.6和seq?id?no.7所示氨基酸序列組成；輕鏈可變區(qū)具有vlcdr1、vl?cdr2和vl?cdr3三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，分別由seq?id?no.8、seq?id?no.9和seq?idno.10所示氨基酸序列組成。

3、本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明用純化鴨呼腸孤病毒drv-th11株的重組免疫σc蛋白免疫balb/c小鼠，通過細(xì)胞融合技術(shù)，篩選出1株能穩(wěn)定分泌鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，獲得鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體；通過對雜交瘤細(xì)胞測序，獲得鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體的輕鏈和重鏈序列。

4、在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)：

5、進(jìn)一步，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.4所示。

6、進(jìn)一步，鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體亞型為igg2。

7、本發(fā)明的另一目的在于提供一種核酸分子，可以編碼上述抗鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體。

8、本發(fā)明的另一目的在于提供一種表達(dá)載體，包括上述核酸分子。

9、本發(fā)明的另一目的在于提供一種分泌如權(quán)利上述鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，該雜交瘤細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞1d5e8，其保藏號為cgmccno.45840，于2024年4月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

10、本發(fā)明的另一目的在于提供上述鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體在制備檢測鴨呼腸孤病毒的試劑盒中的應(yīng)用。

11、進(jìn)一步，試劑盒為western?blot檢測用試劑盒。

12、進(jìn)一步，試劑盒為間接免疫熒光ifa檢測試劑盒。

13、進(jìn)一步，試劑盒為免疫組織化學(xué)ihc檢測試劑盒。

14、本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明提供了一種雜交瘤細(xì)胞株，能夠分泌鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體，該抗體具有高特異性和穩(wěn)定性，可以特異性識(shí)別感染鴨呼腸孤病毒的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測。

技術(shù)特征：

1.一種鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)具有vh?cdr1、vh?cdr2和vh?cdr3三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，分別由seq?id?no.5、seq?id?no.6和seqid?no.7所示氨基酸序列組成；輕鏈可變區(qū)具有vl?cdr1、vl?cdr2和vl?cdr3三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，分別由seq?id?no.8、seq?id?no.9和seq?id?no.10所示氨基酸序列組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.4所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體，其特征在于，其亞型為igg2。

4.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子為編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體的核酸分子。

5.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述載體包括權(quán)利要求4所述的核酸分子。

6.一種分泌如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，其特征在于，所述雜交瘤細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞1d5e8，其保藏號為cgmccno.45840，于2024年4月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

7.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的鴨呼腸孤病毒σc蛋白單克隆抗體在制備檢測鴨呼腸孤病毒的試劑盒中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒為western?blot檢測用試劑盒。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒為間接免疫熒光ifa檢測試劑盒。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒為免疫組織化學(xué)ihc檢測試劑盒。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種鴨呼腸孤病毒σC蛋白單克隆抗體及其雜交瘤細(xì)胞株和應(yīng)用，屬于生物免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明用純化鴨呼腸孤病毒DRV?TH11株的重組免疫σC蛋白免疫BALB/c小鼠，通過細(xì)胞融合技術(shù)，篩選出能穩(wěn)定分泌鴨呼腸孤病毒σC蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，獲得鴨呼腸孤病毒σC蛋白單克隆抗體；通過對雜交瘤細(xì)胞測序，獲得鴨呼腸孤病毒σC蛋白單克隆抗體的輕鏈和重鏈序列，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。本發(fā)明制備得到的抗體具有高特異性和穩(wěn)定性，可以特異性識(shí)別感染鴨呼腸孤病毒的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測。

技術(shù)研發(fā)人員：陳宗艷,黃聰,陳鴻軍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所（中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心上海分中心）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9