本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)微生物，具體涉及一種貝萊斯芽孢桿菌a13及其在煙草促生防治葉斑病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、煙草(nicotiana?tabacuma)為茄科(solanaceae)煙草屬(nicotiana)一年生草本植物。煙草是我國重要的經(jīng)濟作物之一，其種植面積廣、產(chǎn)量大，極大促進了我國經(jīng)濟發(fā)展。煙草主要烘烤其葉片，制成卷煙、旱煙等，除供人吸食外，煙草還具有行氣止痛、利濕消腫、發(fā)散祛濕等藥用功效，用途十分廣泛。

2、煙草在其生長過程中易受各種病原菌的侵襲，導(dǎo)致多種病害的發(fā)生。目前我國已有記載的煙草侵染性病害有60余種，其中葉部病害主要有煙草靶斑病、煙草黑脛病、煙草赤星病、煙草炭疽病等，以煙草靶斑病、煙草赤星病為主，嚴(yán)重影響了煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量。

3、煙草靶斑病病原有性世代為瓜亡革菌thanatephorus?cucumeris，無性世代為立枯絲核菌rhizoctonia?solani。煙草靶斑病侵染煙草葉片，煙草苗期的癥狀是出現(xiàn)生長不良、黃色或矮小的煙草幼苗，在成熟期，煙草靶斑病侵染煙草葉片，初為水漬狀病斑，發(fā)病嚴(yán)重后，病斑會逐漸擴大至近圓形病斑，病斑中間出現(xiàn)壞死中心，易破碎脫落。

4、煙草赤星病的病原為煙草赤星病菌alternaria?alternata。發(fā)病癥狀主要體現(xiàn)在煙草葉片上，發(fā)病初期在葉片上形成黃褐色的圓形小斑，隨病情的加重逐漸變?yōu)楹种磷睾稚?。邊緣輪廓明顯，具有明顯的同心輪紋。潮濕時會加快病斑發(fā)展，菌落中央會出現(xiàn)黑色霉?fàn)钗?，干燥時病斑會出現(xiàn)破碎脫落。近幾年，由煙草靶斑病菌、煙草赤星病菌引起的煙草葉部病害在我國煙草主產(chǎn)區(qū)發(fā)病率逐年上升，給煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。

5、貝萊斯芽孢桿菌bacillus?velezensis屬芽孢桿菌科芽孢桿菌屬。已報道其對甘薯莖腐病菌(dickeya?dadantii)、番茄青枯病菌(ralstonia?solanacearum)、尖孢鐮刀菌(fusarium?oxysporum)具有良好的抑菌活性，同時也具有較好的促生能力，是一種極具開發(fā)潛力的生防細(xì)菌。國外報道了貝萊斯芽孢桿菌在養(yǎng)殖和作物栽培上的促生作用。muhammad?fazle?rabbee等研究表明貝萊斯芽孢桿菌對柑橘黃單胞菌引起的柑橘細(xì)菌性潰瘍病有較好的抑菌作用，是一種安全有效且環(huán)境友好的生防菌；fernandez?m等研究發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌ah2對稻瘟病菌、腐霉菌等具有很好的抑菌作用。在國內(nèi)，馬爽通過田間試驗研究貝萊斯芽孢桿菌對馬鈴薯的防病及促生作用，發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌k-9從馬鈴薯的出苗期至成熟期均提高了植株的干物質(zhì)量，提升了株高和莖粗指標(biāo)，增加了葉片數(shù)和葉面積指數(shù)。安婉寧研究發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌ct2628可以促進植物生長，誘導(dǎo)植物抗鹽、抗干旱脅迫；王松通過室內(nèi)試驗發(fā)現(xiàn)貝萊斯芽孢桿菌yq1對香蕉枯萎病菌的具有良好的拮抗效果，主要是通過抑制香蕉枯萎病菌分生孢子萌發(fā)，阻礙侵染結(jié)構(gòu)形成和生長，進而影響菌體發(fā)育。

6、目前對于煙草靶斑病、煙草赤星病的防治，主要依賴化學(xué)防治，但農(nóng)藥具有易殘留、對人畜有毒害等弊端。因而綠色、無污染的生物防治成為未來防治煙草病害的主要方向。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供一種貝萊斯芽孢桿菌a13及其在煙草促生防治葉斑病中的應(yīng)用，目的是促進煙草生長和增產(chǎn)，防治由煙草靶斑病菌引起的煙草靶斑病、煙草赤星病菌引起的煙草赤星病，降低煙草農(nóng)藥殘留量。

2、本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，一種貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?velezensis)a13，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為：cgmcc?no.28119，保藏日期2023年8月7日，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。

3、所述貝萊斯芽孢桿菌a13在煙草促生長和防治煙草靶斑病、煙草赤星病中的應(yīng)用。

4、含有所述貝萊斯芽孢桿菌a13的菌劑。

5、所述的菌劑的活菌數(shù)為107cfu/ml。

6、所述菌劑的制備方法，包括以下步驟：

7、(1)菌株活化：將貝萊斯芽孢桿菌a13接種于固體培養(yǎng)基上，于28℃下培養(yǎng)1-2天；

8、(2)發(fā)酵種子液培養(yǎng)：將上述活化菌株接種于液體培養(yǎng)基中，于28℃條件下在搖床中180r/min振蕩培養(yǎng)24h，制得種子液；

9、(3)菌劑發(fā)酵：將種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)液中，于28℃條件下在搖床中180r/min振蕩培養(yǎng)24h，制得貝萊斯芽孢桿菌a13的菌劑。

10、所述步驟(1)中所述固體培養(yǎng)基為：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，nacl?5.0g，瓊脂粉15g，蒸餾水1000ml，ph7.0。

11、所述步驟(2)中所述種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基為：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，nacl5.0g，蒸餾水1000ml，ph7.0。

12、所述步驟(3)中所述菌劑配方為：葡萄糖20.0g，蛋白胨50.0g，甘油5.0g，k2hpo4·3h20?1.5g，mgso4·7h20?1.5g，蒸餾水1000ml，ph7.0。

13、所述步驟(3)中種子液的接種量為4％。

14、所述菌劑在煙草促生長和防治煙草靶斑病、煙草赤星病中的應(yīng)用。

15、本發(fā)明的有益效果是：

16、本發(fā)明所述貝萊斯芽孢桿菌a13及其菌劑對煙草靶斑病菌、煙草赤星病菌有較好的拮抗作用，并且在煙草離體葉片接種中，對煙草靶斑病、煙草赤星病具有良好的防治效果，且有一定的促生、增產(chǎn)作用。降低化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低農(nóng)藥在煙草中的殘留量，并且對煙草生長安全無藥害，對人畜無毒，對環(huán)境無污染，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。

技術(shù)特征：

1.一種貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?velezensis)a13，其特征在于：其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為：cgmcc?no.28119，保藏日期2023年8月7日，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。

2.如權(quán)利要求1所述貝萊斯芽孢桿菌a13在煙草促生長和防治煙草靶斑病、煙草赤星病中的應(yīng)用。

3.含有權(quán)利要求1所述貝萊斯芽孢桿菌a13的菌劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑，其特征在于，所述菌劑的活菌數(shù)為107cfu/ml。

5.如權(quán)利要求3或4所述菌劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述固體培養(yǎng)基為：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，nacl?5.0g，瓊脂粉15g，蒸餾水1000ml，ph7.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基為：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，nacl?5.0g，蒸餾水1000ml，ph7.0。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述菌劑配方為：葡萄糖20.0g，蛋白胨50.0g，甘油5.0g，k2hpo4·3h20?1.5g，mgso4·7h20?1.5g，蒸餾水1000ml，ph7.0。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中種子液的接種量為4％。

10.如權(quán)利要求3或4所述菌劑在煙草促生長和防治煙草靶斑病、煙草赤星病中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及貝萊斯芽孢桿菌A13及其在煙草促生防治葉斑病中的應(yīng)用，屬于農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域。貝萊斯芽孢桿菌A13在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為：CGMCC?No.28119，保藏日期2023年8月7日，其在煙草促生長和防治煙草靶斑病、煙草赤星病中的應(yīng)用。本發(fā)明其菌劑對煙草靶斑病菌、煙草赤星病菌有較好的拮抗作用，并且在煙草離體葉片接種中，對煙草靶斑病、煙草赤星病具有良好的防治效果，且有一定的促生、增產(chǎn)作用。降低化學(xué)農(nóng)藥的使用，降低農(nóng)藥在煙草中的殘留量，并且對煙草生長安全無藥害，對人畜無毒，對環(huán)境無污染，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。

技術(shù)研發(fā)人員：高潔,胡名源,劉麗萍,張繽予,郭舒柳,馮時,蘭金玲,楊麗娜,周建國
受保護的技術(shù)使用者：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10