本發(fā)明涉及一種sbv蛋白，具體涉及一種重組sbv?n蛋白及其制備與應用。

背景技術(shù)：

1、我國將sbd列為海關(guān)入境必檢二類疫病，目前國內(nèi)尚無該病報道，無法獲取自然感染sbv的牛、羊陽性血清樣品。文獻1(wernike?k,nikolinv?m,hechinger?s,etal.inactivated?schmallenberg?virus?prototype?vaccines[j].vaccine,2013,31(35):3558-3563)以氫氧化鋁膠和皂苷為免疫佐劑制備了5種sbv亞單位疫苗，對犢牛和綿羊進行免疫，每隔三周接種兩次疫苗，結(jié)果顯示2免21d后綿羊和牛體內(nèi)的抗體水平明顯升高，且沒有動物出現(xiàn)不良反應。有研究表明羊群的感染sbv的幾率通常低于牛群，而山羊群的感染率比綿羊群的更低。目前研究大都基于感染sbv牛的血清樣本，而源自羊的樣本則為畸形胎兒新生羔羊的組織樣本。然而目前國內(nèi)暫無制備牛、羊sbv陽性血清方法的相關(guān)報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種重組sbv?n蛋白及其制備與應用，解決了現(xiàn)有技術(shù)沒有牛、羊sbv?n蛋白陽性血清制備方法的問題，通過轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、誘導和純化制得的重組sbv?n蛋白，以牛羊陽性血清均能與重組sbv?n蛋白發(fā)生特異性反應，證明本發(fā)明成功制備了牛、羊sbvn蛋白陽性血清。

2、為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種重組sbv?n蛋白，該重組sbv?n蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.3所示，其編碼基因的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。

3、本發(fā)明提供了一種如所述的重組sbv?n蛋白的制備方法，該方法包含：

4、(1)將核苷酸序列如seq?id?no.2所示的pet-28a-sbv?n重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌bl21(de3)感受態(tài)細胞中，涂布含卡那霉素抗性的lb固體平板上，培養(yǎng)，得到培養(yǎng)菌；

5、(2)將培養(yǎng)菌接種于含卡那霉素抗性的lb液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)od600nm約為0.6～0.8時加入異丙基-β-d-硫代半乳糖苷，于18℃、150r/min下過夜誘導，4℃離心收集，pbs清洗后超聲破碎，純化。

6、優(yōu)選地，步驟(1)中，所述培養(yǎng)的溫度為37℃、轉(zhuǎn)速為200r/min。

7、優(yōu)選地，步驟(2)中，所述培養(yǎng)的溫度為37℃、轉(zhuǎn)速為200r/min。

8、優(yōu)選地，步驟(2)中，所述接種是將培養(yǎng)菌按1∶100體積比接種于含卡那霉素抗性的lb液體培養(yǎng)基中；所述異丙基-β-d-硫代半乳糖苷的濃度為0.1～1mmol/l。

9、更優(yōu)選地，所述異丙基-β-d-硫代半乳糖苷的濃度為0.4mmol/l。

10、本發(fā)明提供了一種如所述的制備方法中所述的重組表達載體。

11、優(yōu)選地，所述的重組表達載體包括pet-28a(+)原核表達載體。

12、本發(fā)明提供了一種如所述的制備方法中所述的重組質(zhì)粒，所述重組質(zhì)粒是由如seq?id?no.1所示的核苷酸序列的5'末端和3'末端引入ecor?i、hindⅲ酶切位點與pet-28a(+)原核表達載體相連得到的。

13、本發(fā)明提供了一種如所述的重組sbv?n蛋白在研制sbd抗體檢測試劑盒中的應用。

14、優(yōu)選地，該應用包含所述重組sbv?n蛋白鑒定的sbv陽性血清。

15、本發(fā)明的一種重組sbv?n蛋白及其制備與應用，解決了現(xiàn)有技術(shù)沒有牛、羊sbv陽性血清制備方法的問題，具有以下優(yōu)點：

16、1、本發(fā)明通過轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、誘導和純化制得的重組sbv?n蛋白的氨基酸序列如seqid?no.3所示，其編碼基因的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。

17、2、本發(fā)明將重組sbvn蛋白為抗原的western?blot實驗，結(jié)果顯示，陰性血清無條帶，而以牛羊陽性血清為一抗的western?blot結(jié)果圖中可見單一條帶，表明兩者均能與重組sbv?n蛋白發(fā)生特異性反應。證明本發(fā)明成功制備了牛、羊sbv陽性血清。

技術(shù)特征：

1.一種重組sbvn蛋白，其特征在于，該重組sbvn蛋白的氨基酸序列如seqid?no.3所示，其編碼基因的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組sbvn蛋白的制備方法，其特征在于，該方法包含：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述培養(yǎng)的溫度為37℃、轉(zhuǎn)速為200r/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述培養(yǎng)的溫度為37℃、轉(zhuǎn)速為200r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述接種是將培養(yǎng)菌按1∶100體積比接種于含卡那霉素抗性的lb液體培養(yǎng)基中；所述異丙基-β-d-硫代半乳糖苷的濃度為0.1～1mmol/l。

6.一種如權(quán)利要求2～5任一項所述的制備方法中所述的重組表達載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組表達載體，其特征在于，所述的重組表達載體包括pet-28a(+)原核表達載體。

8.一種如權(quán)利要求2～5任一項所述的制備方法中所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒是由如seq?id?no.1所示的核苷酸序列的5'末端和3'末端引入ecori、hindⅲ酶切位點與pet-28a(+)原核表達載體相連得到的。

9.一種如權(quán)利要求1所述的重組sbv?n蛋白在研制sbd抗體檢測試劑盒中的應用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應用，其特征在于，該應用包含所述重組sbvn蛋白鑒定的sbv陽性血清。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種重組SBVN蛋白及其制備與應用，該重組SBVN蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，其編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。該蛋白的制備方法為將pET?28a?SBVN重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)感受態(tài)細胞中，涂布含卡那霉素抗性的LB固體平板上培養(yǎng)，接種于含同上抗性的LB液體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)至OD<subgt;600nm</subgt;約為0.6～0.8時加入IPTG，過夜誘導。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)沒有牛、羊SBV?N蛋白陽性血清制備方法的問題，以N蛋白免疫牛、羊的獲得的SBV陽性血清均能與得到的重組SBV?N蛋白發(fā)生特異性反應，成功制備了牛、羊SBVN蛋白陽性血清。

技術(shù)研發(fā)人員：趙建軍,孫睿雪,李陽,曹家慧
受保護的技術(shù)使用者：黑龍江八一農(nóng)墾大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/17