本發(fā)明涉及一種干腌火腿復(fù)合活性肽的應(yīng)用及其制備，屬于生物活性肽領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、高尿酸血癥是人體核苷及嘌呤代謝紊亂所引起的代謝性疾病，血清尿酸鹽水平超過正常范圍(即男性上限7.0mg/dl，女性上限為6.0mg/dl)的生化異常。隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了很大的變化，成年人尿酸高水平已經(jīng)超過20％。我國有超過3.2億人患有高尿酸血癥，每年新增痛風(fēng)患者近百萬。高尿酸血癥已成為危害人類健康的第二大疾病。長(zhǎng)期升高的尿酸會(huì)加速心血管疾病的發(fā)展，無癥狀高尿酸血癥與代謝綜合征、糖尿病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)。當(dāng)血尿酸含量過高，尿酸鹽晶體便會(huì)沉積在關(guān)節(jié)、軟組織、腎臟等部位引起炎癥和組織損傷等問題，導(dǎo)致痛風(fēng)、腎結(jié)石等腎臟疾病。黃嘌呤氧化是尿酸合成的最后一步的關(guān)鍵酶，是抑制尿酸合成藥物的主要靶點(diǎn)。

2、目前，市場(chǎng)上的降尿酸類產(chǎn)品主要有兩種，一種是黃嘌呤氧化酶抑制劑類產(chǎn)品，如別嘌醇、非布司他等；另外一類是促尿酸排泄劑。兩類藥物都有其局限性，而且不可避免的發(fā)熱、皮疹、腹痛腹瀉、腎功能損傷等副作用。因此，尋找天然有效的降尿酸物質(zhì)是一個(gè)重要而緊迫的任務(wù)，為高尿酸人群研制天然降尿酸保健食品及活性藥物十分必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有藥物在治療尿酸中的不足，本發(fā)明提供了一種干腌火腿復(fù)合活性肽，所述干腌火腿復(fù)合肽包括：leu-leu-leu-leu-leu-his-gla(lllllha)、glu-his-val-glu-pro-glu-glu(ehvepee)、leu-leu-phe-val-leu-pro-leu(llfvlpl)、leu-leu-phe-lys-phe-leu(llpkpl)和leu-leu-leu-leu-cys-asp-cys(llllcdc)5個(gè)多肽，它們的氨基酸序列分別如seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4和seq?id?no:5所示。

2、本發(fā)明所述干腌火腿復(fù)合活性肽在制備降尿酸藥物中的應(yīng)用。

3、作為進(jìn)一步優(yōu)選的，所述干腌火腿降尿酸活性肽的制備方法包括以下步驟：

4、(1)將干腌火腿于鹽酸混合均質(zhì)處理后離心，取上清ⅰ，在上清ⅰ中加入乙醇靜置離心次取上清ⅱ，上清液ⅱ用超濾膜超濾收集濾液冷凍干燥得到干腌火腿粗提肽。

5、(2)用葡聚糖凝膠柱對(duì)干腌火腿粗提肽進(jìn)一步分離純化，收集黃嘌呤氧化酶抑制活性最高的單峰的洗脫液，冷凍干燥即得到干腌火腿降尿酸活性肽。

6、(3)通過lc-ms/ms對(duì)步驟(2)得到的干腌火腿降尿酸活性肽進(jìn)行鑒定。

7、優(yōu)選的，步驟(1)中鹽酸的濃度為0.2mmol/l。

8、優(yōu)選的，步驟(1)中乙醇的濃度為70％，用量為上清液ⅱ體積的2～2.5倍。

9、優(yōu)選的，步驟(1)中超濾膜的截留分子量為3k?da。

10、優(yōu)選的，步驟(2)中用葡聚糖凝膠柱純化過程中上樣體積為200μl，流速為0.3ml/min。

11、優(yōu)選的，步驟(2)中所述葡聚糖凝膠柱為sephadex?g15。

12、本發(fā)明的有益效果

13、(1)本發(fā)明獲得的干腌火腿復(fù)合活性肽無毒性和副作用，且具有很好的降尿酸作用，可用于降尿酸藥物的制備。

14、(2)本發(fā)明通過一種簡(jiǎn)單、高效的方法從干腌火腿中得到5種具有黃嘌呤氧化酶抑制活性的肽。

技術(shù)特征：

1.一種干腌火腿復(fù)合活性肽，其特征在于：所述干腌火腿復(fù)合肽包括：leu-leu-leu-leu-leu-his-gla、glu-his-val-glu-pro-glu-glu、leu-leu-phe-val-leu-pro-leu、leu-leu-phe-lys-phe-leu、l?e?u-l?e?u-l?e?u-l?e?u-c?y?s-as?p-c?y?s共5個(gè)肽。

2.權(quán)利要求1所述干腌火腿復(fù)合活性肽在制備降尿酸藥物中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述干腌火腿復(fù)合活性肽的制備方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述干腌火腿復(fù)合活性肽的制備方法，其特征在于：步驟(1)中鹽酸的濃度為0.2mmol/l。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述干腌火腿復(fù)合活性肽的制備方法，其特征在于：步驟(1)中乙醇的濃度為70％，用量為上清液ⅱ體積的2～2.5倍。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述干腌火腿復(fù)合活性肽的制備方法，其特征在于：步驟(1)中超濾膜的截留分子量為3k?da。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述干腌火腿復(fù)合活性肽的制備方法，其特征在于：步驟(2)中用葡聚糖凝膠柱純化過程中上樣體積為200μl，流速為0.3ml/min。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述干腌火腿復(fù)合活性肽的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述葡聚糖凝膠柱為sephadex?g15。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種干腌火腿復(fù)合活性肽的應(yīng)用及其制備，屬于保健食品及藥品領(lǐng)域。該活性肽包括5個(gè)新肽，序列為：LLLLLHA(Leu?Leu?Leu?Leu?Leu?His?Gla)、EHVEPEE(Glu?His?Val?Glu?Pro?Glu?Glu)、LLFVLPL(Leu?Leu?Phe?Val?Leu?Pro?Leu)、LLPKPL(Leu?Leu?Phe?Lys?Phe?Leu)、LLLLCDC(Leu?Leu?Leu?Leu?Cys?Asp?Cys)，制備方法為：將干腌火腿與酸溶液混合、均質(zhì)，攪拌提取后過濾、離心、超濾，通過葡聚糖凝膠柱進(jìn)一步純化，用LC?MS/MS鑒定得到干腌火腿降尿酸活性肽，干腌火腿降尿酸活性肽對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制IC50值為8.32mg/mL～13.56mg/mL，同時(shí)具有良好的抗氧化活性。本發(fā)明篩選出的降尿酸肽具有活性高、制備方法簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，可用于制備食品和藥品。

技術(shù)研發(fā)人員：李莉蓉,姚登杰,黃銳,張文文,李雯雯,曾春銀,曹建新
受保護(hù)的技術(shù)使用者：昆明理工大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10